Účinky cvičení během těhotenství na zdraví matky a plodu (GESTAFIT)

Experimentální: Gestafitos

Toto je longitudinální studie, která je pokračováním projektu GESTAtion and FITness (GESTAFIT). Hlavním cílem je vyhodnotit vliv souběžného programu fyzického cvičení během těhotenství (vyvinutého v rámci projektu GESTAFIT) na tělesné složení, fyzickou zdatnost, strukturu mozku a motorický, kognitivní a jazykový vývoj potomka ve věku čtyř let.

Jiný: Cvičební intervence

Cvičební intervence bude prováděna ve dvou skupinách tak, že každá skupina bude mít 12-13 účastníků. Skupiny budou trénovat 3 dny/týden (60 minut na sezení) od 16. týdne gestace do porodu. Cvičební intervenční skupina projde různými fázemi výcviku: a) Fáze učení: která bude zahrnovat plán intervence, cíle, na kterých chceme pracovat, a jak to budeme provádět; b) Fáze pohybového učení: teoretické a praktické hodiny s vysvětlením pohybů a základních ergonomických vzorců; a c) Fáze tělesné zdatnosti: s tréninky zaměřenými na zlepšení kondice a hubnutí a tréninky zaměřené na správnou mobilizaci pánve pro porod. Intenzita bude přizpůsobena během cvičebního programu na základě týdne těhotenství a každé těhotné Tepová frekvence. Lekce budou sestávat ze smíšené práce, složené z okruhů, kde bude realizována svalová i kardiovaskulární kondice.

Jiný: Kontrolní skupina

Obvyklá péče, nikoli cvičení.

Experimentální: Placentraining

Toto je retrospektivní studie, jejímž cílem je analyzovat stav placenty žen zapojených do projektu GESTAFIT, v rámci kterého byl vyvinut souběžný program tělesného cvičení. Tento přísný design nám umožní otestovat naši hlavní hypotézu, že cvičení během těhotenství povede k většímu zlepšení v metabolických drahách placenty spojených s těhotenskými komplikacemi a je spojeno s lepšími výsledky těhotenství a novorozence.

Jiný: Cvičební intervence

Cvičební intervence bude prováděna ve dvou skupinách tak, že každá skupina bude mít 12-13 účastníků. Skupiny budou trénovat 3 dny/týden (60 minut na sezení) od 16. týdne gestace do porodu. Cvičební intervenční skupina projde různými fázemi výcviku: a) Fáze učení: která bude zahrnovat plán intervence, cíle, na kterých chceme pracovat, a jak to budeme provádět; b) Fáze pohybového učení: teoretické a praktické hodiny s vysvětlením pohybů a základních ergonomických vzorců; a c) Fáze tělesné zdatnosti: s tréninky zaměřenými na zlepšení kondice a hubnutí a tréninky zaměřené na správnou mobilizaci pánve pro porod. Intenzita bude přizpůsobena během cvičebního programu na základě týdne těhotenství a každé těhotné Tepová frekvence. Lekce budou sestávat ze smíšené práce, složené z okruhů, kde bude realizována svalová i kardiovaskulární kondice.

Jiný: Kontrolní skupina

Obvyklá péče, nikoli cvičení.

Citlivost na inzulín odvozená z hodnocení homeostatického modelu pro inzulínovou rezistenci (HOMA-IR)

Inzulinová senzitivita bude odvozena z hodnocení homeostatického modelu inzulinové rezistence (HOMA-IR), které bude vypočítáno pomocí vzorce [inzulín nalačno (μIU/ml) x glukóza nalačno (mg/dl)]/405.

Přírůstek hmotnosti matky (kg)

Přírůstek hmotnosti matky bude definován jako změna hmotnosti od základního měření do posledního měření

Novorozenecký inzulin-glukózový index

Senzitivita novorozence na inzulín bude hodnocena pomocí poměru glukóza/inzulin.

Systolický a diastolický krevní tlak (mmHg)

Systolický a diastolický krevní tlak (mmHg) bude měřen po 5 minutách klidu, ve 2 různých příležitostech (s 2 minutami mezi zkouškami), se sedící osobou (Omron Health Care Europe B.V. Hoolddorp). Pro analýzu bude vybrána nejnižší hodnota ze dvou pokusů.

