Исследование тканей у пациентов, проходящих терапию CAR-T-клетками (CAR_21_01) (CAR_21_01)

Иммунотерапия «CAR-T» («Т-клеточная терапия с химерными антигенными рецепторами») — терапия, основанная на Т-клетках, экспрессирующих химический рецептор к специфическому антигену, показана больным с некоторыми видами онкогематологической патологии, не ответившими на другие формы лечения, такие как: рецидивирующие или рефрактерные неходжкинские лимфомы, включая диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому, первичную В-клеточную лимфому средостения, трансформированную фолликулярную лимфому, мантийно-клеточную лимфому, острый лимфобластный лейкоз, у детей и молодых людей (<26 лет) и множественные миелома. Эта терапия является абсолютно инновационным подходом, который состоит из индивидуальной иммунотерапии живыми клетками, которая модифицирует иммунную систему пациента-реципиента, чтобы сделать ее способной распознавать и уничтожать неопластические клетки, экспрессирующие антиген, против которого эти клетки были сконструированы. В терапии CAR-T используются специфические иммунные клетки (Т-лимфоциты) пациента, выделенные из его периферической крови, сконструированные путем интеграции генетического материала, кодирующего химерный рецептор, размноженные in vitro, а затем реинфузированные для активации ответа иммунной системы против вируса. болезнь.

Этот подход имеет несколько биологических преимуществ:

1. предоставить пациенту «перепрограммированные Т-клетки» с новым и специфическим механизмом активации;
2. преодоление иммунной толерантности к раковым клеткам;
3. обход механизмов ограничения распознавания антигена, опосредованных HLA; Препараты CAR-T, получившие регистрационное удостоверение (AIC) в Европейском союзе и Италии: препарат Кимрия, препарат Йескарта.

Терапевтические показания, для которых они были одобрены:

• Кимриа (тисагенлеклеусел): дети и молодые взрослые пациенты в возрасте до 25 лет с В-клеточным острым лимфобластным лейкозом, которые никогда не реагировали на химиотерапию или у которых возник рецидив после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток или после не менее 2 линий химиотерапии; пациенты с диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомой или ДВККЛ, которым уже проведено не менее 2 линий системной терапии;
• Yescarta (axicabtagene ciloleucel): пациенты с диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомой или ДВККЛ, первичной медиастинальной В-клеточной лимфомой или ПМВКЛ, которые уже получили не менее 2 линий системной терапии. Терапия CAR-T представляет собой важный вариант лечения лимфопролиферативных заболеваний, перечисленных выше, и была изучена у пациентов, у которых предыдущие стандартные стратегии (химиотерапия и трансплантация гемопоэтических стволовых клеток) не доказали свою эффективность.

Хотя они представляют собой эффективный последний терапевтический вариант у пациентов с запущенным заболеванием и резистентных к традиционным химиотерапевтическим линиям, использование CAR-T-терапии не обходится без серьезных осложнений, а совсем наоборот. В частности, есть:

• синдром высвобождения цитокинов (CRS);
• Снижение В-лимфоцитов (гипогаммаглобулинемия);
• Неврологические побочные реакции;

Понимание детерминант массивного воспалительного ответа, лежащего в основе токсичности CAR-T-терапии, остается в значительной степени неясным. В научно-медицинском сообществе распространено мнение, что то, что определяется как «целевой эффект» клеток CAR на опухолевые клетки-мишени и последующий иммунный ответ, является одним из факторов, запускающих массивную провоспалительную цитокиновую реакцию, но механизмы, лежащие в основе и позволяющие прогнозировать и персонализировать лечение или даже предотвращать его, еще не определены. Предполагается, и в связи с этим начинают проводиться несколько исследований, что состав и соотношение популяций лейкоцитов (среди прочих CD4 и CD8), используемых для производства CAR T, могут влиять на клинический исход у пациента. В частности, пролиферация и персистенция CAR-клеток у пациента являются ключевыми факторами, определяющими эффективность самой терапии. Следовательно, необходимо охарактеризовать различные субпопуляции клеток как в популяции CD3+CAR+, так и в популяции CD3+CAR- в клиническом течении пациента. Принципиально важно также изучение эпигенетического статуса самих популяций лимфоцитов, а также связанного с ним биологического возраста больного. На самом деле это элемент, который, как полагают, играет фундаментальную роль в клиническом ответе. По сути, оценка биологического возраста субъекта представляет собой показатель, состоящий из молекулярных маркеров (таких как эпигенетический статус ядерных клеток), сильно коррелирующих с хронологическим возрастом, но способных выражать скорость старения отдельного индивидуума. а также клеток его иммунной системы и, следовательно, способен с большим акцентом, чем хронологический возраст, выделить риски для здоровья, связанные с терапией и его воспалительным состоянием. Еще одним элементом, который следует учитывать в общей картине, которую мы рассматриваем, является роль, которую микроРНК (миРНК) играют в качестве важнейших регуляторов выживания, дифференцировки и функции Т-клеток, которые являются ключевыми факторами, влияющими на результат иммунотерапии. адоптивные на основе клеток CAR. МикроРНК представляют собой короткие нити РНК с регуляторной функцией экспрессии клеточных генов, особенно в модуляции воспаления. По этой причине их изучение в рассматриваемом нами контексте имеет первостепенное значение.

Учитывая эти предпосылки, основными задачами исследования являются следующие:

1. Изучение эпигенетики в образцах периферической крови пациентов, получающих CAR-T-терапию. В частности, эпигенетический анализ будет проводиться в циркулирующих лейкоцитах и ​​внеклеточной фракции, содержащейся в нановезикулах плазмы, с целью определения эпигенома и его корреляции с клиническим исходом пациентов;
2. Исследование микроРНК, выделенных из внеклеточных везикул и лейкоцитов пациентов, проходящих терапию CAR-T, с целью корреляции уровней с клиническим исходом пациентов;
3. Изучение популяций лимфоцитов и миелоидных клеток у гематологических пациентов до и после инфузии CAR-T-клеток с целью корреляции уровней с клиническим исходом у пациентов; Для достижения этих целей будет начато моноцентрическое и предварительное исследование, которое включает использование человеческих тканей in vitro, в данном случае крови, у пациентов, подвергшихся инфузии CAR-T-клеток. Исследование будет предложено всем пациентам, проходящим инфузию CAR-T-клеток в рамках программы Advanced Cell Therapy в Университетской больнице IRCCS в Болонье. Ожидается, что исследование продлится 5 лет с набором 35 пациентов в год. Анализ образцов будет проведен бесплатно в лабораториях профессора Массимилиано Бонафе, соавтора исследования.

Образцы периферической крови будут использоваться для проведения исследования и будут взяты в следующее время:

• к аферезу;
• при входе в палату;
• в день -1;
• в день 0 (через 2 часа после инфузии);
• в сутки +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365;

Забор тканей совпадает с забором образцов, который представляет собой текущий стандарт в рутинной клинической практике у трансплантированного пациента; поэтому образцы будут получены с осторожностью, чтобы не сделать недействительными обычные процедуры диагностической помощи. Результаты этого исследования будут иметь первостепенное значение для клинической помощи, направленное на лечение осложнений терапии CAR-T и понимание лежащих в их основе биологических механизмов.