Effetti dell'esercizio durante la gestazione sulla salute materna e fetale (GESTAFIT)

Sperimentale: Gestafitos

Questo è uno studio longitudinale sviluppato, che rappresenta la continuazione del Progetto GESTAtion and FITness (GESTAFIT). Lo scopo principale è valutare l'influenza di un programma di esercizio fisico concomitante durante la gravidanza (sviluppato nell'ambito del progetto GESTAFIT) sulla composizione corporea, la forma fisica, la struttura cerebrale e lo sviluppo motorio, cognitivo e linguistico della prole all'età di quattro anni.

Altro: Intervento di esercizio

L'intervento di esercizio verrà eseguito in due gruppi in modo che ogni gruppo abbia 12-13 partecipanti. I gruppi si alleneranno 3 giorni a settimana (60 minuti per sessione) dalla 16a settimana di gestazione fino al parto. Il gruppo di intervento dell'esercizio attraverserà diverse fasi di formazione: a) Fase di apprendimento: che coinvolgerà il piano di intervento, gli obiettivi su cui vogliamo lavorare e come lo realizzeremo; b) Fase di Apprendimento del Movimento: sessioni teoriche e pratiche con la spiegazione dei movimenti e degli schemi ergonomici di base; e c) Fase di allenamento per l'idoneità fisica: con sessioni di allenamento volte a migliorare la forma fisica e la perdita di peso e sessioni di allenamento focalizzate su una corretta mobilizzazione pelvica per il parto. L'intensità sarà adattata durante il programma di esercizi in base alla settimana di gestazione e a ciascuna gravidanza frequenza cardiaca. Le sessioni consisteranno in un lavoro misto, composto da circuiti in cui verrà implementato il condizionamento sia muscolare che cardiovascolare.

Altro: Gruppo di controllo

Assistenza abituale, non esercizio.

Sperimentale: Placentraining

Questo è uno studio retrospettivo il cui scopo è analizzare lo stato delle placente delle donne che hanno partecipato al progetto GESTAFIT, in cui è stato sviluppato un programma di esercizio fisico concomitante. Questo disegno rigoroso ci permetterà di verificare la nostra ipotesi centrale che l'esercizio durante la gravidanza produrrà maggiori miglioramenti nelle vie metaboliche placentari associate a complicanze della gravidanza, ed è associato a migliori esiti della gravidanza e del neonato.

Altro: Intervento di esercizio

L'intervento di esercizio verrà eseguito in due gruppi in modo che ogni gruppo abbia 12-13 partecipanti. I gruppi si alleneranno 3 giorni a settimana (60 minuti per sessione) dalla 16a settimana di gestazione fino al parto. Il gruppo di intervento dell'esercizio attraverserà diverse fasi di formazione: a) Fase di apprendimento: che coinvolgerà il piano di intervento, gli obiettivi su cui vogliamo lavorare e come lo realizzeremo; b) Fase di Apprendimento del Movimento: sessioni teoriche e pratiche con la spiegazione dei movimenti e degli schemi ergonomici di base; e c) Fase di allenamento per l'idoneità fisica: con sessioni di allenamento volte a migliorare la forma fisica e la perdita di peso e sessioni di allenamento focalizzate su una corretta mobilizzazione pelvica per il parto. L'intensità sarà adattata durante il programma di esercizi in base alla settimana di gestazione e a ciascuna gravidanza frequenza cardiaca. Le sessioni consisteranno in un lavoro misto, composto da circuiti in cui verrà implementato il condizionamento sia muscolare che cardiovascolare.

Altro: Gruppo di controllo

Assistenza abituale, non esercizio.

Sensibilità all'insulina derivata dalla valutazione del modello omeostatico per la resistenza all'insulina (HOMA-IR)

La sensibilità all'insulina sarà derivata dalla valutazione del modello omeostatico per la resistenza all'insulina (HOMA-IR), che sarà calcolata utilizzando la formula [insulina a digiuno (μIU/mL) x glucosio a digiuno (mg/dL)]/405.

