Metyyli-qPCR: uusi ennustava markkeri Epstein-Barr-virukseen liittyville lymfoproliferaatioille allogeenisen hematopoieettisen kantasolusiirron aikana (EBVALLO)
Tieteellinen konteksti
Epstein-Barr-viruksella on syy-osuus useiden erillisten lymfoomien patogeneesissä. Transplantation lymfoproliferatiiviset sairaudet (PTLD) ovat yleisimpiä EBV:n aiheuttamia proliferaatioita. Allogeenisen kantasolusiirron jälkeisen PTLD:n ilmaantuvuus on alle 5 %, mutta se voi nousta 10–20 %:iin potilailla, joilla on vakiintuneita riskitekijöitä. EBV-DNAemia ennustaa EBV-PTLD:tä, ja se suoritetaan rutiininomaisesti käyttämällä qPCR:ää kokoverestä. Ennaltaehkäiseviä terapeuttisia strategioita anti-CD20-vasta-aineella käytetään, kun potilaat ylittävät määritellyn EBV-DNAemia-kynnyksen. Tämä lähestymistapa on edelleen rajoitettu, koska se ei tee eroa EBV:n aiheuttaman lymfoproliferaation (latentti sykli) ja/tai replikoituvan viruksen (replikaatiosykli) välillä.
Epigeneettisillä modifikaatioilla on keskeinen rooli säädettäessä siirtymistä latentista lyyttiseen geeniekspressioon. Spesifisiä DNA-modifikaatioita voidaan pitää EBV-genomien molekulaarisina allekirjoituksina, jotka liittyvät virusinfektion tilaan (latentti vs. lyyttinen). Näin ollen nämä allekirjoitukset voidaan kuvitella tehokkaaksi työkaluksi virusinfektion tilan karakterisoimiseksi in vivo.
Hankkeen kuvaus Ensisijainen tavoitteemme on arvioida EBV-lyyttisten ja EBV-latenttien genomien (proliferaatiosolujen) prosenttiosuudet potilailla, joilla on korkea EBV-DNAemia allogeenisen kantasolusiirron HSCT jälkeen analysoimalla EBV-genomin epigeneettisiä modifikaatioita tietyt sivustot. Toissijaiset tavoitteemme ovat i) määrittää riskitekijät, jotka liittyvät kuhunkin "latentti versus lyyttinen EBV" -profiileihin ja ii) korreloida "latentti vs. lyyttinen EBV" -profiilit rituksimabi-infuusiovasteeseen ja potilastuloksiin.
Tätä tarkoitusta varten tehdään retrospektiivinen tutkimus (n=80) ja prospektiivinen tutkimus (arvio n=58). Tämän projektin eri vaiheet ovat:
- Epigeneettisten modifikaatioiden tutkiminen. Laboratorio kehittää uutta lähestymistapaa latenttien ja lyyttisten genomien erottamiseen.
- Erilaisten viruksen latentille tai lyyttiselle faasille spesifisten EBV-transkriptien kvantitatiivisen analyysin toteuttaminen RT-PCR:llä Tätä menetelmää sovelletaan RNA:han, joka on uutettu potilaiden verinäytteistä, joissa on kohonnut EBV-viruskuormitus olosuhteissa, joissa RNA:n eheys säilyy. Tulokset validoidaan mahdollisella HSCT-potilaiden kohortilla (n=58) (Saint-Antoinen sairaala ja La Pitié-Salpêtrièren sairaala).
- EBV-genomien kvantitatiivisen analyysin suorittaminen plasmassa, syljessä ja kokonaisverinäytteissä nykyisillä rutiinimenetelmillä Kokonaisverinäytteiden lisäksi kerätään plasmaa ja sylkeä, koska vapaiden viruspartikkelien tiedetään kerääntyvän näihin biologisiin nesteisiin EBV:n uudelleenaktivoituessa. Nämä näytteet käsitellään normalisoiduilla menetelmillä, joita käytetään rutiininomaisesti lääketieteellisessä virologian laboratoriossa EBV:n kvantifiointiin ihmisnäytteistä.
