Efeitos do exercício durante a gestação na saúde materna e fetal (GESTAFIT)

Experimental: Gestafitos

Este é um estudo longitudinal desenvolvido, que é a continuação do Projeto GESTAtion and FITness (GESTAFIT). O principal objetivo é avaliar a influência de um programa de exercício físico concorrente durante a gravidez (desenvolvido no âmbito do projeto GESTAFIT) na composição corporal, aptidão física, estrutura cerebral e desenvolvimento motor, cognitivo e linguístico da prole aos quatro anos de idade.

Outro: Intervenção de exercício

A intervenção de exercícios será realizada em dois grupos de modo que cada grupo terá de 12 a 13 participantes. Os grupos treinarão 3 dias/semana (60min por sessão) a partir da 16ª semana de gestação até o parto. O grupo de intervenção com exercícios passará por diferentes fases de treinamento: a) Fase de aprendizagem: que envolverá o plano de intervenção, os objetivos que queremos trabalhar e como iremos realizá-lo; b) Fase de Aprendizagem do Movimento: sessões teórico-práticas com explicação dos movimentos e padrões ergonómicos básicos; e c) Fase de Treinamento de Aptidão Física: com sessões de treinamento voltadas para a melhoria da condição física e perda de peso, e sessões de treinamento voltadas para uma correta mobilização pélvica para o parto. A intensidade será adaptada durante o programa de exercícios com base na semana de gestação e em cada gestante frequência cardíaca. As sessões serão compostas por um trabalho misto, composto por circuitos onde será implementado o condicionamento muscular e cardiovascular.

Outro: Grupo de controlo

Cuidados habituais, sem exercício.

Experimental: Treino Placentário

Este é um estudo retrospetivo cujo objetivo é analisar o estado das placentas das mulheres que participaram no projeto GESTAFIT, no qual foi desenvolvido um programa de exercício físico concorrente. Este desenho rigoroso permitir-nos-á testar a nossa hipótese central de que o exercício durante a gravidez produzirá maiores melhorias nas vias metabólicas placentárias associadas a complicações da gravidez e está associado a melhores resultados da gravidez e do recém-nascido.

Outro: Intervenção de exercício

A intervenção de exercícios será realizada em dois grupos de modo que cada grupo terá de 12 a 13 participantes. Os grupos treinarão 3 dias/semana (60min por sessão) a partir da 16ª semana de gestação até o parto. O grupo de intervenção com exercícios passará por diferentes fases de treinamento: a) Fase de aprendizagem: que envolverá o plano de intervenção, os objetivos que queremos trabalhar e como iremos realizá-lo; b) Fase de Aprendizagem do Movimento: sessões teórico-práticas com explicação dos movimentos e padrões ergonómicos básicos; e c) Fase de Treinamento de Aptidão Física: com sessões de treinamento voltadas para a melhoria da condição física e perda de peso, e sessões de treinamento voltadas para uma correta mobilização pélvica para o parto. A intensidade será adaptada durante o programa de exercícios com base na semana de gestação e em cada gestante frequência cardíaca. As sessões serão compostas por um trabalho misto, composto por circuitos onde será implementado o condicionamento muscular e cardiovascular.

Outro: Grupo de controlo

Cuidados habituais, sem exercício.

Sensibilidade à insulina derivada da avaliação do modelo homeostático para resistência à insulina (HOMA-IR)

A sensibilidade à insulina será derivada do modelo de avaliação homeostática para resistência à insulina (HOMA-IR), que será calculada pela fórmula [insulina em jejum (μIU/mL) x glicose em jejum (mg/dL)]/405.

Ganho de peso materno (kg)

O ganho de peso materno será definido como a mudança de peso desde a medição inicial até a última medição

Índice de insulina-glicose neonatal

A sensibilidade à insulina neonatal será avaliada através da relação glicose/insulina.

Pressão arterial sistólica e diastólica (mmHg)

A pressão arterial sistólica e diastólica (mmHg) será medida após 5 minutos de repouso, em 2 ocasiões distintas (com 2 minutos entre as tentativas), com a pessoa sentada (Omron Health Care Europe B.V. Hoolddorp). O menor valor das duas tentativas será selecionado para a análise.

