Étude tissulaire chez des patients subissant une thérapie cellulaire CAR-T (CAR_21_01) (CAR_21_01)

L'immunothérapie "CAR-T" ("Chimeric Antigen Receptor T cell therapy") est une thérapie basée sur des lymphocytes T exprimant un récepteur chimique pour un antigène spécifique indiquée pour les patients présentant certains types de pathologies oncohématologiques n'ayant pas répondu à d'autres formes de traitement, tels que : les lymphomes non hodgkiniens récidivants ou réfractaires, y compris le lymphome diffus à grandes cellules B, le lymphome médiastinal à cellules B primaire, le lymphome folliculaire transformé, le lymphome à cellules du manteau, la leucémie aiguë lymphoblastique, chez les enfants et les jeunes adultes (< 26 ans) et les lymphomes multiples myélome. Cette thérapie est une approche absolument innovante qui consiste en une immunothérapie cellulaire vivante personnalisée qui modifie le système immunitaire du patient receveur pour le rendre capable de reconnaître et d'éradiquer les cellules néoplasiques exprimant l'antigène vers lequel les cellules ont été modifiées. La thérapie CAR-T utilise des cellules immunitaires spécifiques (lymphocytes T) du patient, isolées de son sang périphérique, conçues par l'intégration de matériel génétique codant pour le récepteur chimère, expansées in vitro puis réinfusées pour activer la réponse du système immunitaire contre le maladie.

Cette approche présente plusieurs avantages biologiques :

1. fournir au patient des "cellules T reprogrammées" avec un mécanisme d'activation nouveau et spécifique ;
2. surmonter la tolérance immunitaire envers les cellules cancéreuses;
3. contourner les mécanismes de restriction de la reconnaissance des antigènes médiés par HLA ; Les thérapies CAR-T qui ont obtenu l'Autorisation de Mise sur le Marché (AIC) dans l'Union Européenne et en Italie sont : le médicament Kymriah, le médicament Yescarta.

Les indications thérapeutiques pour lesquelles ils ont été agréés sont :

• Kymriah (tisagenlecleucel) : patients pédiatriques et jeunes adultes jusqu'à 25 ans atteints de leucémie aiguë lymphoblastique à cellules B qui n'ont jamais répondu à la chimiothérapie ou qui ont rechuté après une allogreffe de cellules souches hématopoïétiques ou après au moins 2 lignes de chimiothérapie ; les patients atteints d'un lymphome diffus à grandes cellules B ou DLBCL qui ont déjà subi au moins 2 lignes de traitement systémique ;
• Yescarta (axicabtagene ciloleucel) : patients atteints de lymphome diffus à grandes cellules B ou DLBCL, de lymphome médiastinal primitif à cellules B ou PMBCL qui ont déjà reçu au moins 2 lignes de traitement systémique. Les thérapies CAR-T représentent une option thérapeutique importante pour les maladies lymphoprolifératives énumérées ci-dessus et ont été étudiées chez des patients chez qui les stratégies standard précédentes (chimiothérapie et greffe de cellules souches hématopoïétiques) n'ont pas prouvé leur efficacité.

Bien qu'ils représentent une dernière option thérapeutique efficace chez les patients atteints d'une maladie avancée et résistants aux lignes de chimiothérapie traditionnelles, l'utilisation des thérapies CAR-T n'est pas sans complications graves, bien au contraire. Il y a notamment :

• syndrome de libération de cytokines (SRC);
• Réduction des lymphocytes B (hypogammaglobulinémie);
• Effets indésirables neurologiques ;

