Effecten van lichaamsbeweging tijdens de zwangerschap op de gezondheid van moeder en foetus (GESTAFIT)

Experimenteel: Gestafitos

Dit is een longitudinale studie die is ontwikkeld als vervolg op het GESTAtion and FITness (GESTAFIT) Project. Het hoofddoel is om de invloed van een gelijktijdig fysiek oefenprogramma tijdens de zwangerschap (ontwikkeld onder het GESTAFIT-project) te evalueren op de lichaamssamenstelling, fysieke fitheid, hersenstructuur, en motorische, cognitieve en taalontwikkeling van het nageslacht op vierjarige leeftijd.

Ander: Oefen tussenkomst

De oefeninterventie wordt uitgevoerd in twee groepen, zodat elke groep 12-13 deelnemers heeft. De groepen trainen 3 dagen/week (60 min per sessie) vanaf de 16e week van de zwangerschap tot aan de bevalling. De oefeningsinterventiegroep doorloopt verschillende trainingsfasen: a) Leerfase: deze omvat het interventieplan, de doelen waaraan we willen werken en hoe we het zullen uitvoeren; b) Bewegingsleerfase: theoretische en praktische sessies met uitleg van bewegingen en ergonomische basispatronen; en c) Fysieke Fitness Trainingsfase: met trainingen gericht op het verbeteren van conditie en gewichtsverlies, en trainingen gericht op een juiste bekkenmobilisatie voor de bevalling. De intensiteit wordt tijdens het beweegprogramma aangepast aan de week van de zwangerschap en elke zwangere hartslag. De sessies zullen bestaan ​​uit een gemengd werk, bestaande uit circuits waar zowel musculaire als cardiovasculaire conditionering zal worden geïmplementeerd.

Ander: Controlegroep

Gangbare zorg, geen oefeningen.

Experimenteel: Placentraining

Dit is een retrospectieve studie met als doel de status van placenta's te analyseren van vrouwen die deelnemen aan het GESTAFIT-project, waarin een gelijktijdig fysiek oefenprogramma werd ontwikkeld. Dit rigoureuze ontwerp stelt ons in staat onze centrale hypothese te testen dat lichaamsbeweging tijdens de zwangerschap grotere verbeteringen zal opleveren in de placentaire metabole routes die verband houden met zwangerschapscomplicaties, en geassocieerd is met betere zwangerschaps- en neonatale uitkomsten.

Ander: Oefen tussenkomst

De oefeninterventie wordt uitgevoerd in twee groepen, zodat elke groep 12-13 deelnemers heeft. De groepen trainen 3 dagen/week (60 min per sessie) vanaf de 16e week van de zwangerschap tot aan de bevalling. De oefeningsinterventiegroep doorloopt verschillende trainingsfasen: a) Leerfase: deze omvat het interventieplan, de doelen waaraan we willen werken en hoe we het zullen uitvoeren; b) Bewegingsleerfase: theoretische en praktische sessies met uitleg van bewegingen en ergonomische basispatronen; en c) Fysieke Fitness Trainingsfase: met trainingen gericht op het verbeteren van conditie en gewichtsverlies, en trainingen gericht op een juiste bekkenmobilisatie voor de bevalling. De intensiteit wordt tijdens het beweegprogramma aangepast aan de week van de zwangerschap en elke zwangere hartslag. De sessies zullen bestaan ​​uit een gemengd werk, bestaande uit circuits waar zowel musculaire als cardiovasculaire conditionering zal worden geïmplementeerd.

Ander: Controlegroep

Gangbare zorg, geen oefeningen.

Insulinegevoeligheid afgeleid van de homeostatische modelbeoordeling voor insulineresistentie (HOMA-IR)

De insulinegevoeligheid wordt afgeleid van de homeostatische modelbeoordeling voor insulineresistentie (HOMA-IR), die wordt berekend met behulp van de formule [nuchtere insuline (μIU/ml) x nuchtere glucose (mg/dL)]/405.