Frequência cardíaca em repouso (bpm)

A frequência cardíaca em repouso (bpm), será medida após 5 minutos de repouso, em 2 ocasiões distintas (com 2 minutos entre as tentativas), com a pessoa sentada (Omron Health Care Europe B.V. Hoolddorp). O menor valor das duas tentativas será selecionado para a análise.

A pontuação da dieta mediterrânea

O Mediterranean Diet Score numa versão adaptada às necessidades específicas durante a gravidez para Fe, Ca e ácido fólico será utilizado para avaliar a adesão ao padrão alimentar tradicional mediterrânico.

Aptidão cardiorrespiratória (Vo2máx)

O protocolo de Bruce modificado será realizado para estimar o consumo máximo de oxigênio (VO2max), e será utilizado como medida de aptidão cardiorrespiratória.

Aptidão cardiorrespiratória (metros no teste de caminhada de 6 minutos)

Realizamos o teste de caminhada de 6 minutos, que mede a distância máxima (em metros) que cada participante pode caminhar em 6 minutos em um percurso retangular de 45,7 m.

Força muscular (kg)

O teste de força de preensão manual será utilizado como medida de força

Flexibilidade (cm)

O teste back-scratch será utilizado como medida de flexibilidade

Atividade física e comportamento sedentário (em minutos)

A acelerometria será utilizada para avaliar objetivamente a atividade física e o tempo sedentário. As mulheres serão solicitadas a usar um acelerômetro triaxial (ActiSleep+, Pensacola, Flórida, Estados Unidos) por 9 dias consecutivos, começando no mesmo dia em que receberem o monitor (p. participantes que receberem o acelerômetro na segunda-feira, levarão o aparelho até a terça-feira da próxima semana). Os participantes serão instruídos a usar o acelerômetro durante todo o dia (24 horas) no pulso preso por um cinto elástico. Serão calculados o tempo (em minutos) de AF de intensidade leve, moderada e moderada-vigorosa e o tempo sedentário. Este acelerômetro foi usado anteriormente na gravidez com metodologia semelhante à descrita no presente protocolo.

Comportamentos do sono (através da acelerometria)

Comportamentos relacionados ao sono, como início do sono, latência do sono, tempo total de sono, número e duração dos despertares e eficiência do sono serão calculados objetivamente usando um acelerômetro triaxial (ActiSleep+, Pensacola, Flórida, Estados Unidos). A análise dos dados desses dados de acelerometria ActiSleep será realizada através do seu software específico (Actilife).

Índice de qualidade do sono de Pittsburgh

Ele será usado para avaliar a qualidade do sono e os distúrbios durante um intervalo de tempo de um mês.

Questionário de Sintomas de Insônia

A presença de sintomas de insônia será medida com o Questionário de Sintomas de Insônia, validado em gestantes.

Qualidade de vida (Pesquisa de saúde de formulário curto 36)

Usaremos o Short-Form Health Survey 36 para avaliar a qualidade de vida relacionada à saúde.

Questionário de Estudos Epidemiológicos-Escala de Depressão

Os níveis de depressão pré-natal da gestante serão avaliados pelo questionário Center for Epidemiological Studies-Depression Scale, que é validado e amplamente utilizado na gravidez.

Índice de Ansiedade Traço de Estado.

Os níveis de ansiedade serão avaliados com o State Trait Anxiety Index.

O questionário Detenção da Síndrome das Pernas Inquietas

A "Síndrome das Pernas Inquietas" determina em grande parte a qualidade de vida de muitas grávidas e está relacionada aos seus níveis de depressão e qualidade do sono. A versão em espanhol do questionário Detention of Restless Legs Syndrome será empregada para avaliar a presença e a gravidade dessa síndrome.

Pontuação do Índice de Incapacidade de Oswestry

A dor lombar será avaliada com a versão em espanhol da pontuação do Oswestry Disability Index

Escala Visual Analógica de Dor

A intensidade da dor lombar também será avaliada com a Escala Visual Analógica de Dor

Índice de função sexual feminina de 6 itens

O índice de função sexual feminina de 6 itens será usado para avaliar a função sexual. Este instrumento é composto por seis questões: desejo, excitação, lubrificação, orgasmo, satisfação e dor. Cada pergunta pode ser pontuada de 0 a 5 e depois somada para fornecer uma pontuação total.

