Methyl-qPCR: un nuevo marcador predictivo para las linfoproliferaciones asociadas al virus de Epstein-Barr durante el trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas (EBVALLO)

Contexto científico

El virus de Epstein-Barr tiene un papel causal en la patogénesis de múltiples linfomas distintos. Las enfermedades linfoproliferativas postrasplante (PTLD) son las proliferaciones inducidas por EBV más frecuentes. El PTLD después de un alotrasplante de células madre tiene una incidencia inferior al 5 %, pero puede aumentar hasta un 10-20 % en pacientes con factores de riesgo establecidos. EBV-DNAemia es predictivo de EBV-PTLD y se realiza de forma rutinaria usando qPCR en sangre completa. Las estrategias terapéuticas preventivas con anticuerpos anti-CD20 se utilizan cuando los pacientes están por encima de un umbral de ADN-EBV definido. Este enfoque sigue siendo limitado ya que no discrimina entre una linfoproliferación inducida por EBV (ciclo latente) y/o un virus replicante (ciclo replicativo).

Las modificaciones epigenéticas juegan un papel central en la regulación del cambio de expresión génica latente a lítica. Las modificaciones específicas del ADN pueden considerarse firmas moleculares de los genomas del EBV asociadas con el estado de la infección viral (latente frente a lítica). En consecuencia, estas firmas pueden concebirse como una potente herramienta para caracterizar el estado de la infección viral in vivo.

Descripción del proyecto Nuestro objetivo principal es estimar los porcentajes respectivos de genomas líticos y latentes de EBV (células en proliferación) en pacientes que presentan una alta ADN-EBV después de un trasplante alogénico de células madre HSCT mediante el análisis de las modificaciones epigenéticas del genoma de EBV en sitios específicos. Nuestros objetivos secundarios son i) determinar los factores de riesgo asociados con cada perfil de "EBV latente versus lítico" y ii) correlacionar los perfiles de "EBV latente versus lítico" con la respuesta a la infusión de rituximab y los resultados del paciente.

Para ello se establecerá un estudio retrospectivo (n=80) y otro prospectivo (estimación n=58). Los diferentes pasos de este proyecto son:

1. Estudiar las modificaciones epigenéticas. El laboratorio está desarrollando un nuevo enfoque para distinguir entre genomas latentes y líticos.
2. Para realizar análisis cuantitativos por RT-PCR de diferentes transcritos de EBV específicos de la fase latente o lítica del virus. Este método se aplicará sobre ARN extraído de muestras de sangre de pacientes con carga viral de EBV elevada, bajo la condición de preservar la integridad del ARN. Los resultados se validarán en una cohorte prospectiva de pacientes con TCMH (n=58) (Hospital Saint-Antoine y Hospital La Pitié-Salpêtrière).
3. Para realizar un análisis cuantitativo de los genomas de EBV en muestras de plasma, saliva y sangre total mediante los procedimientos de rutina actuales. Además de las muestras de sangre total, se recolectarán plasma y saliva, ya que se sabe que las partículas virales libres se acumulan en estos fluidos biológicos tras la reactivación del EBV. Estas muestras se tratarán mediante procedimientos normalizados que se utilizan habitualmente en el laboratorio de virología médica para cuantificar el EBV en muestras humanas.

Resultados esperados Al establecer un método simple para estudiar las modificaciones epigenéticas de los genomas de EBV, esperamos comprender la importancia de la alta carga viral de EBV y la fisiopatología del PTLD posterior al HSCT. Nuestro objetivo es distinguir entre los perfiles latentes/líticos de los pacientes con HSCT y correlacionar sus respectivos riesgos de desarrollar PTLD. Establecer el perfil epigenético de EBV en el entorno posterior al HSCT cuando se enfrenta a un aumento de la carga viral y el PTLD mejorará nuestra comprensión de los mecanismos biológicos que determinan el estado de EBV en el período posterior al HSCT. Esto debería mejorar los principales problemas médicos y económicos. Estos resultados podrían tener un importante efecto terapéutico