Metil-qPCR: um novo marcador preditivo para linfoproliferações associadas ao vírus Epstein-Barr durante o transplante alogênico de células-tronco hematopoiéticas (EBVALLO)

Contexto científico

O vírus Epstein-Barr tem um papel causal na patogênese de múltiplos linfomas distintos. As doenças linfoproliferativas pós-transplante (PTLD) são as proliferações induzidas por EBV mais frequentes. PTLD após transplante alogênico de células-tronco tem uma incidência inferior a 5%, mas pode aumentar até 10-20% em pacientes com fatores de risco estabelecidos. EBV-DNAemia é preditivo de EBV-PTLD e é realizado rotineiramente usando qPCR em sangue total. Estratégias terapêuticas preventivas com anticorpo anti-CD20 são usadas quando os pacientes estão acima de um limite definido de EBV-DNAemia. Esta abordagem permanece limitada, uma vez que não discrimina entre uma linfoproliferação induzida por EBV (ciclo latente) e/ou um vírus replicante (ciclo replicativo).

As modificações epigenéticas desempenham um papel central na regulação da mudança da expressão gênica latente para lítica. Modificações específicas de DNA podem ser consideradas como assinaturas moleculares para genomas de EBV associados ao estado da infecção viral (latente vs lítica). Consequentemente, essas assinaturas podem ser vistas como uma ferramenta potente para caracterizar o estado da infecção viral in vivo.

Descrição do projeto Nosso objetivo principal é estimar as respectivas porcentagens de genomas EBV-líticos e EBV-latentes (células em proliferação) em pacientes que apresentam alta EBV-DNAemia após transplante alogênico de células-tronco HSCT, analisando as modificações epigenéticas do genoma do EBV em sites específicos. Nossos objetivos secundários são i) determinar os fatores de risco associados a cada perfil "latente versus lítico de EBV" e ii) correlacionar os perfis "latente versus lítico de EBV" com a resposta à infusão de rituximabe e os resultados dos pacientes.

Para tanto, será estabelecido um estudo retrospectivo (n=80) e um estudo prospectivo (estimativa n=58). As diferentes etapas deste projeto são:

1. Estudar modificações epigenéticas. O laboratório está desenvolvendo uma nova abordagem para distinguir entre genomas latentes e líticos.
2. Para realizar análises quantitativas por RT-PCR de diferentes transcritos de EBV específicos da fase latente ou lítica do vírus Este método será aplicado em RNA extraído de amostras de sangue de pacientes com elevada carga viral de EBV, sob condição de preservação da integridade do RNA. Os resultados serão validados em uma coorte prospectiva de pacientes de TCTH (n=58) (Saint-Antoine Hospital e La Pitié-Salpêtrière Hospital).
3. Para realizar análises quantitativas de genomas de EBV em amostras de plasma, saliva e sangue total por procedimentos de rotina atuais. Além das amostras de sangue total, plasma e saliva serão coletados, pois sabe-se que partículas virais livres se acumulam nesses fluidos biológicos após a reativação de EBV. Essas amostras serão tratadas por procedimentos normalizados que são usados ​​rotineiramente no laboratório de virologia médica para quantificar o EBV em amostras humanas.

Resultados esperados Ao estabelecer um método simples para estudar as modificações epigenéticas dos genomas do EBV, esperamos entender o significado da alta carga viral do EBV e a fisiopatologia da PTLD pós-TCTH. Nosso objetivo é distinguir entre os perfis latentes/líticos de pacientes de TCTH e correlacionar seus respectivos riscos para desenvolver PTLD. Estabelecer o perfil epigenético do EBV no cenário pós-HSCT ao enfrentar aumento da carga viral e PTLD melhorará nossa compreensão dos mecanismos biológicos que determinam o status do EBV no pós-HSCT. Isso deve melhorar as principais questões médicas e econômicas. Esses resultados podem ter um grande impacto terapêutico