Klidová tepová frekvence (bpm)

Klidová srdeční frekvence (bpm) bude měřena po 5 minutách odpočinku, ve 2 různých příležitostech (s 2 minutami mezi zkouškami), se sedící osobou (Omron Health Care Europe B.V. Hoolddorp). Pro analýzu bude vybrána nejnižší hodnota ze dvou pokusů.

Skóre středomořské stravy

K posouzení dodržování tradičního středomořského stravovacího režimu bude použito skóre středomořské stravy ve verzi přizpůsobené specifickým potřebám během těhotenství na Fe, Ca a kyselinu listovou.

Kardiorespirační fitness (Vo2max)

Modifikovaný Bruce protokol bude proveden k odhadu maximálního příjmu kyslíku (VO2max) a bude použit jako měřítko kardiorespirační zdatnosti.

Kardiorespirační zdatnost (metry v 6minutovém testu chůze)

Provádíme 6minutový test chůze, který měří maximální vzdálenost (v metrech), kterou může každý účastník ujít za 6 minut po 45,7 m obdélníkové trati.

Svalová síla (kg)

Jako měřítko síly bude použit test pevnosti rukojeti

Pružnost (cm)

Zkouška poškrábání na zadní straně bude použita jako míra flexibility

Fyzická aktivita a sedavé chování (v minutách)

Akcelerometrie bude sloužit k objektivnímu posouzení fyzické aktivity a doby sezení. Ženy budou požádány, aby nosily tříosý akcelerometr (ActiSleep+, Pensacola, Florida, Spojené státy americké) po dobu 9 po sobě jdoucích dnů, počínaje dnem, kdy obdrží monitor (např. účastníci, kteří obdrží akcelerometr v pondělí, ponesou zařízení do úterý příštího týdne). Účastníci budou instruováni, aby měli akcelerometr po celý den (24 hodin) na zápěstí připevněném elastickým páskem. Bude vypočítána doba (v minutách) v PA s mírnou, střední a středně silnou intenzitou a doba sezení. Tento akcelerometr byl dříve používán v těhotenství s podobnou metodologií, jaká je popsána v tomto protokolu.

Chování při spánku (prostřednictvím akcelerometrie)

Chování související se spánkem, jako je nástup spánku, spánková latence, celková doba spánku, počet a trvání probuzení a účinnost spánku, budou objektivně vypočítány pomocí tříosého akcelerometru (ActiSleep+, Pensacola, Florida, Spojené státy americké). Analýza dat takových dat akcelerometrie ActiSleep bude provedena prostřednictvím jeho specifického softwaru (Actilife).

Pittsburghský index kvality spánku

Bude sloužit k hodnocení kvality spánku a poruch spánku v časovém intervalu 1 měsíce.

Dotazník příznaků nespavosti

Přítomnost příznaků insomnie bude měřena pomocí dotazníku Insomnia Symptoms Questionnaire, validovaného u těhotných žen.

Kvalita života (krátkodobý zdravotní průzkum 36)

K hodnocení kvality života související se zdravím použijeme Short-Form Health Survey 36.

Epidemiologické studie – dotazník škály deprese

Úroveň prenatální deprese u těhotných bude hodnocena dotazníkem Centra pro epidemiologické studie – škála deprese, který je ověřený a široce používaný v těhotenství.

Státní rysový index úzkosti.

Úrovně úzkosti budou posuzovány pomocí státního indexu úzkosti.

Dotazník o syndromu neklidných nohou

„Syndrom neklidných nohou“ do značné míry určuje kvalitu života mnoha těhotných a souvisí s jejich mírou deprese a kvalitou spánku. K posouzení přítomnosti a závažnosti tohoto syndromu bude použita španělská verze dotazníku Detention of Restless Legs Syndrome.

Oswestry Disability Index Index

Bolest v kříži bude hodnocena podle španělské verze skóre Oswestry Disability Index

Vizuální analogová stupnice bolesti

Intenzita bolesti v kříži bude také hodnocena pomocí vizuální analogové stupnice bolesti

6-položkový index ženské sexuální funkce

K posouzení sexuální funkce bude použit 6-položkový index ženské sexuální funkce. Tento nástroj se skládá ze šesti otázek: touha, vzrušení, lubrikace, orgasmus, spokojenost a bolest. Každá otázka může být bodována od 0 do 5 a poté sečtena, aby se získalo celkové skóre.