Aumento di peso materno (kg)

L'aumento di peso materno sarà definito come la variazione di peso dalla misurazione della linea di base all'ultima misurazione

Indice insulina-glucosio neonatale

La sensibilità all'insulina neonatale sarà valutata attraverso il rapporto glucosio/insulina.

Pressione arteriosa sistolica e diastolica (mmHg)

La pressione arteriosa sistolica e diastolica (mmHg) verrà misurata dopo 5 minuti di riposo, in 2 occasioni separate (con 2 minuti tra le prove), con la persona seduta (Omron Health Care Europe B.V. Hoolddorp). Il valore più basso delle due prove verrà selezionato per l'analisi.

Frequenza cardiaca a riposo (bpm)

La frequenza cardiaca a riposo (bpm) verrà misurata dopo 5 minuti di riposo, in 2 occasioni separate (con 2 minuti tra le prove), con la persona seduta (Omron Health Care Europe B.V. Hoolddorp). Il valore più basso delle due prove verrà selezionato per l'analisi.

Il punteggio della dieta mediterranea

Il punteggio della dieta mediterranea in una versione adattata alle esigenze specifiche durante la gravidanza per Fe, Ca e acido folico sarà utilizzato per valutare l'aderenza al modello alimentare mediterraneo tradizionale.

Idoneità cardiorespiratoria (Vo2max)

Il protocollo Bruce modificato sarà eseguito per stimare il massimo consumo di ossigeno (VO2max) e sarà utilizzato come misura della fitness cardiorespiratoria.

Idoneità cardiorespiratoria (metri nel test del cammino di 6 minuti)

Eseguiamo il test del cammino di 6 minuti, che misura la distanza massima (in metri) che ogni partecipante può percorrere in 6 minuti lungo un percorso rettangolare di 45,7 m.

Forza muscolare (kg)

Il test della forza di presa della mano sarà utilizzato come misura della forza

Flessibilità (cm)

Il back-scratch test sarà utilizzato come misura della flessibilità

Attività fisica e comportamento sedentario (in minuti)

L'accelerometria sarà utilizzata per valutare oggettivamente l'attività fisica e il tempo sedentario. Alle donne verrà chiesto di indossare un accelerometro triassiale (ActiSleep+, Pensacola, Florida, Stati Uniti) per 9 giorni consecutivi, a partire dallo stesso giorno in cui ricevono il monitor (ad es. i partecipanti che riceveranno l'accelerometro lunedì, porteranno il dispositivo fino al martedì della settimana successiva). I partecipanti saranno istruiti a indossare l'accelerometro durante l'intera giornata (24 ore) al polso attaccato da una cintura elastica. Verrà calcolato il tempo (in minuti) impegnato in PA di intensità leggera, moderata e moderata-vigorosa e il tempo sedentario. Questo accelerometro è stato precedentemente utilizzato in gravidanza con metodologia simile a quella descritta nel presente protocollo.

Comportamenti del sonno (attraverso l'accelerometria)

I comportamenti legati al sonno, come l'inizio del sonno, la latenza del sonno, il tempo totale di sonno, il numero e la durata dei risvegli e l'efficienza del sonno saranno oggettivamente calcolati utilizzando un accelerometro triassiale (ActiSleep+, Pensacola, Florida, Stati Uniti). L'analisi dei dati di tali dati accelerometrici di ActiSleep sarà effettuata attraverso il suo software specifico (Actilife).

Indice di qualità del sonno di Pittsburgh

Verrà utilizzato per valutare la qualità del sonno e i disturbi su un intervallo di tempo di un mese.

Questionario sui sintomi dell'insonnia

La presenza di sintomi di insonnia sarà misurata con il questionario sui sintomi dell'insonnia, validato nelle donne in gravidanza.

Qualità della vita (Short-Form Health Survey 36)

Useremo la Short-Form Health Survey 36, per valutare la qualità della vita correlata alla salute.

Questionario Epidemiological Studies-Depression Scale

I livelli di depressione prenatale in gravidanza saranno valutati dal questionario Center for Epidemiological Studies-Depression Scale, che è validato e ampiamente utilizzato in gravidanza.

Indice di ansia dei tratti di stato.

I livelli di ansia saranno valutati con lo State Trait Anxiety Index.

Il questionario Detention of Restless Legs Syndrome

La "Sindrome delle gambe senza riposo" determina in gran parte la qualità della vita di molte donne incinte ed è correlata ai loro livelli di depressione e alla qualità del sonno. La versione spagnola del questionario Detention of Restless Legs Syndrome sarà impiegata per valutare la presenza e la gravità di questa sindrome.

Punteggio Oswestry Disability Index

Il dolore lombare sarà valutato con la versione spagnola del punteggio dell'Oswestry Disability Index

Scala analogica visiva del dolore

L'intensità del dolore lombare sarà valutata anche con la Pain Visual Analogue Scale

Indice della funzione sessuale femminile a 6 voci

L'indice della funzione sessuale femminile a 6 voci verrà utilizzato per valutare la funzione sessuale. Questo strumento è composto da sei domande: desiderio, eccitazione, lubrificazione, orgasmo, soddisfazione e dolore. Ogni domanda può essere valutata da 0 a 5 e poi sommata per fornire un punteggio totale.

Salute positiva

La "salute positiva" sarà valutata attraverso i seguenti questionari:

1. La scala del meta-umore dei tratti
2. Il programma degli affetti positivi e negativi
3. La soddisfazione per la scala della vita
4. La scala di resilienza Connor-Davidson a 10 elementi

Ematologia

La conta degli eritrociti, l'ematocrito, l'emoglobina, le piastrine, i leucociti e il volume corpuscolare medio degli eritrociti saranno quantificati da Coulter (Brand).

Profilo lipidico (nel sangue materno e cordonale)

Il colesterolo plasmatico totale, lipoproteine ​​ad alta densità e lipoproteine ​​a bassa densità e trigliceridi (tutti in mg/dL) saranno valutati utilizzando un autoanalizzatore (Hitachi-Roche p800, F. Hoffmann-La Roche Ltd. Svizzera)

Profilo glicemico (nel sangue materno e cordonale)

Il glucosio plasmatico, l'insulina e l'emoglobina glicosilata saranno valutati utilizzando un autoanalizzatore (Hitachi-Roche p800, F. Hoffmann-La Roche Ltd. Svizzera)

Capacità antiossidante plasmatica totale (nel sangue materno e cordonale)

Sarà misurato utilizzando un kit commerciale (spettrofotometria).

Antiossidanti plasmatici liposolubili (nel sangue materno e cordonale)

La vitamina E plasmatica, il retinolo, il carotene, il coenzima Q10 e il coenzima Q9 saranno misurati mediante spettrometria di massa

Attività degli enzimi antiossidanti (nel sangue materno e cordonale)

Gli enzimi catalasi di membrana Eritrocite, glutatione perossidasi e superossido dismutasi saranno misurati mediante spettrofotometria.

Proteine ​​carboniliche (nel sangue materno e cordonale)

La misura delle proteine ​​carboniliche sarà effettuata utilizzando kit commerciali (spettrofotometria).

Danno ossidativo ai lipidi (nel sangue materno e cordonale)

Misurazione del 4-idrossinonenale e degli isoprostani nelle urine e nel plasma e degli idroperossidi nel plasma e nella membrana degli eritrociti utilizzando kit commerciali (spettrofotometria ed ELISA)

Danno ossidativo al DNA (nel sangue materno e cordonale)

misurazione dell'8-idrossiguanosina nelle urine e nel plasma mediante kit commerciali (ELISA).

Segnale pro e antinfiammatorio (nel sangue materno e cordonale)

Alcune citochine pro-infiammatorie e antinfiammatorie plasmatiche materne e del cordone ombelicale (IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ e TNF-α, IL-1ra e TNF Srii α ), alcune adipochine (adiponectina, adipsina, resistina, PAI-attivo, insulina e leptina) e miochine (irisina) saranno misurate mediante l'impiego della tecnologia Luminex xMAP.

Biomarcatori ossei (nel sangue materno e cordonale)

Vari biomarcatori rilevanti relativi al metabolismo osseo (ACTH, DKK-1, FGF-23, Osteocalcin, OPN-Osteopontin, Osteoprotegerin, PTH e SOST) saranno misurati con la tecnologia Luminex xMAP.

Espressione delle proteine ​​​​correlate all'adiposità (nel sangue materno e cordonale)

Recettore glucocorticoide; recettore attivato dalla proliferazione dei perossisomi (PPAR); la beta-11 idrossisteroide deidrogenasi di tipo I (11βHSD1) e la beta-11 idrossisteroide deidrogenasi di tipo II (11βHSD2) saranno valutate nel sangue materno e del cordone ombelicale e nella mucosa orale della madre e del neonato.

Inoltre, sono stati selezionati 4 geni altamente coinvolti nello sviluppo fetale e postnatale del tessuto adiposo; due sono recettori: il recettore dei glucocorticoidi e il PPAR-γ, e due sono enzimi metabolici: beta-11 idrossisteroide deidrogenasi di tipo I o 11βHSD1 e 11 beta-idrossisteroide deidrogenasi di tipo II o 11βHSD2. Di grande importanza sono PPAR-γ1 e PPAR-γ2, che sono generati dallo stesso gene mediante l'uso di promotori alternativi e mRNA. Misureremo tali proteine ​​così come le concentrazioni di paraoxonasi/arilesterasi 1 (PON1) nel plasma materno e del cordone ombelicale mediante tecniche di reazione a catena della polimerasi e Western Blot.

Antropometria e Composizione Corporea della Madre e del Bambino (Gestafitos)

L'altezza della madre e del bambino verrà registrata utilizzando una bilancia (Seca 22, Amburgo). Verrà effettuata un'analisi completa della composizione corporea sia per la madre che per il bambino (DXA, Hologic Discovery QDR, Nasdaq). Registreremo anche il peso (Inbody R20, Biospace, Corea) così come la circonferenza della vita e del collo sia nella madre che nel bambino.

Pressione Sanguigna e Frequenza Cardiaca a Riposo della Madre e del Bambino (Gestafitos)

La pressione arteriosa sistolica e diastolica, insieme alla frequenza cardiaca, saranno misurate tre volte dopo 5 minuti di riposo (Omron Hoolddorp) sia nella madre che nel bambino.

Stato Nutrizionale della Madre e del Bambino (Gestafitos)

Verrà somministrato un questionario sulla frequenza alimentare e un questionario sull'aderenza alla dieta mediterranea. Verrà inoltre registrato l'uso di integratori alimentari.

Attività Fisica, Comportamento Sedentario e Qualità del Sonno della Madre e del Bambino

Valuteremo l'attività fisica, il comportamento sedentario e i comportamenti legati al sonno (latenza, efficienza, ecc.) utilizzando accelerometri (ActigraphGT3X+, Pensacola, Florida, USA) indossati al polso per nove giorni consecutivi. Le variazioni di accelerazione verranno registrate in epoche di 5 secondi per i bambini e di 60 secondi per le madri. Verranno raccolti dati sul volume totale e sull'intensità dell'attività (intensità media dell'attività fisica), sul dispendio energetico e sul numero di minuti al giorno trascorsi a varie intensità: bassa (sedentaria), leggera, moderata, vigorosa e da moderata a vigorosa. La qualità del sonno verrà inoltre registrata utilizzando il software specifico Actisleep.