Saúde positiva

A "saúde positiva" será avaliada através dos seguintes questionários:

1. A Escala de Meta-Humor Traço
2. A Programação de Afeto Positivo e Negativo
3. A satisfação com a escala vida
4. A escala de resiliência de Connor-Davidson de 10 itens

Hematologia

Contagem de eritrócitos, hematócrito, hemoglobina, plaquetas, leucócitos e volume corpuscular médio eritrocitário serão quantificados por Coulter (Brand).

Perfil lipídico (na mãe e no sangue do cordão umbilical)

O colesterol e triglicerídeos totais de lipoproteína de alta densidade e lipoproteína de baixa densidade (todos em mg/dL) serão avaliados usando um autoanalisador (Hitachi-Roche p800, F. Hoffmann-La Roche Ltd. Suíça)

Perfil glicêmico (na mãe e sangue do cordão)

A glicose plasmática, a insulina e a hemoglobina glicosilada serão avaliadas usando um autoanalisador (Hitachi-Roche p800, F. Hoffmann-La Roche Ltd. Suíça)

Capacidade antioxidante total do plasma (na mãe e no sangue do cordão umbilical)

Será medido por meio de kit comercial (espectrofotometria).

Antioxidantes lipossolúveis no plasma (na mãe e no sangue do cordão umbilical)

Vitamina E plasmática, retinol, caroteno, coenzima Q10 e coenzima Q9 serão medidos por espectrometria de massa

Atividade de enzimas antioxidantes (no sangue da mãe e do cordão umbilical)

As enzimas catalase de membrana eritrocita, glutationa peroxidase e superóxido dismutase serão medidas por espectrofotometria.

Proteínas carboniladas (na mãe e no sangue do cordão umbilical)

A dosagem das proteínas carboniladas será feita com kit comercial (espectrofotometria).

Dano oxidativo aos lipídios (no sangue da mãe e do cordão umbilical)

Medição de 4-hidroxinonenal e isoprostanos na urina e plasma e hidroperóxidos no plasma e na membrana eritrocitária usando kits comerciais (espectrofotometria e ELISA)

Dano oxidativo ao DNA (no sangue da mãe e do cordão umbilical)

medição de 8-hidroxiguanosina na urina e plasma por kits comerciais (ELISA).

Sinal pró e anti-inflamatório (no sangue da mãe e do cordão umbilical)

Algumas citocinas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias do plasma materno e do cordão umbilical (IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ e TNF-α, IL-1ra e TNF Srii α ), algumas adipocinas (adiponectina, adipsina, resistina, PAI-ativo, insulina e leptina) e miocinas (irisina) serão medidas pelo emprego da tecnologia Luminex xMAP.

Biomarcadores ósseos (na mãe e no sangue do cordão umbilical)

Vários biomarcadores relevantes relacionados ao metabolismo ósseo (ACTH, DKK-1, FGF-23, Osteocalcina, OPN-Osteopontina, Osteoprotegerina, PTH e SOST) serão medidos com a tecnologia Luminex xMAP.

Expressão de proteínas relacionadas à adiposidade (no sangue da mãe e do cordão umbilical)

receptor de glicocorticóide; receptor ativado de proliferação de peroxissoma (PPAR); a beta-11 hidroxiesteróide desidrogenase tipo I (11βHSD1) e a beta-11 hidroxiesteróide desidrogenase tipo II (11βHSD2) serão avaliadas no sangue materno e do cordão umbilical e na mucosa oral da mãe e do recém-nascido.

Além disso, foram selecionados 4 genes altamente envolvidos no desenvolvimento fetal e pós-natal do tecido adiposo; dois são receptores: o receptor de glicocorticóides e o PPAR-γ, e dois são enzimas metabólicas: beta-11 hidroxiesteróide desidrogenase tipo I ou 11βHSD1 e 11 beta-hidroxiesteróide desidrogenase tipo II ou 11βHSD2. De grande importância são o PPAR-γ1 e o PPAR-γ2, que são gerados a partir do mesmo gene pelo uso de promotores alternativos e mRNA. Mediremos essas proteínas, bem como as concentrações de paraoxonase/arilesterase 1 (PON1) no plasma materno e do cordão umbilical pelas técnicas de Reação em Cadeia da Polimerase e Western Blot.