Pozitivní zdraví

„Pozitivní zdraví“ bude hodnoceno prostřednictvím následujících dotazníků:

1. Škála meta-nálady vlastností
2. Plán pozitivních a negativních vlivů
3. Měřítko spokojenosti se životem
4. Desetipoložková Connor-Davidsonova škála odolnosti

Hematologie

Počet erytrocytů, hematokrit, hemoglobin, krevní destičky, leukocyty a střední korpuskulární objem erytrocytů budou kvantifikovány pomocí Coulter (Brand).

Lipidový profil (v mateřské a pupečníkové krvi)

Celkový cholesterol a triglyceridy v plazmě, lipoprotein s vysokou hustotou a lipoprotein s nízkou hustotou (vše v mg/dl) budou hodnoceny pomocí autoanalyzátoru (Hitachi-Roche p800, F. Hoffmann-La Roche Ltd. Švýcarsko)

Glykemický profil (v mateřské a pupečníkové krvi)

Plazmatická glukóza, inzulín a glykosylovaný hemoglobin budou hodnoceny pomocí autoanalyzátoru (Hitachi-Roche p800, F. Hoffmann-La Roche Ltd. Švýcarsko)

Celková antioxidační kapacita plazmy (v mateřské a pupečníkové krvi)

Bude měřena pomocí komerční soupravy (spektrofotometrie).

Antioxidanty rozpustné v plazmě (v mateřské a pupečníkové krvi)

Pomocí hmotnostní spektrometrie budou měřeny plazmatický vitamín E, retinol, karoten, koenzym Q10 a koenzym Q9

Aktivita antioxidačních enzymů (v mateřské a pupečníkové krvi)

Enzymy eritrocitové membránové katalázy, glutathionperoxidázy a superoxiddismutázy budou měřeny spektrofotometricky.

Karbonylové proteiny (v mateřské a pupečníkové krvi)

Měření karbonylových proteinů bude provedeno pomocí komerční soupravy (spektrofotometrie).

Oxidační poškození lipidů (v mateřské a pupečníkové krvi)

Měření 4-hydroxynonenalu a isoprostanů v moči a plazmě a hydroperoxidů v plazmě a membráně erytrocytů pomocí komerčních souprav (spektrofotometrie a ELISA)

Oxidační poškození DNA (v mateřské a pupečníkové krvi)

měření 8-hydroxyguanosinu v moči a plazmě komerčními soupravami (ELISA).

Pro- a protizánětlivý signál (v mateřské a pupečníkové krvi)

Některé prozánětlivé a protizánětlivé cytokiny mateřské a pupečníkové plazmy (IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ a TNF-α, IL-1ra a TNF Srii α ), některé adipokiny (adiponektin, adipsin, rezistin, PAI-aktivní, inzulín a leptin) a myokiny (irisin) budou měřeny využitím technologie Luminex xMAP.

Kostní biomarkery (v mateřské a pupečníkové krvi)

Pomocí technologie Luminex xMAP budou měřeny různé relevantní biomarkery související s kostním metabolismem (ACTH, DKK-1, FGF-23, Osteokalcin, OPN-Osteopontin, Osteoprotegerin, PTH a SOST).

Exprese proteinů souvisejících s adipozitou (v mateřské a pupečníkové krvi)

glukokortikoidní receptor; receptor aktivovaný proliferací peroxisomů (PPAR); beta-11 hydroxysteroid dehydrogenáza typu I (11βHSD1) a beta-11 hydroxysteroid dehydrogenáza typu II (11βHSD2) budou hodnoceny v mateřské a pupečníkové krvi a v ústní sliznici matky a novorozence.

Kromě toho byly vybrány 4 geny vysoce zapojené do fetálního a postnatálního vývoje tukové tkáně; dva jsou receptory: glukokortikoidní receptor a PPAR-y a dva jsou metabolické enzymy: beta-11 hydroxysteroid dehydrogenáza typu I nebo 11pHSD1 a 11 beta-hydroxysteroid dehydrogenáza typu II nebo 11pHSD2. Velmi důležité jsou PPAR-y1 a PPAR-y2, které jsou generovány ze stejného genu alternativním použitím promotoru a mRNA. Budeme měřit tyto proteiny a také koncentrace paraoxonázy/arylesterázy 1 (PON1) v mateřské a pupečníkové plazmě pomocí polymerázové řetězové reakce a techniky Western Blot.

