Methyl-qPCR: ein neuer prädiktiver Marker für Epstein-Barr-Virus-assoziierte Lymphoproliferationen während einer allogenen hämatopoetischen Stammzelltransplantation (EBVALLO)
Wissenschaftlicher Kontext
Das Epstein-Barr-Virus spielt eine kausale Rolle bei der Pathogenese mehrerer unterschiedlicher Lymphome. Lymphoproliferative Erkrankungen nach der Transplantation (PTLD) sind die häufigsten EBV-induzierten Proliferationen. PTLD nach allogener Stammzelltransplantation hat eine Inzidenz von weniger als 5 %, kann aber bei Patienten mit etablierten Risikofaktoren auf 10-20 % ansteigen. EBV-DNAämie ist prädiktiv für EBV-PTLD und wird routinemäßig unter Verwendung von qPCR an Vollblut durchgeführt. Präventive Therapiestrategien mit Anti-CD20-Antikörpern werden eingesetzt, wenn Patienten über einer definierten EBV-DNAämie-Schwelle liegen. Dieser Ansatz bleibt begrenzt, da er nicht zwischen einer EBV-induzierten Lymphoproliferation (latenter Zyklus) und/oder einem replizierenden Virus (replikativer Zyklus) unterscheidet.
Epigenetische Modifikationen spielen eine zentrale Rolle bei der Regulation des Wechsels von der latenten zur lytischen Genexpression. Spezifische DNA-Modifikationen können als molekulare Signaturen für EBV-Genome angesehen werden, die mit dem Status der Virusinfektion (latent vs. lytisch) assoziiert sind. Dementsprechend können diese Signaturen als wirksames Werkzeug angesehen werden, um den Zustand der viralen Infektion in vivo zu charakterisieren.
Beschreibung des Projekts Unser primäres Ziel ist es, die jeweiligen Prozentsätze von EBV-lytischen und EBV-latenten Genomen (proliferierenden Zellen) bei Patienten mit einer hohen EBV-DNAämie nach allogener Stammzelltransplantation HSCT abzuschätzen, indem wir die epigenetischen Modifikationen des EBV-Genoms analysieren bestimmte Websites. Unsere sekundären Ziele sind i) die Bestimmung von Risikofaktoren, die mit jedem „latenten versus lytischen EBV“-Profil verbunden sind, und ii) die Korrelation der „latenten versus lytischen EBV“-Profile mit dem Ansprechen auf die Rituximab-Infusion und den Behandlungsergebnissen.
Dazu werden eine retrospektive Studie (n=80) und eine prospektive Studie (Schätzung n=58) etabliert. Die verschiedenen Schritte dieses Projekts sind:
- Untersuchung epigenetischer Modifikationen. Das Labor entwickelt einen neuen Ansatz, um zwischen latenten und lytischen Genomen zu unterscheiden.
- Durchführung einer quantitativen Analyse durch RT-PCR verschiedener EBV-Transkripte, die für die latente oder die lytische Phase des Virus spezifisch sind. Dieses Verfahren wird auf RNA angewendet, die aus Patientenblutproben mit erhöhter EBV-Viruslast extrahiert wird, unter der Bedingung, dass die RNA-Integrität erhalten bleibt. Die Ergebnisse werden an einer prospektiven Kohorte von HSCT-Patienten (n=58) (Krankenhaus Saint-Antoine und Krankenhaus La Pitié-Salpêtrière) validiert.
- Durchführung einer quantitativen Analyse von EBV-Genomen in Plasma-, Speichel- und Gesamtblutproben durch derzeitige Routineverfahren Zusätzlich zu Gesamtblutproben werden Plasma und Speichel gesammelt, da bekannt ist, dass sich freie Viruspartikel in diesen biologischen Flüssigkeiten bei EBV-Reaktivierung ansammeln. Diese Proben werden mit standardisierten Verfahren behandelt, die routinemäßig im medizinischen Virologielabor zur Quantifizierung von EBV in menschlichen Proben verwendet werden.