Gewichtstoename moeder (kg)

Gewichtstoename van de moeder wordt gedefinieerd als de gewichtsverandering vanaf de nulmeting tot de laatste meting

Neonatale insuline-glucose-index

Neonatale insulinegevoeligheid wordt beoordeeld aan de hand van de verhouding glucose/insuline.

Systolische en diastolische bloeddruk (mmHg)

De systolische en diastolische bloeddruk (mmHg) worden gemeten na 5 minuten rust, bij 2 verschillende gelegenheden (met 2 minuten tussen de pogingen), terwijl de persoon zit (Omron Health Care Europe B.V. Hoolddorp). De laagste waarde van de twee proeven wordt geselecteerd voor de analyse.

Hartslag in rust (bpm)

De rusthartslag (bpm) wordt gemeten na 5 minuten rust, bij 2 verschillende gelegenheden (met 2 minuten tussen de pogingen), terwijl de persoon zit (Omron Health Care Europe B.V. Hoolddorp). De laagste waarde van de twee proeven wordt geselecteerd voor de analyse.

De mediterrane dieetscore

De Mediterrane Dieetscore in een versie die is aangepast aan de specifieke behoeften tijdens de zwangerschap voor Fe, Ca en foliumzuur zal worden gebruikt om de naleving van het traditionele mediterrane voedingspatroon te beoordelen.

Cardiorespiratoire conditie (Vo2max)

Het gewijzigde Bruce-protocol zal worden uitgevoerd om de maximale zuurstofopname (VO2max) te schatten en zal worden gebruikt als maatstaf voor de cardiorespiratoire conditie.

Cardiorespiratoire conditie (meters in de 6 minuten durende looptest)

We voeren de 6 minuten looptest uit, die de maximale afstand (in meters) meet die elke deelnemer in 6 minuten kan lopen over een rechthoekig parcours van 45,7 m.

Spierkracht (kg)

De handgreepsterktetest wordt gebruikt als maatstaf voor kracht

Flexibiliteit (cm)

De back-scratch-test wordt gebruikt als maatstaf voor flexibiliteit

Lichamelijke activiteit en sedentair gedrag (in minuten)

Accelerometrie zal worden gebruikt om fysieke activiteit en sedentaire tijd objectief te beoordelen. Vrouwen wordt gevraagd om gedurende 9 opeenvolgende dagen een tri-axiale versnellingsmeter (ActiSleep+, Pensacola, Florida, Verenigde Staten) te dragen, te beginnen op dezelfde dag dat ze de monitor ontvangen (bijv. deelnemers die de versnellingsmeter op maandag ontvangen, dragen het apparaat tot dinsdag van de volgende week). Deelnemers krijgen de instructie om de versnellingsmeter de hele dag (24 uur) om hun pols te dragen, vastgemaakt met een elastische riem. Tijd (in minuten) bezig met lichte, matige en matig-zware intensiteit PA en sedentaire tijd wordt berekend. Deze accelerometer is eerder gebruikt tijdens de zwangerschap met een vergelijkbare methodologie als beschreven in dit protocol.

Slaapgedrag (via accelerometrie)

Gedrag gerelateerd aan slaap, zoals het inslapen, slaaplatentie, totale slaaptijd, aantal en duur van ontwaken en slaapefficiëntie zal objectief worden berekend met behulp van een triaxiale versnellingsmeter (ActiSleep+, Pensacola, Florida, Verenigde Staten). De data-analyse van dergelijke ActiSleep-accelerometriegegevens zal worden uitgevoerd via zijn specifieke software (Actilife).

Pittsburgh slaapkwaliteitsindex

Het zal worden gebruikt om de slaapkwaliteit en -stoornissen te beoordelen gedurende een tijdsinterval van een maand.

Slapeloosheid Symptomen Vragenlijst

De aanwezigheid van symptomen van slapeloosheid zal gemeten worden met de Slapeloosheid Symptomen Vragenlijst, gevalideerd bij zwangere vrouwen.

Kwaliteit van leven (Short-Form Health Survey 36)

We zullen de Short-Form Health Survey 36 gebruiken om gezondheidsgerelateerde kwaliteit van leven te beoordelen.

