接受 CAR-T 细胞治疗的患者的组织研究 (CAR_21_01) (CAR_21_01)

“CAR-T”免疫疗法（“嵌合抗原受体 T 细胞疗法”）是一种基于 T 细胞表达特定抗原化学受体的疗法，适用于患有某些类型的肿瘤血液病症但对其他形式的治疗没有反应的患者，例如：复发或难治性非霍奇金淋巴瘤，包括弥漫性大 B 细胞淋巴瘤、原发性 B 细胞纵隔淋巴瘤、转化性滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病，发生于儿童和年轻人（<26 岁）和多发性骨髓瘤。 这种疗法是一种绝对创新的方法，它包括一种个性化的活细胞免疫疗法，它可以修改接受者患者的免疫系统，使其能够识别和根除表达细胞工程化抗原的肿瘤细胞。 CAR-T 疗法使用患者的特定免疫细胞（T 淋巴细胞），从患者的外周血中分离出来，通过整合编码嵌合受体的遗传物质进行工程改造，在体外扩增，然后重新注入以激活免疫系统对疾病。

这种方法有几个生物学优势：

1. 为患者提供具有新的特定激活机制的“重新编程的 T 细胞”；
2. 克服对癌细胞的免疫耐受性；
3. 绕过 HLA 介导的抗原识别限制机制；目前在欧盟和意大利获得上市许可（AIC）的CAR-T疗法有：药物Kymriah、药物Yescarta。

他们已被批准的治疗适应症是：

• Kymriah（tisagenlecleucel）：对化疗无反应，或异基因造血干细胞移植后或至少 2 线化疗后复发的 25 岁以下患有 B 细胞急性淋巴细胞白血病的儿童和青年患者；已接受至少 2 线全身治疗的弥漫性大 B 细胞淋巴瘤或 DLBCL 患者；
• Yescarta (axicabtagene ciloleucel)：已接受至少 2 线全身治疗的弥漫性大 B 细胞淋巴瘤或 DLBCL、原发性纵隔 B 细胞淋巴瘤或 PMBCL 患者。 CAR-T 疗法代表了上述淋巴组织增生性疾病的重要治疗选择，并且已经在先前的标准策略（化疗和造血干细胞移植）未被证明有效的患者中进行了研究。

尽管它们代表了晚期疾病和对传统化疗线有抵抗力的患者的有效最后治疗选择，但使用 CAR-T 疗法并非没有严重的并发症，恰恰相反。 具体来说，有：

• 细胞因子释放综合征 (CRS)；
• B 淋巴细胞减少（低丙种球蛋白血症）；
• 神经系统不良反应；

对 CAR-T 疗法毒性背后的大规模炎症反应的决定因素的理解在很大程度上仍不清楚。 CAR细胞对靶肿瘤细胞的“靶向效应”，以及随之而来的免疫反应，是引发大量促炎细胞因子反应的因素之一，这是医学界的共识，但作为基础的机制以及它们可以预测和个性化治疗甚至预防治疗的机制尚未确定。 据推测，在这方面，一些研究开始可用，用于生产 CAR T 的白细胞群（CD4 和 CD8 等）的组成和比例可能会影响患者的临床结果。 特别是，患者体内CAR细胞的增殖和持久性是决定治疗本身有效性的关键因素。 因此需要表征患者临床过程中 CD3 + CAR + 群体和 CD3 + CAR- 群体中的各种细胞亚群。 研究淋巴细胞群本身的表观遗传状态以及与之相关的患者的生物学年龄也很重要。 它实际上是一种被认为在临床反应中发挥基础作用的元素。 事实上，评估个体的生理年龄是由分子标记（如有核细胞的表观遗传状态）组成的指标，与实足年龄有很强的相关性，但能够表达个体衰老的速度，以及他的免疫系统细胞，因此能够比实际年龄更强调与治疗和他的炎症状态相关的健康风险。 在我们考虑的总体情况中，要考虑的另一个因素是 microRNA (miRNA) 作为 T 细胞存活、分化和功能的关键调节剂所发挥的作用，所有这些都是影响免疫治疗结果的关键因素。 基于CAR细胞的过继。 MicroRNA 是短链 RNA，具有调节细胞基因表达的功能，尤其是在调节炎症方面。 出于这个原因，在我们正在考虑的背景下对它们进行研究是最重要的。

鉴于这些前提，研究的主要目标如下：

1. 从接受 CAR-T 疗法的患者身上采集的外周血样本的表观遗传学研究。 特别是，将对血浆纳米囊泡中包含的循环白细胞和细胞外部分进行表观遗传分析，以确定表观基因组及其与患者临床结果的相关性；
2. 研究从接受 CAR-T 治疗的患者的细胞外囊泡和白细胞中提取的 microRNA，以便将其水平与患者的临床结果相关联；
3. 研究血液病患者 PRE 和 POST CAR-T 细胞输注中的淋巴细胞和骨髓细胞群，以便将水平与患者的临床结果相关联；为了实现这些目标，将启动一项单中心和探索性研究，其中涉及在接受 CAR-T 细胞输注的患者中使用体外人体组织，在本例中为血液。 该研究将提供给所有在博洛尼亚 IRCCS 大学医院高级细胞治疗计划中接受 CAR-T 细胞输注的患者。 该研究预计将持续 5 年，每年招募 35 名患者。 样本分析将在该研究的共同作者 Massimiliano Bonafè 教授的实验室免费进行。

外周血样本将用于进行研究，并将在以下时间采集：

• 单采术；
• 进入病房时；
• 第-1天；
• 第 0 天（输注后 2 小时）；
• 每天 +1、+3、+5、+7、+9、+11、+13、+30、+90、+180、+365；

组织取样与移植患者常规临床实践中代表当前标准的取样一致；因此，在获取样本时要注意不要使正常的诊断辅助程序失效。 这项研究的结果将对临床护理产生最重要的影响，旨在管理 CAR-T 疗法的并发症并了解其背后的生物学机制。