Erwartete Ergebnisse Durch die Etablierung einer einfachen Methode zur Untersuchung epigenetischer Modifikationen von EBV-Genomen erwarten wir, die Bedeutung einer hohen EBV-Viruslast und die Pathophysiologie von post-HSCT PTLD zu verstehen. Unser Ziel ist es, zwischen den latenten / lytischen Profilen von HSCT-Patienten zu unterscheiden und ihre jeweiligen Risiken für die Entwicklung von PTLD zu korrelieren. Die Etablierung des epigenetischen EBV-Profils in der Post-HSCT-Umgebung bei einer erhöhten Viruslast und PTLD wird unser Verständnis der biologischen Mechanismen verbessern, die den EBV-Status in Post-HSCT bestimmen. Dies sollte wichtige medizinische und wirtschaftliche Probleme verbessern. Diese Ergebnisse könnten einen großen therapeutischen Nutzen haben
Studienübersicht
Status
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Studiendauer :
Gesamtdauer der Studie: 37 Monate Dauer der Rekrutierung: 24 Monate Dauer der Teilnahme für jeden Patienten: 13 Monate
Einschlusskriterien:
Retrospektive Studie: Patient, der sich zwischen 2010 und 2015 einer HSCT im Krankenhaus Saint-Antoine unterzogen hatte und wegen hochgradiger EBV-DNAämie (über 3,3 log Kopien/ml) mit Rituximab behandelt wurde.
Prospektive Studie: Patienten, die sich 2016–2017 im Krankenhaus Saint-Antoine und in La Pitié-Salpêtrière einer HSCT unterzogen und wegen hochgradiger EBV-DNAämie (über 10.000 c/ml) mit Rituximab behandelt wurden und/oder an lymphoproliferativen Erkrankungen nach der Transplantation litten (PTLD) Betroffene Population Patienten mit allogener hämatopoetischer Stammzelltransplantation (allo-HSCT) mit einer hohen Viruslast des Epstein-Barr-Virus (EBV).
Studienendpunkte:
Primärer Endpunkt (verbunden mit dem primären Ziel) Jeweiliger Prozentsatz latenter versus replikativer EBV-Profile, definiert durch den Methylierungsgrad spezifischer Stellen des EBV-Genoms, in einer Kohorte von HSCT-Patienten mit einer hohen EBV-Viruslast (über 3,3 log Kopien/ml) vor Beginn der Behandlung mit Rituximab. Aus den jeweiligen Differenzen der „Zyklusschwellenwerte“ der an Patientenblutproben durchgeführten Methyl-qPCR wird ein Methylierungsindex berechnet Sekundäre Endpunkte (verknüpft mit den sekundären Zielen)
- Merkmale der Patienten gemäß den EBV-q-PCR-Ergebnissen
Patientenoutcome gemäß dem durch die Methyl-qPCR definierten EBV-Profil:
- Ansprechen auf Rituximab-Infusion (EBV-DNA-Ämie < 3,3 log Kopien/ml) nach maximal 4 Infusionen)
- Krankheitsfreies Überleben (DFS) nach 12 Monaten, definiert als Überleben ohne Rückfall
- Gesamtüberleben (OS) nach 12 Monaten
- Rückfallinzidenz (RI) nach 12 Monaten
- Nicht-Rückfallmortalität (NRM) nach 12 Monaten
- Anzahl der Post-HSCT-Infektionen innerhalb von 12 Monaten
Statistische Analyse :
Der Vergleich zwischen Merkmalen latenter und lytischer Genome wird unter Verwendung von parametrischen (Student t-Test) oder nicht-parametrischen (Mann-Whitney-Test) durchgeführt, wenn dies für kontinuierliche Variablen angemessen ist, und Chi-Quadrat-Test für qualitative Variablen.
Eine multivariate Analyse zur Bestimmung von Risikofaktoren im Zusammenhang mit "lytischen EBV"-Profilen wird unter Verwendung logistischer Regression durchgeführt.
- Die Korrelation zwischen den Profilen „latentes vs. lytisches EBV“ und dem Ansprechen auf die Rituximab-Infusion wird unter Verwendung einer logistischen Regression durchgeführt, wobei alle anderen Faktoren, die möglicherweise mit dem Ansprechen auf Rituximab in Zusammenhang stehen, in das Modell aufgenommen werden. OS und DFS werden mit der Kaplan-Meier-Methode geschätzt. Kumulative Inzidenzen von RI und NRM werden vom Datum der Aufnahme bis zum Datum des Rückfalls bzw. Todes in Remission berechnet, wobei das andere Ereignis das konkurrierende Risiko darstellt. Tod oder Progression werden als konkurrierende Ereignisse zur Schätzung der Inzidenz einer akuten GVHD betrachtet. Multivariate Analysen für Überlebensendpunkte werden unter Verwendung des Cox-Proportional-Hazards-Modells durchgeführt. Die Fehlerquote 1. Art ist auf 0,05 festgelegt, um Faktoren zu bestimmen, die mit der Zeit bis zum Auftreten von Ereignissen zusammenhängen. Alle statistischen Analysen werden mit R-Softwarepaketen durchgeführt (R Foundation for Statistical Computing, Wien, Österreich)
Studientyp
Einschreibung (Tatsächlich)
Phase
- Unzutreffend
Kontakte und Standorte
Studienorte
-
-
-
Paris, Frankreich, 75012
- Service d'Hematologie Clinique
-
-
Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Studienberechtigte Geschlechter
Beschreibung
Einschlusskriterien:
Retrospektive Studie:
- Patient, der sich einer HSCT im Krankenhaus Saint-Antoine unterzogen hat,
- zwischen 2010-2015,
- Behandlung mit Rituximab wegen hochgradiger EBV-DNAämie (über 3,3 log Kopien/ml).