Epidemiologische onderzoeken - vragenlijst over de depressieschaal

De niveaus van zwangere prenatale depressie zullen worden beoordeeld door de vragenlijst van het Centrum voor Epidemiologische Studies - Depressieschaal, die is gevalideerd en op grote schaal wordt gebruikt tijdens de zwangerschap.

Staatskenmerk angstindex.

Angstniveaus worden beoordeeld met de State Trait Anxiety Index.

Vragenlijst Detentie van Restless Legs Syndroom

Het "Restless Legs Syndrome" bepaalt voor een groot deel de kwaliteit van leven van veel zwangere vrouwen en houdt verband met hun niveau van depressie en slaapkwaliteit. De Spaanse versie van de Detention of Restless Legs Syndrome vragenlijst zal worden gebruikt om de aanwezigheid en ernst van dit syndroom te beoordelen.

Oswestry Disability Index-score

Lage rugpijn wordt beoordeeld met de Spaanse versie van de Oswestry Disability Index-score

Pijn Visuele Analoge Schaal

De intensiteit van lage rugpijn wordt ook beoordeeld met de Pain Visual Analogue Scale

6-item vrouwelijke seksuele functie-index

De 6-item Female Sexual Function Index zal worden gebruikt om de geslachtsfunctie te beoordelen. Dit instrument bestaat uit zes vragen: verlangen, opwinding, smering, orgasme, bevrediging en pijn. Elke vraag kan worden gescoord van 0 tot 5 en vervolgens worden opgeteld om een ​​totaalscore te verkrijgen.

Positieve gezondheid

"Positieve gezondheid" zal worden geëvalueerd door middel van de volgende vragenlijsten:

1. De Trait Meta-Mood-schaal
2. Het schema voor positieve en negatieve affecten
3. De tevredenheid met de levensschaal
4. De Connor-Davidson-veerkrachtschaal met 10 items

Hematologie

Het aantal erytrocyten, hematocriet, hemoglobine, bloedplaatjes, leukocyten en het gemiddelde corpusculaire volume van erytrocyten zullen worden gekwantificeerd door Coulter (merk).

Lipidenprofiel (in moeder- en navelstrengbloed)

Plasmatotaal, high-density lipoprotein en low-density lipoprotein cholesterol en triglyceriden (allemaal in mg/dL) zullen worden beoordeeld met behulp van een autoanalysator (Hitachi-Roche p800, F. Hoffmann-La Roche Ltd. Zwitserland)

Glykemisch profiel (in moeder- en navelstrengbloed)

Plasmaglucose, insuline en geglycosyleerd hemoglobine zullen worden beoordeeld met behulp van een autoanalysator (Hitachi-Roche p800, F. Hoffmann-La Roche Ltd. Zwitserland)

Totale plasma-antioxidantcapaciteit (in moeder- en navelstrengbloed)

Het zal worden gemeten met behulp van een in de handel verkrijgbare kit (spectrofotometrie).

Plasma vetoplosbare antioxidanten (in moeder- en navelstrengbloed)

Plasma vitamine E, retinol, caroteen, co-enzym Q10 en co-enzym Q9 worden gemeten door middel van massaspectrometrie

Antioxiderende enzymenactiviteit (in moeder- en navelstrengbloed)

Eritrociet membraan catalase, glutathion peroxidase en superoxide dismutase enzymen zullen gemeten worden door middel van spectrofotometrie.

Carbonyl-eiwitten (in moeder- en navelstrengbloed)

Meting van carbonyl-eiwitten zal gebeuren met behulp van commerciële kit (spectrofotometrie).

Oxidatieve schade aan lipiden (in moeder- en navelstrengbloed)

Meting van 4-hydroxynonenal en isoprostanen in urine en plasma en hydroperoxiden in plasma en erytrocytenmembraan met behulp van in de handel verkrijgbare kits (spectrofotometrie en ELISA)

Oxidatieve schade aan DNA (in moeder- en navelstrengbloed)

meting van 8-hydroxyguanosine in urine en plasma door commerciële kits (ELISA).