Antropometrie a složení těla matky a dítěte (Gestafitos)

Výška matky a dítěte bude zaznamenána pomocí váhy (Seca 22, Hamburk).
U matky i dítěte bude provedena komplexní analýza tělesného složení (DXA, Hologic Discovery QDR, Nasdaq).
Budeme také zaznamenávat hmotnost (Inbody R20, Biospace, Korea) a obvod pasu a krku u matky i dítěte.

Krevní tlak a klidová srdeční frekvence matky a dítěte (Gestafitos)

Systolický a diastolický krevní tlak spolu se srdeční frekvencí budou měřeny třikrát po 5 minutách odpočinku (Omron Hoolddorp) u matky i dítěte.

Nutriční stav matky a dítěte (Gestafitos)

Bude administrován dotazník frekvence konzumace potravin a dotazník adherence ke středomořské stravě. Bude také zaznamenáno užívání nutričních doplňků.

Fyzická aktivita, sedavé chování a kvalita spánku matky a dítěte

Fyzickou aktivitu, sedavé chování a spánkové návyky (latence, účinnost atd.) budeme hodnotit pomocí akcelerometrů (ActigraphGT3X+, Pensacola, Florida, USA) nošených na zápěstí po devět po sobě jdoucích dnů. Změny zrychlení budou zaznamenávány v 5sekundových epochách u dětí a v 60sekundových epochách u matek. Budou shromažďována data o celkovém objemu a intenzitě aktivity (průměrná intenzita fyzické aktivity), energetickém výdeji a počtu minut denně strávených při různých intenzitách: nízká (sedavá), lehká, střední, vysoká a střední až vysoká. Kvalita spánku bude také zaznamenávána pomocí speciálního softwaru Actisleep.

Zdravotně orientovaná fyzická zdatnost dítěte: PREFIT baterie

Svalová síla, kardiorespirační zdatnost, rovnováha, rychlost a motorická koordinace-obratnost budou hodnoceny pomocí následujících testů z PREFIT baterie: 20m člunkový běh, ruční dynamometrie, skok daleký z místa, test rovnováhy na jedné noze a 4x10m člunkový běh, v tomto pořadí. PREFIT baterie je proveditelný, spolehlivý, maximální a validní nástroj pro hodnocení fyzické zdatnosti u dětí předškolního věku.

Struktura mozku, průtok krve mozkem a funkce mozku pomocí strukturální a funkční magnetické rezonance (Gestafitos)

MRI bude provedeno ve Výzkumném centru pro mozek, mysl a chování (CIMCYC) na Granadské univerzitě. Dr. Irene Esteban-Cornejo, členka týmu, koordinovala oblast neurozobrazování v dříve financovaných studiích (např. projekt ACTIVEBRAINS, randomizovaná kontrolovaná studie hodnotící vliv cvičení na mozek u dětí). Absolvovala dvě výzkumné stáže na Monash Institute of Cognitive and Clinical Neurosciences v Austrálii, má magisterský titul v pokročilé analýze MRI a je první autorkou prvních dvou článků o mozku z projektu ACTIVEBRAINS, oba publikované v prestižním časopise Neuroimage. Dr. Esteban-Cornejo také pracovala s předními odborníky na cvičení a zdraví mozku (Erickson KI, Kramer AF a Hillman CH) na Severovýchodní univerzitě a Pittsburské univerzitě. Dr. Erickson a neurovědkyně Marina López-Solà jsou také součástí současného projektového týmu.

Kognice (Gestafitos)

Budou hodnoceny tři klíčové aspekty exekutivní funkce:

1. Kognitivní inhibice: Hodnocena pomocí Stroopova testu, který zahrnuje tři podmínky vyhodnocující interferenci při identifikaci barvy inkoustu slov, která neodpovídají jejich významu.

2. Kognitivní flexibilita: Hodnocena dvěma nezávislými testy:

   Test designové plynulosti: Skládá se ze tří postupných podmínek, kde účastníci vytvářejí jedinečné návrhy podle různých pravidel během 60 sekund, hodnotí flexibilitu, kreativitu a generování vizuálních vzorů.

   Test stopování: Pět podmínek hodnotících rychlost vizuálního vyhledávání, pozornost, mentální flexibilitu, pracovní paměť a motorickou funkci.

