Kudostutkimus potilailla, jotka saavat CAR-T-soluterapiaa (CAR_21_01) (CAR_21_01)

"CAR-T"-immunoterapia ("kimeeriset antigeenireseptori-T-soluterapiat") on hoito, joka perustuu T-soluihin, jotka ilmentävät kemiallista reseptoria tietylle antigeenille, ja se on tarkoitettu potilaille, joilla on tietyntyyppisiä onkohematologisia patologioita, jotka eivät ole reagoineet muihin hoitomuotoihin. kuten: uusiutuneet tai refraktaariset non-Hodgkinin lymfoomat, mukaan lukien diffuusi suuri B-solulymfooma, primaarinen B-soluvälikarsinalymfooma, transformoitunut follikulaarinen lymfooma, manttelisolulymfooma, akuutti lymfoblastinen leukemia, lapsilla ja nuorilla aikuisilla (alle 26-vuotiaat) ja monilla myelooma. Tämä hoito on ehdottoman innovatiivinen lähestymistapa, joka koostuu yksilöllisestä elävien solujen immunoterapiasta, joka muuttaa vastaanottavan potilaan immuunijärjestelmää niin, että se pystyy tunnistamaan ja hävittämään neoplastiset solut, jotka ilmentävät antigeeniä, jota kohti solut on muokattu. CAR-T-terapiassa käytetään potilaan spesifisiä immuunisoluja (T-lymfosyyttejä), jotka on eristetty hänen ääreisverestään ja jotka on muokattu integroimalla kimeeristä reseptoria koodaavaa geneettistä materiaalia, laajennettu in vitro ja sitten infusoitu uudelleen aktivoimaan immuunijärjestelmän vaste. sairaus.

Tällä lähestymistavalla on useita biologisia etuja:

1. tarjota potilaalle "uudelleenohjelmoituja T-soluja" uudella ja erityisellä aktivointimekanismilla;
2. immuunitoleranssin voittaminen syöpäsoluja kohtaan;
3. ohittamalla HLA-välitteiset antigeenin tunnistusrajoitusmekanismit; Myyntiluvan (AIC) Euroopan unionissa ja Italiassa saaneet CAR-T-hoidot ovat: lääke Kymriah, lääke Yescarta.

Terapeuttiset käyttöaiheet, joihin ne on hyväksytty, ovat:

• Kymriah (tisagenlecleucel): alle 25-vuotiaat lapsipotilaat ja nuoret aikuispotilaat, joilla on akuutti B-solulymfoblastinen leukemia ja jotka eivät ole koskaan reagoineet kemoterapiaan tai jotka ovat uusiutuneet allogeenisen hematopoieettisen kantasolusiirron jälkeen tai vähintään 2 rivin kemoterapian jälkeen; potilaat, joilla on diffuusi suuri B-solulymfooma tai DLBCL, joille on jo tehty vähintään 2 systeemistä hoitoa;
• Yescarta (axicabtagene ciloleucel): potilaat, joilla on diffuusi suuri B-solulymfooma tai DLBCL, primaarinen välikarsina B-solulymfooma tai PMBCL, jotka ovat jo saaneet vähintään 2 systeemistä hoitolinjaa. CAR-T-hoidot ovat tärkeä terapeuttinen vaihtoehto yllä luetelluille lymfoproliferatiivisille sairauksille, ja niitä on tutkittu potilailla, joilla aiemmat standardistrategiat (kemoterapia ja hematopoieettinen kantasolusiirto) eivät ole osoittautuneet tehokkaiksi.

Vaikka ne ovatkin tehokas viimeinen hoitovaihtoehto potilaille, joilla on pitkälle edennyt sairaus ja jotka ovat vastustuskykyisiä perinteisille kemoterapialinjoille, CAR-T-hoitojen käyttö ei ole ilman vakavia komplikaatioita, päinvastoin. Erityisesti siellä on:

• sytokiinien vapautumisoireyhtymä (CRS);
• B-lymfosyyttien väheneminen (hypogammaglobulinemia);
• Neurologiset haittavaikutukset;