Fitness Fisica Relativa alla Salute del Bambino: Batteria PREFIT

La forza muscolare, la capacità cardiorespiratoria, l'equilibrio, la velocità e la coordinazione motoria-agilità saranno valutati utilizzando i seguenti test della batteria PREFIT: test della navetta di 20m, dinamometria della presa manuale, test del salto in lungo da fermo, test dell'equilibrio su una gamba e test della navetta 4x10m, rispettivamente. La batteria PREFIT è uno strumento fattibile, affidabile, massimale e valido per valutare la forma fisica nei bambini in età prescolare.

Struttura Cerebrale, Flusso Sanguigno Cerebrale e Funzione Cerebrale tramite Risonanza Magnetica Strutturale e Funzionale (Gestafitos)

La risonanza magnetica sarà condotta presso il Centro di Ricerca su Cervello, Mente e Comportamento (CIMCYC) dell'Università di Granada. La Dott.ssa Irene Esteban-Cornejo, membro del team, ha coordinato l'area di neuroimaging di studi precedentemente finanziati (ad esempio, il progetto ACTIVEBRAINS, uno studio randomizzato controllato che valuta l'effetto dell'esercizio fisico sul cervello nei bambini). Ha completato due periodi di ricerca presso il Monash Institute of Cognitive and Clinical Neurosciences in Australia, possiede un Master in analisi avanzata di risonanza magnetica, ed è la prima autrice dei primi due articoli cerebrali del progetto ACTIVEBRAINS, entrambi pubblicati nella prestigiosa rivista Neuroimage. La Dott.ssa Esteban-Cornejo ha anche lavorato con esperti leader in esercizio fisico e salute cerebrale (Erickson KI, Kramer AF e Hillman CH) presso la Northeastern University e l'Università di Pittsburgh. Il Dott. Erickson e la neuroscienziata Marina López-Solà fanno anche parte dell'attuale team di progetto.

Cognizione (Gestafitos)

Tre aspetti chiave della funzione esecutiva saranno valutati:

1. Inibizione Cognitiva: Valutata tramite il test di Stroop, che coinvolge tre condizioni che valutano l'interferenza nell'identificare il colore dell'inchiostro di parole che non corrispondono al loro significato.

2. Flessibilità Cognitiva: Valutata con due test indipendenti:

   Test di Fluenza del Disegno: Consiste in tre condizioni progressive in cui i partecipanti creano disegni unici seguendo regole diverse in 60 secondi, valutando flessibilità, creatività e generazione di pattern visivi.

   Test di Tracciamento: Cinque condizioni che valutano la velocità di ricerca visiva, attenzione, flessibilità mentale, memoria di lavoro e funzione motoria.

3. Memoria di Lavoro: Valutata con un compito computerizzato n-back (vedi sezione MRI), che valuta la capacità di memorizzare ed elaborare informazioni simultaneamente.
4. Intelligenza: Valutata con il Kaufman Brief Intelligence Test (KBIT), che include subtest per l'intelligenza verbale e non verbale.

Rendimento Accademico (Gestafitos)

1. Batteria Woodcock-Muñoz III: Adattamento spagnolo della Woodcock-Johnson III (WJ III), composta da 22 subtest che valutano linguaggio, matematica e scienze. Verranno utilizzati subtest selezionati per valutare la fluidità matematica, il calcolo, la comprensione e la scrittura.
2. Voti scolastici: Ai genitori verrà anche chiesto di fornire i voti scolastici del bambino dell'anno/i accademico/i durante il quale si svolgono le valutazioni.