Prospektive Studie:
- Patienten, die sich einer HSCT im Krankenhaus Saint-Antoine und la Pitié-Salpêtrière unterzogen haben,
- 2017-2018,
- Behandlung mit Rituximab wegen hochgradiger EBV-DNAämie (über 10.000 c/ml),
- Und/oder an lymphoproliferativen Erkrankungen nach der Transplantation (PTLD)
Ausschlusskriterien:
- Weigerung, die Einverständniserklärung zu unterzeichnen
- Patient, der nicht vom Sozialversicherungssystem profitiert
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
- Hauptzweck: Grundlegende Wissenschaft
- Zuteilung: N / A
- Interventionsmodell: Einzelgruppenzuweisung
- Maskierung: Keine (Offenes Etikett)
Waffen und Interventionen
Teilnehmergruppe / Arm |
Intervention / Behandlung |
|---|---|
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Sonstiges: EBV+ Allotransplantat-Population
Retrospektive Studie (n = 80): Patient, der sich zwischen 2010 und 2015 einer HSCT im Krankenhaus Saint-Antoine unterzogen hatte und wegen hochgradiger EBV-DNAämie (über 3,3 log Kopien/ml) mit Rituximab behandelt wurde. Prospektive Studie (n = 58): Patienten, die sich 2016-2017 einer HSCT im Krankenhaus Saint-Antoine und La Pitié-Salpêtrière unterzogen und wegen hochgradiger EBV-DNAämie (über 10.000c/ml) mit Rituximab behandelt wurden und/oder hatten Lymphoproliferative Erkrankungen nach Transplantation (PTLD) Betroffene Patienten Patienten mit allogener hämatopoetischer Stammzelltransplantation (allo-HSCT) mit einer hohen Viruslast des Epstein-Barr-Virus (EBV). |
Bei D0:
Bei D8: Blutprobe Die Ergebnisse werden mit der Analyse von EBV-Transkripten, die spezifisch für die latente oder replikative Phase des Virus sind, durch reverse Transkriptions-quantitative PCR (RT-qPCR) und mit dem damit verbundenen Nachweis von freiem Virus im Speichel verglichen virale Reaktivierung |
Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Entsprechende Prozentsätze von latenten versus replikativen EBV-Profilen
Zeitfenster: 12 Monate
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Definiert durch epigenetische Modifikationen des EBV-Genoms in einer Kohorte von HSCT-Patienten mit einer hohen EBV-Viruslast (über 10.000 c/ml) vor Beginn der Behandlung mit Rituximab.
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12 Monate
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
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Eigenschaften der Patienten gemäß den EBV-Ergebnissen
Zeitfenster: 12 Monate
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Bestimmung der Risikofaktoren im Zusammenhang mit latenten versus replikativen EBV-Profilen bei allo-HSCT mit hoher Viruslast.
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12 Monate
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Patientenoutcome gemäß EBV-Profil
Zeitfenster: 12 Monate
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- Ansprechen auf Rituximab-Infusion (EBV-DNA-Ämie < 3 log-Kopien/ml nach maximal 4 Infusionen)
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12 Monate
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Mitarbeiter und Ermittler
Ermittler
- Hauptermittler: Eolia Brissot, Associate Professor, Assistance Publique - Hôpitaux de Paris
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn (Tatsächlich)
Primärer Abschluss (Tatsächlich)
Studienabschluss (Tatsächlich)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (Tatsächlich)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Schlüsselwörter
Zusätzliche relevante MeSH-Bedingungen
Andere Studien-ID-Nummern
- NI15023
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Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
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