Pro- en ontstekingsremmend signaal (in moeder- en navelstrengbloed)

Sommige maternale en navelstrengplasma pro-inflammatoire en anti-inflammatoire cytokines (IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ en TNF-α, IL-1ra en TNF Srii α ), sommige adipokines (adiponectin, adipsin, resistin, PAI-active, insuline en leptine) en myokines (irisin) zullen worden gemeten door gebruik te maken van Luminex xMAP-technologie.

Botbiomarkers (in moeder- en navelstrengbloed)

Verschillende relevante biomarkers gerelateerd aan botmetabolisme (ACTH, DKK-1, FGF-23, Osteocalcin, OPN-Osteopontin, Osteoprotegerin, PTH en SOST) zullen worden gemeten met Luminex xMAP-technologie.

Aan vetzucht gerelateerde eiwitexpressie (in moeder- en navelstrengbloed)

Glucocorticoïde receptor; peroxisoom proliferatie geactiveerde receptor (PPAR); de beta-11 hydroxysteroid dehydrogenase type I (11βHSD1) en beta-11 hydroxysteroid dehydrogenase type II (11βHSD2) zullen worden beoordeeld in maternaal en navelstrengbloed en in mondslijmvlies van de moeder en pasgeborene.

Bovendien zijn er 4 genen geselecteerd die sterk betrokken zijn bij de foetale en postnatale ontwikkeling van vetweefsel; twee zijn receptoren: de glucocorticoïdreceptor en de PPAR-γ, en twee zijn metabole enzymen: beta-11 hydroxysteroid dehydrogenase type I of 11βHSD1, en 11 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type II of 11βHSD2. Van groot belang zijn PPAR-γ1 en PPAR-γ2, die uit hetzelfde gen worden gegenereerd door alternatief promotorgebruik en mRNA. We zullen dergelijke eiwitten meten, evenals paraoxonase/arylesterase 1 (PON1)-concentraties in maternaal en navelstrengplasma door middel van Polymerase Chain Reaction en Western Blot-technieken.

Antropometrie en lichaamssamenstelling van moeder en kind (Gestafitos)

De lengte van de moeder en het kind wordt geregistreerd met een meetlat (Seca 22, Hamburg). Er wordt een uitgebreide analyse van de lichaamssamenstelling uitgevoerd voor zowel de moeder als het kind (DXA, Hologic Discovery QDR, Nasdaq). We registreren ook het gewicht (Inbody R20, Biospace, Korea) evenals de middel- en nekomtrek bij zowel de moeder als het kind.

Bloeddruk en Rusthartslag van de Moeder en het Kind (Gestafitos)

De systolische en diastolische bloeddruk, samen met de hartslag, worden drie keer gemeten na 5 minuten rust (Omron Hoolddorp) bij zowel moeder als kind.

Voedingstoestand van de Moeder en het Kind (Gestafitos)

Een voedselfrequentievragenlijst en een vragenlijst over de naleving van het mediterrane dieet zullen worden afgenomen. Het gebruik van voedingssupplementen zal eveneens worden geregistreerd.

Lichamelijke activiteit, sedentair gedrag en slaapkwaliteit van moeder en kind

Wij zullen lichamelijke activiteit, sedentair gedrag en slaapgerelateerd gedrag (latentie, efficiëntie, etc.) beoordelen met behulp van versnellingsmeters (ActigraphGT3X+, Pensacola, Florida, USA) die negen opeenvolgende dagen om de pols worden gedragen. Versnellingsveranderingen worden geregistreerd in periodes van 5 seconden voor kinderen en 60 seconden voor moeders. Er worden gegevens verzameld over het totale volume en de intensiteit van activiteit (gemiddelde fysieke activiteitsintensiteit), energieverbruik, en het aantal minuten per dag besteed aan verschillende intensiteiten: laag (zittend), licht, matig, intensief en matig tot intensief. Ook wordt de slaapkwaliteit geregistreerd met behulp van de specifieke Actisleep-software.