Odotetut tulokset Luomalla yksinkertaisen menetelmän EBV-genomien epigeneettisten modifikaatioiden tutkimiseen odotamme ymmärtävän korkean EBV-viruskuorman merkityksen ja HSCT:n jälkeisen PTLD:n patofysiologian. Pyrimme erottamaan HSCT-potilaiden piilevät/lyyttiset profiilit ja korreloimaan heidän riskinsä PTLD:n kehittymiselle. Epigeneettisen EBV-profiilin määrittäminen HSCT:n jälkeisessä tilanteessa, kun kohdataan lisääntynyt viruskuorma ja PTLD, parantaa ymmärrystämme biologisista mekanismeista, jotka määrittävät EBV-tilan post-HSCT:ssä. Tämän pitäisi parantaa suuria lääketieteellisiä ja taloudellisia ongelmia. Näillä tuloksilla voi olla suuri terapeuttinen vaikutus
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Opintojen kesto:
Tutkimuksen kokonaiskesto: 37 kuukautta Rekrytoinnin kesto: 24 kuukautta Osallistumisen kesto kunkin potilaan osalta: 13 kuukautta
Sisällyttämiskriteerit:
Retrospektiivinen tutkimus: Potilas, jolle tehtiin HSCT Saint-Antoinen sairaalassa vuosina 2010–2015, hoidettu rituksimabilla korkean tason EBV-DNAemian vuoksi (yli 3,3 log kopiota/ml).
Prospektiivinen tutkimus: potilaat, joille tehtiin HSCT, Saint-Antoinen sairaalassa ja la Pitié-Salpêtrièressä vuosina 2016–2017, joita hoidettiin rituksimabilla korkean tason EBV-DNAemian vuoksi (yli 10 000 c/ml), ja/tai joilla on transplantaation jälkeiset lymfoproliferatiiviset sairaudet (PTLD) Huolestunut populaatio Allogeenisiä hematopoieettisia kantasolusiirtoja (allo-HSCT) saaneet potilaat, joilla on korkea Epstein-Barr-viruksen (EBV) viruskuorma
Tutkimuksen päätepisteet:
Ensisijainen päätepiste (liittyy ensisijaiseen tavoitteeseen) Latenttien ja replikatiivisten EBV-profiilien prosenttiosuudet, jotka määritellään EBV-genomin tiettyjen kohtien metylaatiotasolla, HSCT-potilaiden kohortissa, jolla on korkea EBV-viruskuorma (yli 3,3 log kopiota/ml) ennen hoidon aloittamista rituksimabikohtaisesti. Metylaatioindeksi lasketaan potilaiden verinäytteillä suoritetun metyyli-qPCR:n "syklikynnysten" vastaavista eroista. Toissijaiset päätepisteet (liittyvät toissijaisiin tavoitteisiin)
- Potilaiden ominaisuudet EBV q-PCR -tulosten mukaan
Potilaiden tulos metyyli-qPCR:n määrittämän EBV-profiilin mukaan:
- Vaste rituksimabi-infuusiolle (EBV DNA-emia < 3,3 log kopiota/ml) enintään 4 infuusion jälkeen)
- Taudista vapaa eloonjääminen (DFS) 12 kuukauden kohdalla määritellään eloonjäämiseksi ilman uusiutumista
- Kokonaiseloonjääminen (OS) 12 kuukauden iässä
- Relapsien ilmaantuvuus (RI) 12 kuukauden kohdalla
- Ei-relapse-kuolleisuus (NRM) 12 kuukauden kohdalla
- HSCT:n jälkeisten infektioiden määrä 12 kuukauden sisällä
Tilastollinen analyysi :
Piilevien ja lyyttisten genomien ominaisuuksien vertailu suoritetaan käyttämällä parametrista (Student t-test) tai ei-parametrista (Mann Whitney -testi), mikäli se on tarkoituksenmukaista jatkuville muuttujille, Chi-Square-testillä kvalitatiivisille muuttujille.
Monimuuttuja-analyysi "lyyttisiin EBV"-profiileihin liittyvien riskitekijöiden määrittämiseksi suoritetaan käyttämällä logistista regressiota.