Antropometria e Composição Corporal da Mãe e da Criança (Gestafitos)

A altura da mãe e da criança será registada utilizando uma balança (Seca 22, Hamburgo). Será realizada uma análise abrangente da composição corporal tanto para a mãe como para a criança (DXA, Hologic Discovery QDR, Nasdaq). Também registaremos o peso (Inbody R20, Biospace, Coreia) bem como o perímetro da cintura e do pescoço tanto na mãe como na criança.

Pressão Arterial e Frequência Cardíaca de Repouso da Mãe e da Criança (Gestafitos)

A pressão arterial sistólica e diastólica, juntamente com a frequência cardíaca, serão medidas três vezes após 5 minutos de repouso (Omron Hoolddorp) tanto na mãe como na criança.

Estado Nutricional da Mãe e da Criança (Gestafitos)

Será administrado um questionário de frequência alimentar e um questionário de Adesão à Dieta Mediterrânica. O uso de suplementos nutricionais também será registado.

Atividade Física, Comportamento Sedentário e Qualidade do Sono da Mãe e da Criança

Vamos avaliar a atividade física, o comportamento sedentário e os comportamentos relacionados com o sono (latência, eficiência, etc.) utilizando acelerómetros (ActigraphGT3X+, Pensacola, Florida, EUA) usados no pulso durante nove dias consecutivos. As alterações de aceleração serão registadas em épocas de 5 segundos para crianças e de 60 segundos para as mães. Serão recolhidos dados sobre o volume total e a intensidade da atividade (intensidade média da atividade física), o gasto energético e o número de minutos por dia gastos em várias intensidades: baixa (sedentária), ligeira, moderada, vigorosa e moderada a vigorosa. A qualidade do sono também será registada utilizando o software específico Actisleep.

Aptidão Física Relacionada com a Saúde da Criança: Bateria PREFIT

A força muscular, a aptidão cardiorrespiratória, o equilíbrio, a velocidade e a coordenação motora-agilidade serão avaliados utilizando os seguintes testes da bateria PREFIT: teste de corrida de vaivém de 20m, dinamometria de preensão manual, teste de salto em comprimento sem impulsão, teste de equilíbrio numa perna e teste de corrida de vaivém 4x10m, respetivamente. A bateria PREFIT é uma ferramenta viável, fiável, máxima e válida para avaliar a aptidão física em crianças em idade pré-escolar.

Estrutura Cerebral, Fluxo Sanguíneo Cerebral e Função Cerebral através de Ressonância Magnética Estrutural e Funcional (Gestafitos)

A ressonância magnética será realizada no Centro de Investigação do Cérebro, Mente e Comportamento (CIMCYC) da Universidade de Granada. A Dra. Irene Esteban-Cornejo, membro da equipa, coordenou a área de neuroimagem de estudos previamente financiados (por exemplo, o projeto ACTIVEBRAINS, um ensaio controlado randomizado que avalia o efeito do exercício no cérebro de crianças). Ela completou dois períodos de investigação no Monash Institute of Cognitive and Clinical Neurosciences na Austrália, possui um Mestrado em análise avançada de ressonância magnética e é a primeira autora dos dois primeiros artigos cerebrais do projeto ACTIVEBRAINS, ambos publicados na prestigiada revista Neuroimage. A Dra. Esteban-Cornejo também trabalhou com especialistas líderes em exercício e saúde cerebral (Erickson KI, Kramer AF e Hillman CH) na Northeastern University e na University of Pittsburgh. O Dr. Erickson e a neurocientista Marina López-Solà também fazem parte da equipa do projeto atual.

Cognição (Gestafitos)

Três aspetos fundamentais da função executiva serão avaliados:

1. Inibição Cognitiva: Avaliada através do teste de Stroop, que envolve três condições que avaliam a interferência ao identificar a cor do tinteiro de palavras que não correspondem ao seu significado.

2. Flexibilidade Cognitiva: Avaliada com dois testes independentes:

   Teste de Fluência de Desenho: Consiste em três condições progressivas onde os participantes criam desenhos únicos sob diferentes regras em 60 segundos, avaliando flexibilidade, criatividade e geração de padrões visuais.

   Teste de Trilhas: Cinco condições que avaliam velocidade de busca visual, atenção, flexibilidade mental, memória de trabalho e função motora.

3. Memória de Trabalho: Avaliada com uma tarefa computadorizada n-back (ver secção de Ressonância Magnética), que avalia a capacidade de armazenar e processar informação simultaneamente.
4. Inteligência: Avaliada com o Teste Breve de Inteligência de Kaufman (KBIT), que inclui subtestes para inteligência verbal e não-verbal.

Desempenho Académico (Gestafitos)

1. Bateria Woodcock-Muñoz III: Adaptação espanhola da Woodcock-Johnson III (WJ III), composta por 22 subtestes que avaliam linguagem, matemática e ciências. Subtestes selecionados serão utilizados para avaliar fluência matemática, cálculo, compreensão e escrita.
2. Notas Escolares: Os pais também serão solicitados a fornecer as notas escolares da criança do(s) ano(s) letivo(s) durante o(s) qual(is) as avaliações decorrem.

Outras Escalas de Desenvolvimento Motor, Cognitivo e Linguístico:

1. Escalas Bayley de Desenvolvimento Infantil, Terceira Edição (BSID-III)
2. Escala de Inteligência Wechsler para Crianças
3. Bateria BENCI (Bateria de Avaliação Neuropsicológica Computadorizada para Crianças)

Análises Genéticas e Epigenéticas (Gestafitos)

Amostras da mucosa bucal serão recolhidas de crianças para analisar a expressão do polimorfismo do gene FTO rs9939609 e do polimorfismo do gene MC4R rs17782313. O ADN será extraído da saliva utilizando suportes de papel Whatmann® e métodos de extração orgânica otimizados para qualidade e quantidade. As amostras serão quantificadas utilizando um espectrofotómetro NanoDrop 2000 (ThermoScientific) e normalizadas para ~5 ng/µL antes de serem genotipadas com sondas TaqMan (Applied Biosystems) num RealTime ABI PRISM® 7900 HT. As amostras sem sucesso serão amplificadas e sequenciadas utilizando primers específicos e analisadas com o Analisador Genético 3130 HID (Applied Biosystem). O ADN e o ARN serão extraídos utilizando o QIAamp DNA Mini Kit e o DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen), e processados com o robot Qiacube.

Stress oxidativo e defesa antioxidante (Placentraining)

O conteúdo na placenta de antioxidantes lipossolúveis (tocoferol, coenzima Q10 e Q9 e retinol) será analisado por HPLC, e o óxido nítrico e a capacidade antioxidante total pelo método ABTS.

• Dano oxidativo em proteínas: proteínas carboniladas usando kits comerciais (espectrofotometria).
• Dano oxidativo em lípidos: 4-hidroxinonenal e isoprostanos usando kits comerciais (espectrofotometria e ELISA). Dano oxidativo no DNA: 8-hidroxiguanosina por kits comerciais (ELISA).

Expressão de marcadores de biogênese, autofagia, processos de fusão-fissão mitocondrial (Placentraining)

As alterações na dinâmica mitocondrial e no seu controlo de qualidade são um aspeto fundamental para explicar as descobertas observadas.

Por conseguinte, utilizando Western-blotting ou RT-PCR, os processos mitocondriais de fissão (Drp1, Fis1 e OPA1), fusão (Mfn1 e Mfn2), biogénese (PGC1alfa, Tfam, Sirt1, Nrf1, Nrf2) e autofagia (PARKIN2, PINK1, Beclin-1, ATG8, ATG5, ATG12, VDAC1).

Oligoelementos e minerais em traços e ultra-traços (Treino da Placenta)

A determinação do conteúdo total destes elementos essenciais (Ca, Mg, Mn, Fe, Cu, Zn, Se) ou tóxicos (Hg, V, Cr, As, Cd, Pb, Ni) em amostras de placenta será realizada por um instrumento ICP-MS (Agilent 7500, Agilent Technologies, Tóquio, Japão) equipado com um nebulizador tipo Meinhard (Glass Expansion, Romainmotier) e munido de uma célula de colisão He.