Gezondheidsgerelateerde Fysieke Fitheid van het Kind: PREFIT Batterij

De musculaire kracht, cardiorespiratoire fitheid, balans, snelheid en motorische coördinatie-behendigheid worden beoordeeld met behulp van de volgende PREFIT-batterijtesten: respectievelijk de 20m shuttle run-test, handknijpkrachtmeting met dynamometer, verspringen vanuit stand, éénbeenbalanstest en 4x10m shuttle run-test. De PREFIT-batterij is een haalbaar, betrouwbaar, maximaal en valide instrument om de fysieke fitheid bij kleuters te beoordelen.

Hersenstructuur, Cerebrale Bloedstroom en Hersenfunctie via Structurele en Functionele Magnetische Resonantiebeeldvorming (Gestafitos)

MRI wordt uitgevoerd bij het Brain, Mind and Behavior Research Center (CIMCYC) aan de Universiteit van Granada. Dr. Irene Esteban-Cornejo, een teamlid, heeft het neuroimaging-gebied gecoördineerd van eerder gefinancierde studies (bijvoorbeeld het ACTIVEBRAINS-project, een gerandomiseerde gecontroleerde studie die het effect van lichaamsbeweging op de hersenen bij kinderen onderzoekt). Ze heeft twee onderzoeksverblijven voltooid aan het Monash Institute of Cognitive and Clinical Neurosciences in Australië, heeft een masterdiploma in geavanceerde MRI-analyse en is de eerste auteur van de eerste twee hersenartikelen van het ACTIVEBRAINS-project, beide gepubliceerd in het prestigieuze tijdschrift Neuroimage. Dr. Esteban-Cornejo heeft ook samengewerkt met toonaangevende experts op het gebied van lichaamsbeweging en hersengezondheid (Erickson KI, Kramer AF en Hillman CH) aan de Northeastern University en de Universiteit van Pittsburgh. Dr. Erickson en neurowetenschapper Marina López-Solà maken ook deel uit van het huidige projectteam.

Cognitie (Gestafitos)

Drie belangrijke aspecten van executieve functie worden beoordeeld:

1. Cognitieve inhibitie: Beoordeeld via de Stroop-test, die drie condities omvat waarbij interferentie wordt geëvalueerd bij het identificeren van de inktkleur van woorden die niet overeenkomen met hun betekenis.

2. Cognitieve flexibiliteit: Beoordeeld met twee onafhankelijke tests:

   Design Fluency Test: Bestaat uit drie progressieve condities waarin deelnemers in 60 seconden unieke ontwerpen creëren volgens verschillende regels, waarbij flexibiliteit, creativiteit en visuele patroongeneratie worden beoordeeld.

   Trail Making Test: Vijf condities die visuele zoeksnelheid, aandacht, mentale flexibiliteit, werkgeheugen en motorische functie beoordelen.

3. Werkgeheugen: Beoordeeld met een gecomputeriseerde n-back taak (zie MRI-sectie), die het vermogen evalueert om gelijktijdig informatie op te slaan en te verwerken.
4. Intelligentie: Beoordeeld met de Kaufman Brief Intelligence Test (KBIT), die subtesten omvat voor verbale en non-verbale intelligentie.

Academische Prestaties (Gestafitos)

1. Woodcock-Muñoz III-batterij: Spaanse aanpassing van de Woodcock-Johnson III (WJ III), bestaande uit 22 subtesten die taal, wiskunde en wetenschap beoordelen. Geselecteerde subtesten zullen worden gebruikt om rekenvaardigheid, berekening, begrip en schrijven te beoordelen.
2. Schoolcijfers: Ouders zullen ook worden gevraagd om de schoolcijfers van het kind te verstrekken uit het academische jaar of de jaren waarin de beoordelingen plaatsvinden.