3. Pracovní paměť: Hodnocena pomocí počítačového úkolu n-back (viz část MRI), který vyhodnocuje schopnost současně ukládat a zpracovávat informace.
4. Inteligence: Hodnocena Kaufman Brief Intelligence Test (KBIT), který zahrnuje subtesty pro verbální a neverbální inteligenci.

Akademický Výkon (Gestafitos)

1. Baterie Woodcock-Muñoz III: Španělská adaptace Woodcock-Johnson III (WJ III), složená z 22 subtestů, které hodnotí jazyk, matematiku a vědu. Vybrané subtesty budou použity k hodnocení matematické plynulosti, počítání, porozumění a psaní.
2. Školní známky: Rodiče budou také požádáni o poskytnutí školních známek dítěte z akademického roku (let), během kterého probíhají hodnocení.

Další motorické, kognitivní a jazykové vývojové škály:

1. Bayleyho škály vývoje kojence, třetí vydání (BSID-III)
2. Wechslerova inteligenční škála pro děti
3. BENCI baterie (Počítačová neuropsychologická vyšetřovací baterie pro děti)

Genetické a epigenetické analýzy (Gestafitos)

Vzorky bukální sliznice budou odebrány dětem za účelem analýzy exprese polymorfismu genu FTO rs9939609 a polymorfismu genu MC4R rs17782313. DNA bude extrahována ze slin pomocí nosičů Whatmann® papíru a organických extrakčních metod optimalizovaných pro kvalitu a množství. Vzorky budou kvantifikovány pomocí spektrofotometru NanoDrop 2000 (ThermoScientific) a normalizovány na ~5 ng/µL před genotypizací pomocí sond TaqMan (Applied Biosystems) na přístroji RealTime ABI PRISM® 7900 HT. Nepodařené vzorky budou amplifikovány a sekvenovány pomocí specifických primerů a analyzovány pomocí 3130 HID Genetic Analyzer (Applied Biosystem). DNA a RNA budou extrahovány pomocí souprav QIAamp DNA Mini Kit a DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen) a zpracovány robotem Qiacube.

Oxidační stres a antioxidační obrana (Placentraining)

Obsah tuku-rozpustných antioxidantů (tokoferol, koenzym Q10 a Q9 a retinol) v placentě bude analyzován pomocí HPLC, zatímco oxid dusnatý a celková antioxidační kapacita metodou ABTS.

• Oxidační poškození proteinů: karbonylové proteiny pomocí komerčních souprav (spektrofotometrie).
• Oxidační poškození lipidů: 4-hydroxynonenal a isoprostany pomocí komerčních souprav (spektrofotometrie a ELISA). Oxidační poškození DNA: 8-hydroxyguanosin pomocí komerčních souprav (ELISA).

Exprese markerů biogeneze, autofagie, mitochondriálních fúzně-fisijních procesů (Placentraining)

Změny v mitochondriální dynamice a jejich kontrole kvality jsou klíčovým aspektem k vysvětlení pozorovaných zjištění.

Proto pomocí Western-blotování nebo RT-PCR byly zkoumány mitochondriální procesy štěpení (Drp1, Fis1 a OPA1), fúze (Mfn1 a Mfn2), biogeneze (PGC1alpha, Tfam, Sirt1, Nrf1, Nrf2) a autofagie (PARKIN2, PINK1, Beclin-1, ATG8, ATG5, ATG12, VDAC1).

Stopové a ultrastopové minerály (Placentraining)

Stanovení celkového obsahu těchto esenciálních (Ca, Mg, Mn, Fe, Cu, Zn, Se) nebo toxických prvků (Hg, V, Cr, As, Cd, Pb, Ni) ve vzorcích placenty bude provedeno přístrojem ICP-MS (Agilent 7500, Agilent Technologies, Tokio, Japonsko) osazeným nebulizátorem typu Meinhard (Glass Expansion, Romainmotier) a vybaveným kolizní celou s heliem (He).

