Metil-qPCR: az Epstein-Barr vírussal összefüggő limfoproliferációk új prediktív markere allogén vérképző őssejt-transzplantáció során (EBVALLO)

Tudományos kontextus

Az Epstein-Barr vírus okozati szerepet játszik több különböző limfóma patogenezisében. A transzplantáció utáni limfoproliferatív betegségek (PTLD) a leggyakoribb EBV által kiváltott proliferációk. Az allogén őssejt-transzplantációt követő PTLD előfordulási gyakorisága 5%-nál alacsonyabb, de akár 10-20%-ra is megnőhet azoknál a betegeknél, akiknél megállapított rizikófaktorok állnak fenn. Az EBV-DNAemia előrejelzi az EBV-PTLD-t, és rutinszerűen qPCR-rel hajtják végre teljes véren. Megelőző terápiás stratégiákat anti-CD20 antitesttel alkalmaznak, ha a betegek egy meghatározott EBV-DNAemia küszöb felett vannak. Ez a megközelítés korlátozott marad, mivel nem tesz különbséget az EBV által kiváltott limfoproliferáció (látens ciklus) és/vagy a replikálódó vírus (replikációs ciklus) között.

Az epigenetikai módosítások központi szerepet játszanak a látens génexpresszióról a litikusra való átállás szabályozásában. A specifikus DNS-módosítások az EBV-genomok molekuláris aláírásainak tekinthetők, amelyek a vírusfertőzés állapotához kapcsolódnak (látens vs lítikus). Ennek megfelelően ezek az aláírások hatékony eszköznek tekinthetők a vírusfertőzés in vivo állapotának jellemzésére.

A projekt leírása Elsődleges célunk az EBV-lítikus és az EBV-látens genomok (proliferáló sejtek) százalékos arányának becslése allogén őssejt-transzplantációt követően HSCT után magas EBV-DNAemiában szenvedő betegekben az EBV genom epigenetikai módosulásainak elemzésével. konkrét webhelyek. Másodlagos célkitűzéseink i) az egyes „látens versus litikus EBV” profilokhoz kapcsolódó kockázati tényezők meghatározása, és ii) a „látens versus litikus EBV” profilok és a rituximab infúzióra adott válasz és a betegek kimenetelének korrelációja.

Ebből a célból egy retrospektív vizsgálatot (n=80) és egy prospektív vizsgálatot (becslés n=58) készítenek. A projekt különböző lépései a következők:

1. Az epigenetikai módosulások tanulmányozása. A laboratórium új megközelítést fejleszt ki a látens és a lítikus genomok megkülönböztetésére.
2. Különböző, a vírus látens vagy lítikus fázisára specifikus EBV transzkriptumok RT-PCR-rel történő kvantitatív analízise Ezt a módszert emelt EBV vírusterhelésű betegek vérmintáiból kinyert RNS-en alkalmazzuk, az RNS integritását megőrző körülmények között. Az eredményeket a HSCT-betegek leendő csoportján (n=58) validálják (Saint-Antoine Kórház és La Pitié-Salpêtrière Kórház).
3. Az EBV genomjainak kvantitatív elemzése plazmában, nyálban és teljes vérmintákban a jelenlegi rutin eljárásokkal Az összes vérminta mellett plazmát és nyálat is gyűjtenek, mivel ismert, hogy a szabad vírusrészecskék felhalmozódnak ezekben a biológiai folyadékokban az EBV reaktiválásakor. Ezeket a mintákat normalizált eljárásokkal kezelik, amelyeket rutinszerűen használnak az orvosi virológiai laboratóriumban az EBV mennyiségi meghatározására emberi mintákban.

Várható eredmények Az EBV genomok epigenetikai módosulásának tanulmányozására szolgáló egyszerű módszer kidolgozásával azt várjuk, hogy megértsük a magas EBV vírusterhelés jelentőségét és a HSCT utáni PTLD patofiziológiáját. Célunk, hogy különbséget tegyünk a HSCT-betegek látens / litikus profilja között, és korreláljuk a PTLD kialakulásának kockázatát. Az epigenetikus EBV profil létrehozása a HSCT utáni környezetben, amikor megnövekedett vírusterheléssel és PTLD-vel szembesülünk, jobban megértjük az EBV-státuszt meghatározó biológiai mechanizmusokat a poszt-HSCT-ben. Ennek javítania kell a főbb egészségügyi és gazdasági kérdéseken. Ezek az eredmények jelentős terápiás hatást gyakorolhatnak