Andere motorische, cognitieve en taalontwikkelingsschalen:

1. Bayley-schalen voor zuigelingenontwikkeling, derde editie (BSID-III)
2. Wechsler intelligentieschaal voor kinderen
3. BENCI-batterij (geautomatiseerde neuropsychologische beoordelingsbatterij voor kinderen)

Genetische en Epigenetische Analyses (Gestafitos)

Van kinderen zullen wangslijmvliesmonsters worden afgenomen om de expressie van het FTO-genpolymorfisme rs9939609 en het MC4R-genpolymorfisme rs17782313 te analyseren. DNA wordt uit speeksel geëxtraheerd met Whatmann® papierdragers en organische extractiemethoden die zijn geoptimaliseerd voor kwaliteit en kwantiteit. Monsters worden gekwantificeerd met een NanoDrop 2000-spectrofotometer (ThermoScientific) en genormaliseerd tot ~5 ng/µL voordat ze worden getypeerd met TaqMan-sondes (Applied Biosystems) op een RealTime ABI PRISM® 7900 HT. Niet-succesvolle monsters worden geamplificeerd en gesequenced met specifieke primers en geanalyseerd met de 3130 HID Genetic Analyzer (Applied Biosystem). DNA en RNA worden geëxtraheerd met behulp van de QIAamp DNA Mini Kit en DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen), en verwerkt met de Qiacube-robot.

Oxidatieve stress en antioxidantafweer (Placentraining)

Het gehalte aan in vet oplosbare antioxidanten (tocoferol, co-enzym Q10 en Q9 en retinol) in de placenta wordt geanalyseerd met HPLC, en stikstofmonoxide en de totale antioxidantcapaciteit met de ABTS-methode.

• Oxidatieve schade aan eiwitten: carbonyl-eiwitten met behulp van commerciële kits (spectrofotometrie).
• Oxidatieve schade aan lipiden: 4-hydroxynonenal en isoprostanen met behulp van commerciële kits (spectrofotometrie en ELISA). Oxidatieve schade aan DNA: 8-hydroxyguanosine met commerciële kits (ELISA).

Expressie van markers van biogenese, autofagie, mitochondriale fusie-fissie processen (Placentraining)

Veranderingen in mitochondriale dynamiek en hun kwaliteitscontrole zijn een belangrijk aspect om de waargenomen bevindingen te verklaren.

Daarom worden met Western-blotting of RT-PCR de mitochondriale processen van fissie (Drp1, Fis1 en OPA1), fusie (Mfn1 en Mfn2), biogenese (PGC1alpha, Tfam, Sirt1, Nrf1, Nrf2) en autofagie (PARKIN2, PINK1, Beclin-1, ATG8, ATG5, ATG12, VDAC1) onderzocht.

Spoorelementen en ultra-spoorelementen (Placentraining)

De bepaling van het totale gehalte van deze essentiële (Ca, Mg, Mn, Fe, Cu, Zn, Se) of toxische elementen (Hg, V, Cr, As, Cd, Pb, Ni) in placenta-monsters wordt uitgevoerd met een ICP-MS instrument (Agilent 7500, Agilent Technologies, Tokio, Japan) uitgerust met een Meinhard type vernevelaar (Glass Expansion, Romainmotier) en voorzien van een He-botsingscel.

Genomisch en methylering (Placentraining)

Monsters zullen worden verwerkt zoals eerder beschreven in de "Sectie genetische analyses". Genomische en methylatie zullen worden ontwikkeld met de pyrosequencing-methode. Dit zal worden ontwikkeld voor de detectie van FTO- en MC4R-genen. Genomisch DNA van placenta's zal worden geïsoleerd met behulp van de DNeasy Blood&Tissue Kit volgens het aanbevolen protocol (Qiagen N.V, Hi.GE). Na controle van de kwaliteit en hoeveelheid van het DNA, zullen de promoters van de FTO- en MC4R-genen worden geamplificeerd door middel van vooraf ontworpen PyroMark CpG-assays. Regio-amplificatie met deze primers stelt ons in staat om de methylatiestatus van de CG's binnen de regio direct te kwantificeren. Eerst zullen we de FTO- en MC4R-regio's van belang amplificeren door middel van PCR met de PyroMark PCR Kit (QIAGEN N.V, Hi.GE), waarmee CG-nucleotiden die vatbaar zijn voor methylering kunnen worden gelabeld. Reactieproducten (één per monster en gen) zullen worden gezuiverd en gebruikt voor de sequentiëringsreactie.