Altre scale di sviluppo motorio, cognitivo e linguistico:

1. Bayley Scales of Infant Development, Third Edition (BSID-III)
2. Wechsler Intelligence Scale for Children
3. Batteria BENCI (Batteria Computerizzata di Valutazione Neuropsicologica per Bambini)

Analisi Genetiche ed Epigenetiche (Gestafitos)

I campioni di mucosa buccale saranno raccolti da bambini per analizzare l'espressione del polimorfismo del gene FTO rs9939609 e del polimorfismo del gene MC4R rs17782313. Il DNA sarà estratto dalla saliva utilizzando supporti di carta Whatmann® e metodi di estrazione organica ottimizzati per qualità e quantità. I campioni saranno quantificati utilizzando uno spettrofotometro NanoDrop 2000 (ThermoScientific) e normalizzati a ~5 ng/µL prima di essere genotipizzati con sonde TaqMan (Applied Biosystems) su un RealTime ABI PRISM® 7900 HT. I campioni non riusciti saranno amplificati e sequenziati utilizzando primer specifici e analizzati con l'analizzatore genetico 3130 HID (Applied Biosystem). Il DNA e l'RNA saranno estratti utilizzando il QIAamp DNA Mini Kit e il DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen), e processati con il robot Qiacube.

Stress ossidativo e difesa antiossidante (Placentraining)

Il contenuto nella placenta di antiossidanti liposolubili (tocoferolo, coenzima Q10 e Q9 e retinolo) sarà analizzato mediante HPLC, e l'ossido nitrico e la capacità antiossidante totale con il metodo ABTS.

• Danno ossidativo alle proteine: proteine carboniliche utilizzando kit commerciali (spettrofotometria).
• Danno ossidativo ai lipidi: 4-idrossinonenale e isoprostani utilizzando kit commerciali (spettrofotometria e ELISA). Danno ossidativo al DNA: 8-idrossiguanosina mediante kit commerciali (ELISA).

Espressione di marcatori di biogenesi, autofagia, processi di fusione-fissione mitocondriale (Placentraining)

I cambiamenti nella dinamica mitocondriale e nel loro controllo di qualità sono un aspetto chiave per spiegare i risultati osservati.

Pertanto, utilizzando Western-blotting o RT-PCR, i processi mitocondriali di fissione (Drp1, Fis1 e OPA1), fusione (Mfn1 e Mfn2), biogenesi (PGC1alpha, Tfam, Sirt1, Nrf1, Nrf2) e autofagia (PARKIN2, PINK1, Beclin-1, ATG8, ATG5, ATG12, VDAC1).

Minerali in tracce e ultra-tracce (Placentraining)

La determinazione del contenuto totale di questi elementi essenziali (Ca, Mg, Mn, Fe, Cu, Zn, Se) o tossici (Hg, V, Cr, As, Cd, Pb, Ni) nei campioni di placenta sarà eseguita da uno strumento ICP-MS (Agilent 7500, Agilent Technologies, Tokyo, Giappone) dotato di un nebulizzatore tipo Meinhard (Glass Expansion, Romainmotier) e equipaggiato con una cella di collisione He.

Genomica e metilazione (Placentraining)

I campioni saranno processati come precedentemente descritto nella "sezione delle analisi genetiche". Genomica e metilazione saranno sviluppate con il metodo di pirosequenziamento. Questo sarà sviluppato per la rilevazione dei geni FTO e MC4R. Il DNA genomico dalle placente sarà isolato utilizzando il DNeasy Blood&Tissue Kit seguendo il protocollo raccomandato (Qiagen N.V, Hi.GE). Dopo aver verificato la qualità e la quantità del DNA, i promotori dei geni FTO e MC4R saranno amplificati mediante PyroMark CpG Assays predisegnati. L'amplificazione della regione utilizzando questi primer ci permetterà di quantificare direttamente lo stato di metilazione dei CG all'interno della regione. Innanzitutto, amplificheremo le regioni di interesse FTO e MC4R mediante PCR utilizzando il PyroMark PCR Kit (QIAGEN N.V, Hi.GE), che consente di etichettare i nucleotidi CG suscettibili di metilazione. I prodotti di reazione (uno per campione e gene) saranno purificati e utilizzati per la reazione di sequenziamento.