La compréhension des déterminants de la réponse inflammatoire massive sous-jacente à la toxicité de la thérapie CAR-T reste largement floue. C'est une opinion partagée dans la communauté médico-scientifique que ce qui est défini comme "l'effet cible" des cellules CAR sur les cellules tumorales cibles, et la réponse immunitaire qui en résulte, est l'un des facteurs déclenchant une réaction pro-inflammatoire massive des cytokines, mais les mécanismes qui en sont à la base et qui peuvent prédire et personnaliser le traitement, voire le prévenir, ne sont pas encore définis. Il est émis l'hypothèse, et plusieurs études commencent à être disponibles à ce sujet, que la composition et les ratios des populations de leucocytes (CD4 et CD8 entre autres) utilisées pour la production de CAR T peuvent influencer le résultat clinique chez le patient. En particulier, la prolifération et la persistance des cellules CAR chez le patient sont des facteurs clés pour déterminer l'efficacité de la thérapie elle-même. D'où la nécessité de caractériser les différents sous-ensembles cellulaires aussi bien dans la population CD3+CAR+ que dans la population CD3+CAR- dans l'évolution clinique du patient. Il est également fondamental d'étudier le statut épigénétique des populations lymphocytaires elles-mêmes, ainsi que l'âge biologique du patient qui y est lié. C'est en effet un élément dont on pense qu'il joue un rôle fondamental dans la réponse clinique. En fait, l'appréciation de l'âge biologique d'un sujet est un indice composé de marqueurs moléculaires (comme le statut épigénétique des cellules nucléées), fortement corrélé à l'âge chronologique, mais capable d'exprimer la vitesse de vieillissement de l'individu seul, ainsi que des cellules de son système immunitaire, et par conséquent capable de mettre en évidence avec plus d'emphase que l'âge chronologique les risques pour la santé liés à la thérapie et son état inflammatoire. Un autre élément à prendre en compte dans l'image globale que nous examinons est le rôle que jouent les microARN (miARN) en tant que régulateurs cruciaux de la survie, de la différenciation et de la fonction des lymphocytes T, qui sont tous des facteurs clés influençant le résultat de l'immunothérapie. adoptif basé sur les cellules CAR. Les microARN sont de courts brins d'ARN ayant une fonction régulatrice de l'expression des gènes cellulaires, en particulier dans la modulation de l'inflammation. Pour cette raison, leur étude dans le contexte que nous considérons est primordiale.

Compte tenu de ces prémisses, les principaux objectifs de l'étude sont les suivants :

1. Étude de l'épigénétique dans des échantillons de sang périphérique prélevés sur des patients sous thérapie CAR-T. En particulier, l'analyse épigénétique sera réalisée dans la fraction leucocytaire circulante et extracellulaire contenue dans les nanovésicules plasmatiques afin de déterminer l'épigénome et sa corrélation avec l'évolution clinique des patients ;
2. Etude de microARN extraits de vésicules extracellulaires et de leucocytes de patients sous thérapie CAR-T afin de corréler les niveaux avec le devenir clinique des patients ;
3. Etude des populations lymphocytaires et myéloïdes chez le patient hématologique PRE et POST infusion de cellules CAR-T afin de corréler les niveaux avec l'évolution clinique des patients ; Pour poursuivre ces objectifs, une étude monocentrique et exploratoire sera lancée, qui implique l'utilisation de tissus humains in vitro, en l'occurrence du sang, chez des patients soumis à une infusion de cellules CAR-T. L'étude sera proposée à tous les patients subissant une perfusion de cellules CAR-T dans le cadre du programme de thérapie cellulaire avancée de l'hôpital universitaire IRCCS de Bologne. L'étude devrait durer 5 ans avec un recrutement de 35 patients par an. L'analyse des échantillons sera effectuée gratuitement dans les laboratoires du professeur Massimiliano Bonafè, co-auteur de l'étude.

Des échantillons de sang périphérique seront utilisés pour réaliser l'étude et seront prélevés aux moments suivants :

• à l'aphérèse;
• en entrant dans le service;
• au jour -1 ;
• au jour 0 (2 heures post-perfusion);
• par jour +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365 ;

L'échantillonnage des tissus coïncide avec l'échantillonnage qui représente la norme actuelle dans la pratique clinique de routine chez le patient transplanté ; par conséquent, les échantillons seront obtenus en prenant soin de ne pas invalider les procédures normales d'aide au diagnostic. Les résultats de cette étude auront un impact clinique de première importance visant à gérer les complications de la thérapie CAR-T et à comprendre les mécanismes biologiques qui les sous-tendent.