Genomická a metylační (Placentraining)

Vzorky budou zpracovány tak, jak bylo dříve popsáno v části "Genetické analýzy". Genomická a metylační analýza bude provedena metodou pyrosekvenování. Toto bude provedeno pro detekci genů FTO a MC4R. Genomická DNA z placenty bude izolována pomocí sady DNeasy Blood&Tissue Kit podle doporučeného protokolu (Qiagen N.V, Hi.GE). Po kontrole kvality a množství DNA budou promotory genů FTO a MC4R amplifikovány pomocí předpřipravených PyroMark CpG testů. Amplifikace oblasti pomocí těchto primerů nám umožní přímo kvantifikovat metylační stav CG v dané oblasti. Nejprve amplifikujeme oblasti zájmu FTO a MC4R pomocí PCR s použitím PyroMark PCR Kit (QIAGEN N.V, Hi.GE), který umožňuje označování CG nukleotidů náchylných k metylaci. Reakční produkty (jeden na vzorek a gen) budou purifikovány a použity pro sekvenační reakci.

Analýza exprese kandidátních genů a malých RNA (Placentraining)

Pro lepší pochopení metabolických drah, které jsou do procesu zapojeny, provedeme studii kandidátních genů, stejně jako stanovení miRNA, které nám umožní stanovit vztah genotyp-vyšetření-prostředí (pomocí analýzy sekvenování malé RNA).

Pro analýzu mRNA a miRNA bude placentární RNA získána pomocí sady "RNeasy Mini" (Qiagen) podle pokynů výrobce. Integrita RNA bude analyzována pomocí "RNA 6000 Nano chip" (Agilent) za použití Bioanalyzeru 2100 (Agilent) a koncentrace bude stanovena pomocí NanoDrop 2000 (ThermoFisher Scientific).

Pro studium exprese kandidátních genů: IL6, CXCL8, TNF-alfa, CSF3, BDNF; FTO, MC4R a KL klotho (KL) budou použity předpřipravené testy pro stanovení genové exprese TaqMan (ThermoFisher Scientific).

Cílené a necílené analýzy metabolomiky a lipidomiky

Cílené metabolomické analýzy budou provedeny pomocí kapalinové chromatografie spojené s hmotnostní spektrometrií. Lipidové druhy budou extrahovány z plazmatických vzorků pomocí MTBE. Deset µL extrahovaného vzorku bude aplikováno na UPLC 1290 (Agilent Technologies, Barcelona, Španělsko) vybavené reverzně fázovou kolonou spojenou s hmotnostním spektrometrem QTOF model 6545 (Agilent Technologies, Barcelona, Španělsko). Data budou sbírána v pozitivním a negativním elektrosprejovém režimu. Software MassHunter (Agilent Technologies, Barcelona, Španělsko) a R budou použity ke sběru, extrakci, zarovnání, filtrování a normalizaci dat pomocí kontrol kvality. Necílené metabolomické analýzy budou provedeny pomocí kapalinové chromatografie spojené s hmotnostní spektrometrií. Extrakce metabolitů bude provedena z plazmatických vzorků pomocí methanolu.

Toxické látky (trénink placenty)

Koncentrace volných bioaktivních fenolů budou stanoveny pomocí víceúčelové ultra-výkonné kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrií (UHPLC-MS/MS). Následující fenoly budou hodnoceny:

bisfenol A; parabeny: methylparaben, ethylparaben, propylparaben, butylparaben; benzofenony (BzP): BzP-1, BzP-2, BzP-3, BzP-6, BzP-8, 4-hydroxy-BzP. Koncentrace perfluoralkylových látek v placentě budou hodnoceny pomocí kombinace extrakce kapalina-kapalina s podporou solí s disperzní extrakcí kapalina-kapalina a UHPLC-MS/MS. Následující perfluoralkylové látky budou měřeny: PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnA, PFDoA, PFTrA, PFHxS a PFOS.

Zánětlivé, protizánětlivé, vaskulogeneze a angiogeneze markery (Placentraining)

Použijeme soupravy Luminex xMAP technologie (Millipore, Darmstadt, Německo) k posouzení placenty Fractalkine, IL-1α, IL-1β, IL-RA, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ, TNF-α, TNF-β, Mozkem derivovaný neurotrofní faktor, Epidermální růstový faktor, Fibroblastový růstový faktor 2, Granulocytární kolonie stimulující faktor, Granulocytární-makrofágový kolonie stimulující faktor, Destičkami derivovaný růstový faktor-AA, Monocytový chemoatraktantní protein-1, Cévní endoteliální růstový faktor. Pro tato stanovení použijeme Human Sepsis Magnetic Bead Panel 3 Multiplex Assay (kat. č. HTH17MAG-14K).