- "Latentti versus lyyttinen EBV" -profiilien ja rituksimabi-infuusiovasteen välinen korrelaatio suoritetaan käyttämällä logistista regressiota, mukaan lukien mallissa kaikki muut rituksimabivasteeseen mahdollisesti liittyvät tekijät. Käyttöjärjestelmä ja DFS arvioidaan Kaplan-Meier-menetelmällä. RI:n ja NRM:n kumulatiivinen ilmaantuvuus lasketaan sisällyttämispäivästä remissiossa tapahtuneen uusiutumisen tai kuoleman päivämäärään, jolloin toinen tapahtuma on kilpaileva riski. Kuolema tai eteneminen katsotaan kilpailevaksi tapahtumaksi arvioitaessa akuutin GVHD:n ilmaantuvuutta. Eloonjäämispäätepisteiden monimuuttuja-analyysit suoritetaan käyttämällä Coxin suhteellista riskimallia. Tyypin I virheprosentti on kiinteä 0,05, jotta voidaan määrittää tekijöitä, jotka liittyvät aikaan tapahtuman lopputulokseen. Kaikki tilastolliset analyysit suoritetaan R-ohjelmistopaketteilla (R Foundation for Statistical Computing, Wien, Itävalta)
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Vaihe
- Ei sovellettavissa
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Paris, Ranska, 75012
- Service d'Hematologie Clinique
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
Retrospektiivinen tutkimus:
- Potilas, jolle tehtiin HSCT Saint-Antoinen sairaalassa,
- 2010-2015,
- hoidettiin rituksimabilla korkean tason EBV-DNAemian vuoksi (yli 3,3 log kopiota/ml).
Kartoittava tutkimus:
- Potilaat, joille tehtiin HSCT Saint-Antoinen sairaalassa ja la Pitié-Salpêtrièressä,
- vuosina 2017-2018,
- hoidetaan rituksimabilla korkean tason EBV-DNAemian vuoksi (yli 10 000 c/ml),
- Ja/tai sinulla on transplantaation jälkeiset lymfoproliferatiiviset sairaudet (PTLD)
Poissulkemiskriteerit:
- Tietoisen suostumuksen allekirjoittamisesta kieltäytyminen
- Potilas, joka ei ole sosiaaliturvajärjestelmän edunsaaja
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: Perustiede
- Jako: Ei käytössä
- Inventiomalli: Yksittäinen ryhmätehtävä
- Naamiointi: Ei mitään (avoin tarra)
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Muut: EBV+ allograft-populaatio
Retrospektiivinen tutkimus (n = 80): Potilas, jolle tehtiin HSCT Saint-Antoinen sairaalassa vuosina 2010-2015 ja jota hoidettiin rituksimabilla korkean tason EBV-DNAemian vuoksi (yli 3,3 log kopiota/ml). Prospektiivinen tutkimus (n=58): Potilaat, joille tehtiin HSCT, Saint-Antoinen sairaalassa ja la Pitié-Salpêtrièressä vuosina 2016–2017 ja joita hoidettiin rituksimabilla korkean tason EBV-DNAemian vuoksi (yli 10 000 c/ml), ja/tai joilla on transplantaation jälkeiset lymfoproliferatiiviset sairaudet (PTLD) Huolestunut populaatio Allogeeniset hematopoieettiset kantasolusiirrot (allo-HSCT) -potilaat, joilla on korkea Epstein-Barr-viruksen (EBV) viruskuorma |
Klo D0:
D8:ssa: verinäyte tuloksia verrataan viruksen latentille tai replikatiiviselle vaiheelle spesifisten EBV-transkriptien analyysiin käänteistranskriptio-kvantitatiivisella PCR:llä (RT-qPCR) ja vapaan viruksen havaitsemiseen syljestä, joka liittyy viruksen uudelleenaktivointi |
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Vastaavat prosenttiosuudet piilevistä vs. replikatiivisista EBV-profiileista
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Määritelty EBV-genomin epigeneettisillä modifikaatioilla HSCT-potilaiden kohortissa, joilla on korkea EBV-viruskuorma (yli 10 000 c/ml) ennen hoidon aloittamista rituksimabikohtaisesti.
|
12 kuukautta
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Potilaiden ominaisuudet EBV-tulosten mukaan
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Latenttiin ja replikatiiviseen EBV-profiileihin liittyvien riskitekijöiden määrittäminen allo-HSCT:ssä, jossa on korkea viruskuorma.
|
12 kuukautta
|
|
Potilaiden tulos EBV-profiilin mukaan
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
- Vaste rituksimabi-infuusiolle (EBV DNA-emia < 3 log kopiota/ml enintään 4 infuusion jälkeen)
|
12 kuukautta
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Yhteistyökumppanit
Tutkijat
- Päätutkija: Eolia Brissot, Associate Professor, Assistance Publique - Hôpitaux de Paris
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- NI15023
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .