Метил-КПЦР: новый прогностический маркер для ассоциированной с вирусом Эпштейна-Барра лимфопролиферации во время аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (EBVALLO)

Научный контекст

Вирус Эпштейна-Барр играет причинную роль в патогенезе множественных различных лимфом. Посттрансплантационные лимфопролиферативные заболевания (ПТЛЗ) являются наиболее частыми пролиферациями, вызванными ВЭБ. Частота ПТЛЗ после аллогенной трансплантации стволовых клеток составляет менее 5%, но может увеличиваться до 10-20% у пациентов с установленными факторами риска. EBV-ДНКемия является прогностическим фактором EBV-PTLD и обычно выполняется с использованием количественной ПЦР на цельной крови. Упреждающие терапевтические стратегии с анти-CD20-антителом используются, когда пациенты находятся выше определенного порога EBV-ДНКемии. Этот подход остается ограниченным, поскольку он не делает различий между EBV-индуцированной лимфопролиферацией (латентный цикл) и/или реплицирующимся вирусом (репликативный цикл).

Эпигенетические модификации играют центральную роль в регуляции переключения от латентной к литической экспрессии генов. Специфические модификации ДНК можно рассматривать как молекулярные сигнатуры геномов ВЭБ, связанные со статусом вирусной инфекции (латентный или литический). Соответственно, эти сигнатуры можно рассматривать как мощный инструмент для характеристики состояния вирусной инфекции in vivo.

Описание проекта Нашей основной целью является оценка соответствующих процентов EBV-литических и EBV-латентных геномов (пролиферирующих клеток) у пациентов с высокой EBV-ДНК-эмией после аллогенной трансплантации стволовых клеток ТГСК путем анализа эпигенетических модификаций генома EBV на конкретные сайты. Наши второстепенные цели: i) определить факторы риска, связанные с каждым профилем «латентного и литического EBV» и ii) сопоставить профили «латентного и литического EBV» с реакцией на инфузию ритуксимаба и результатами лечения пациентов.

С этой целью будут проведены ретроспективное исследование (n=80) и проспективное исследование (оценка n=58). Различные этапы этого проекта:

1. Изучить эпигенетические модификации. Лаборатория разрабатывает новый подход к различению латентных и литических геномов.
2. Для проведения количественного анализа с помощью ОТ-ПЦР различных транскриптов ВЭБ, специфичных для латентной или литической фазы вируса. Этот метод будет применяться к РНК, выделенной из образцов крови пациентов с повышенной вирусной нагрузкой ВЭБ, при условии сохранения целостности РНК. Результаты будут подтверждены на предполагаемой когорте пациентов с ТГСК (n = 58) (больница Сен-Антуан и больница Ла-Питье-Сальпетриер).
3. Провести количественный анализ геномов ВЭБ в образцах плазмы, слюны и общей крови в соответствии с текущими стандартными процедурами. В дополнение к образцам общей крови будут взяты образцы плазмы и слюны, поскольку известно, что свободные вирусные частицы накапливаются в этих биологических жидкостях при реактивации ВЭБ. Эти образцы будут обработаны стандартизированными процедурами, которые обычно используются в медицинской вирусологической лаборатории для количественного определения EBV в образцах человека.

Ожидаемые результаты Создав простой метод изучения эпигенетических модификаций геномов ВЭБ, мы надеемся понять значение высокой вирусной нагрузки ВЭБ и патофизиологию ПТЛЗ после ТГСК. Мы стремимся различать латентные/литические профили пациентов с ТГСК и сопоставлять их соответствующие риски развития ПТЛЗ. Установление эпигенетического профиля ВЭБ в условиях пост-ТГСК при увеличении вирусной нагрузки и ПТЛЗ улучшит наше понимание биологических механизмов, определяющих статус ВЭБ при пост-ТГСК. Это должно улучшить основные медицинские и экономические проблемы. Эти результаты могут иметь важное терапевтическое значение.