Analisi dell'espressione genica candidata e dei piccoli RNA (Placentraining)

Per una migliore comprensione delle vie metaboliche coinvolte, condurremo lo studio dei geni candidati, nonché la determinazione dei miRNA che ci permetterà di stabilire una relazione genotipo-espressione-ambiente (con analisi di Small RNA Sequencing).

Per l'analisi di mRNA e miRNA, l'RNA placentare sarà ottenuto mediante il kit "RNeasy Mini" (Qiagen) seguendo le istruzioni del produttore. L'integrità dell'RNA sarà analizzata con un "RNA 6000 Nano chip" (Agilent) utilizzando un Bionalalyzer 2100 (Agilent) e la concentrazione sarà calcolata con NanoDrop 2000 (ThermoFisher Scientific).

Saggi di espressione genica TaqMan predesignati (ThermoFisher Scientific) saranno utilizzati per studiare l'espressione dei geni candidati: IL6, CXCL8, TNF-alfa, CSF3, BDNF; FTO, MC4R e KL klotho (KL).

Analisi di metabolomica e lipidomica mirate e non mirate

Le analisi di metabolomica mirata saranno eseguite utilizzando la cromatografia liquida accoppiata alla spettrometria di massa. L'estrazione delle specie lipidiche sarà estratta dai campioni di plasma con MTBE. Dieci μL del campione estratto saranno applicati su UPLC 1290 (Agilent Technologies, Barcellona, Spagna) equipaggiato con una colonna a fase inversa accoppiata allo spettrometro di massa QTOF modello 6545 (Agilent Technologies, Barcellona, Spagna). I dati saranno raccolti in modalità elettrospray positiva e negativa. MassHunter (Agilent Technologies, Barcellona, Spagna) e il software R saranno utilizzati per raccogliere, estrarre, allineare, filtrare e normalizzare i dati utilizzando controlli di qualità. Le analisi di metabolomica non mirata saranno eseguite utilizzando la cromatografia liquida accoppiata alla spettrometria di massa. L'estrazione dei metaboliti sarà estratta dai campioni di plasma con metanolo.

Tossici (Placentraining)

Le concentrazioni di fenoli bioattivi liberi saranno determinate mediante cromatografia liquida multicolonna ultra-performance accoppiata a spettrometria di massa tandem (UHPLC-MS/MS). I seguenti fenoli saranno valutati:

bisfenolo A; parabeni: metilparabene, etilparabene, propilparabene, butilparabene; benzofenoni (BzP): BzP-1, BzP-2, BzP-3, BzP-6, BzP-8, 4-idrossi-BzP. Le concentrazioni di sostanze perfluoroalchiliche nella placenta saranno valutate accoppiando l'estrazione liquido-liquido assistita da sale con la microestrazione dispersiva liquido-liquido e UHPLC-MS/MS. Le seguenti sostanze perfluoroalchiliche saranno misurate: PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnA, PFDoA, PFTrA, PFHxS e PFOS.

Marcatori infiammatori, antinfiammatori, vasculogenesi e angiogenesi (Placentraining)

Utilizzeremo kit basati sulla tecnologia Luminex xMAP (Millipore, Darmstadt, Germania) per valutare nel tessuto placentare Fractalchina, IL-1α, IL-1β, IL-RA, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ, TNF-α, TNF-β, Fattore neurotrofico cerebrale, Fattore di crescita epidermico, Fattore di crescita dei fibroblasti 2, Fattore stimolante le colonie di granulociti, Fattore stimolante le colonie di granulociti e macrofagi, Fattore di crescita derivato dalle piastrine-AA, Proteina-1 chemioattrattante per monociti, Fattore di crescita dell'endotelio vascolare. Per queste determinazioni utilizzeremo il saggio multiplex Human Sepsis Magnetic Bead Panel 3 (cod. N. HTH17MAG-14K).