Genómica e metilação (Placentraining)

As amostras serão processadas conforme descrito anteriormente na "Secção de análises genéticas". A análise genómica e de metilação será desenvolvida pelo método de pirosequenciação. Isto será desenvolvido para deteção dos genes FTO e MC4R. O ADN genómico das placentas será isolado utilizando o DNeasy Blood&Tissue Kit seguindo o protocolo recomendado (Qiagen N.V, Hi.GE). Após verificar a qualidade e quantidade do ADN, os promotores dos genes FTO e MC4R serão amplificados por meio de PyroMark CpG Assays pré-desenhados. A amplificação da região utilizando estes primers permitir-nos-á quantificar diretamente o estado de metilação dos CGs dentro da região. Primeiro, amplificaremos as regiões de interesse FTO e MC4R por PCR usando o PyroMark PCR Kit (QIAGEN N.V, Hi.GE), que permite marcar nucleótidos CG suscetíveis de serem metilados. Os produtos da reação (um por amostra e gene) serão purificados e utilizados para a reação de sequenciação.

Análise da expressão de genes candidatos e de pequenos RNA (Placentraining)

Para uma melhor compreensão das vias metabólicas envolvidas, iremos realizar o estudo de genes candidatos, bem como a determinação de miRNAs que nos permitirão estabelecer uma relação genótipo-expressão-ambiente (com análise de Sequenciamento de Small RNA).

Para a análise de mRNA e miRNA, o RNA placentário será obtido através do kit "RNeasy Mini" (Qiagen) seguindo as instruções do fabricante. A integridade do RNA será analisada por um "RNA 6000 Nano chip" (Agilent) usando um Bionalalyzer 2100 (Agilent) e a concentração será calculada por NanoDrop 2000 (ThermoFisher Scientific).

Ensaios de expressão génica TaqMan pré-desenhados (ThermoFisher Scientific) serão utilizados para estudar a expressão de genes candidatos: IL6, CXCL8, TNF-alfa, CSF3, BDNF; FTO, MC4R e KL klotho (KL).

Análises de metabolómica e lipidómica direcionadas e não direcionadas

As análises de metabolómica direcionada serão realizadas utilizando cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa. A extração de espécies lipídicas será realizada a partir de amostras de plasma com MTBE. Dez μL da amostra extraída serão aplicados no UPLC 1290 (Agilent Technologies, Barcelona, Espanha) equipado com uma coluna de fase reversa acoplada ao espectrómetro de massa QTOF modelo 6545 (Agilent Technologies, Barcelona, Espanha). Os dados serão recolhidos em modos de eletrospray positivo e negativo. O MassHunter (Agilent Technologies, Barcelona, Espanha) e o software R serão utilizados para recolher, extrair, alinhar, filtrar e normalizar os dados utilizando controlos de qualidade. As análises de metabolómica não direcionada serão realizadas utilizando cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa. A extração de metabolitos será realizada a partir de amostras de plasma com metanol.

Tóxicos (Treino de Placenta)

As concentrações de fenóis bioativos livres serão determinadas por cromatografia líquida de ultraeficiência acoplada à espectrometria de massa em tandem (UHPLC-MS/MS). Os seguintes fenóis serão avaliados:

bisfenol A; parabenos: metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, butilparabeno; benzofenonas (BzP): BzP-1, BzP-2, BzP-3, BzP-6, BzP-8, 4-hidroxi-BzP. As concentrações de substâncias perfluoroalquil na placenta serão avaliadas através do acoplamento da extração líquido-líquido assistida por sal com microextração líquido-líquido dispersiva e UHPLC-MS/MS. As seguintes substâncias perfluoroalquil serão medidas: PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnA, PFDoA, PFTrA, PFHxS e PFOS.

Marcadores inflamatórios, anti-inflamatórios, vasculogénese e angiogénese (Placentraining)

Utilizaremos kits de tecnologia Luminex xMAP (Millipore, Darmstadt, Alemanha) para avaliar na placenta Fractalcina, IL-1α, IL1β, IL-RA, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ, TNF-α, TNF-β, Fator neurotrófico derivado do cérebro, Fator de crescimento epidérmico, Fator de crescimento de fibroblastos 2, Fator estimulador de colónias de granulócitos, Fator estimulador de colónias de granulócitos e macrófagos, Fator de crescimento derivado de plaquetas-AA, Proteína quimioatractante de monócitos-1, Fator de crescimento endotelial vascular. Para estas determinações utilizaremos o Painel Magnético de Sepse Humana 3 Multiplex (cat. Nº HTH17MAG-14K).