Kandidaatgenexpressie en kleine RNA-analyse (Placentraining)

Voor een beter begrip van de betrokken metabole routes zullen wij de studie van kandidaatgenen uitvoeren, evenals de bepaling van miRNA's die ons in staat zullen stellen een genotype-expressie-omgevingsrelatie vast te stellen (met Small RNA Sequencing-analyse).

Voor mRNA- en miRNA-analyse zal placenta-RNA worden verkregen met behulp van de kit "RNeasy Mini" (Qiagen) volgens de instructies van de fabrikant. De RNA-integriteit zal worden geanalyseerd met een "RNA 6000 Nano chip" (Agilent) met behulp van een Bionalyzer 2100 (Agilent) en de concentratie zal worden berekend met NanoDrop 2000 (ThermoFisher Scientific).

Vooraf ontworpen TaqMan Gene Expression assays (ThermoFisher Scientific) zullen worden gebruikt om de expressie van kandidaatgenen te bestuderen: IL6, CXCL8, TNF-alfa, CSF3, BDNF; FTO, MC4R en KL klotho (KL).

Gerichte en niet-gerichte metabolomics en lipidomics analyses

Gerichte metabolomicsanalyses zullen worden uitgevoerd met behulp van vloeistofchromatografie gekoppeld aan massaspectrometrie. Lipidensoorten extractie zal worden geëxtraheerd uit plasmonsters met MTBE. Tien μL van het geëxtraheerde monster zal worden aangebracht op UPLC 1290 (Agilent Technologies, Barcelona, Spanje) uitgerust met een omgekeerde-fase kolom gekoppeld aan QTOF massaspectrometer model 6545 (Agilent Technologies, Barcelona, Spanje). Gegevens zullen worden verzameld in positieve en negatieve elektrospray-modus. MassHunter (Agilent Technologies, Barcelona, Spanje) en R-software zullen worden gebruikt om de gegevens te verzamelen, extraheren, uitlijnen, filteren en normaliseren met behulp van kwaliteitscontroles. Ongerichte metabolomicsanalyses zullen worden uitgevoerd met behulp van vloeistofchromatografie gekoppeld aan massaspectrometrie. Metabolietextractie zal worden geëxtraheerd uit plasmonsters met methanol.

Toxische stoffen (Placentraining)

Concentraties van vrije bioactieve fenolen zullen worden bepaald door multiclasse ultra-hoogprestatie vloeistofchromatografie-tandem massaspectrometrie (UHPLC-MS/MS). De volgende fenolen zullen worden beoordeeld:

bisfenol A; parabenen: methylparaben, ethylparaben, propylparaben, butylparaben; benzofenonen (BzP): BzP-1, BzP-2, BzP-3, BzP-6, BzP-8, 4-hydroxy-BzP. Concentraties van perfluoroalkylstoffen in de placenta zullen worden beoordeeld door koppeling van zout-gesteste vloeistof-vloeistofextractie met dispersieve vloeistof-vloeistofmicro-extractie en UHPLC-MS/MS. De volgende perfluoroalkylstoffen zullen worden gemeten: PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnA, PFDoA, PFTrA, PFHxS en PFOS.

Ontstekings-, ontstekingsremmende, vasculogenese- en angiogenese-markers (Placentraining)

We zullen Luminex xMAP-technologie (Millipore, Darmstadt, Duitsland) kits gebruiken om placenta Fractalkine, IL-1α, IL1β, IL-RA, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ, TNF-α, TNF-β, Brain-derived neurotrophic factor, Epidermal growth factor, Fibroblast growth factor 2, Granulocyte-colony stimulating factor, Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, Platelet-derived growth factor-AA, Monocyte chemoattractant protein-1, Vascular endothelial growth factor te beoordelen. Voor deze bepalingen gebruiken we Human Sepsis Magnetic Bead Panel 3 Multiplex Assay (cat. Nr. HTH17MAG-14K).