CAR-T-hoidon toksisuuden taustalla olevan massiivisen tulehdusvasteen determinanttien ymmärtäminen on edelleen suurelta osin epäselvää. Lääketieteellinen ja tieteellinen yhteisö on samaa mieltä siitä, että se, mitä määritellään CAR-solujen "kohdevaikutukseksi" kohdetuumorisoluihin ja siitä johtuvaksi immuunivasteeksi, on yksi massiivisen tulehdusta edistävän sytokiinireaktion laukaisevista tekijöistä, mutta Mekanismeja, jotka ovat perustana ja joilla voidaan ennakoida ja personoida hoitoa tai jopa estää sitä, ei ole vielä määritelty. On oletettu, ja useita tutkimuksia alkaa olla saatavilla tältä osin, että CAR T:n tuottamiseen käytettyjen leukosyyttipopulaatioiden (mm. CD4 ja CD8) koostumus ja suhteet voivat vaikuttaa potilaan kliiniseen lopputulokseen. Erityisesti CAR-solujen lisääntyminen ja pysyminen potilaassa ovat avaintekijöitä itse hoidon tehokkuuden määrittämisessä. Tästä syystä on tarpeen karakterisoida eri solujen alaryhmät sekä CD3 + CAR + -populaatiossa että CD3 + CAR - -populaatiossa potilaan kliinisen kulun aikana. Olennaista on myös tutkia itse lymfosyyttipopulaatioiden epigeneettistä tilaa sekä siihen liittyvän potilaan biologista ikää. Se on itse asiassa elementti, jolla uskotaan olevan perustavanlaatuinen rooli kliinisessä vasteessa. Itse asiassa potilaan biologisen iän arviointi on indeksi, joka koostuu molekyylimarkkereista (kuten tumallisten solujen epigeneettinen tila), joka korreloi vahvasti kronologisen iän kanssa, mutta joka pystyy ilmaisemaan yksittäisen yksilön ikääntymisnopeutta, sekä hänen immuunijärjestelmänsä soluja, ja näin ollen pystyy tuomaan kronologista ikää painokkaammin esiin hoitoon liittyviä terveysriskejä ja tulehdustilaa. Toinen huomioitava tekijä tarkastelemassamme kokonaiskuvassa on mikroRNA:iden (miRNA:iden) rooli T-solujen eloonjäämisen, erilaistumisen ja toiminnan ratkaisevina säätelijöinä, jotka kaikki ovat avaintekijöitä, jotka vaikuttavat immunoterapian lopputulokseen. adoptio perustuu CAR-soluihin. MikroRNA:t ovat lyhyitä RNA-säikeitä, joilla on solugeenin ilmentymisen säätelytoiminto, erityisesti tulehduksen moduloinnissa. Tästä syystä niiden tutkiminen tarkastelemassamme kontekstissa on ensiarvoisen tärkeää.

Nämä lähtökohdat huomioon ottaen tutkimuksen ensisijaiset tavoitteet ovat seuraavat:

1. CAR-T-hoitoa saavilta potilailta otettujen perifeeristen verinäytteiden epigenetiikan tutkimus. Epigeneettinen analyysi suoritetaan erityisesti plasman nanovesikkelien sisältämästä kiertävästä leukosyytistä ja ekstrasellulaarisesta fraktiosta epigenomin määrittämiseksi ja sen korrelaation potilaan kliinisen tuloksen kanssa;
2. CAR-T-hoitoa saavien potilaiden solunulkoisista rakkuloista ja leukosyyteistä uutettujen mikroRNA:iden tutkimus, jotta voidaan korreloida tasot potilaiden kliinisen tuloksen kanssa;
3. Lymfosyytti- ja myeloidipopulaatioiden tutkimus hematologisessa potilaassa PRE- ja POST-CAR-T-soluinfuusiossa tasojen korreloimiseksi potilaiden kliinisen tuloksen kanssa; Näiden tavoitteiden saavuttamiseksi käynnistetään yksikeskinen ja eksploatiivinen tutkimus, jossa käytetään ihmiskudoksia, tässä tapauksessa verta, potilailla, joille on infusoitu CAR-T-soluja. Tutkimus tarjotaan kaikille Bolognan IRCCS-yliopistosairaalan Advanced Cell Therapy Program -ohjelman CAR-T-soluinfuusion saaville potilaille. Tutkimuksen odotetaan kestävän 5 vuotta, ja siihen osallistuu 35 potilasta vuodessa. Näytteiden analyysi suoritetaan tutkimuksen yhdessä kirjoittajan, professori Massimiliano Bonafèn laboratorioissa maksutta.

Perifeerisiä verinäytteitä käytetään tutkimuksen suorittamiseen, ja ne otetaan seuraavina aikoina:

• afereesiin;
• osastolle saapuessaan;
• päivänä -1;
• päivänä 0 (2 tuntia infuusion jälkeen);
• päivässä +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365;

Kudosnäytteiden otto on sama kuin näytteenotto, joka edustaa nykyistä standardia rutiininomaisessa kliinisessä käytännössä siirretyllä potilaalla; siksi näytteet otetaan varoen, etteivät ne mitätöi normaaleja diagnostisia apumenettelyjä. Tämän tutkimuksen tuloksilla on ensisijaisen tärkeä kliinisen hoidon vaikutus, joka tähtää CAR-T-hoidon komplikaatioiden hallintaan ja niiden taustalla olevien biologisten mekanismien ymmärtämiseen.