Badanie tkankowe u pacjentów poddawanych terapii komórkami CAR-T (CAR_21_01) (CAR_21_01)

Immunoterapia „CAR-T” („Chimeric Antigen Receptor T cell therapy”) jest terapią opartą na limfocytach T wykazujących ekspresję receptora chemicznego dla określonego antygenu, wskazaną dla pacjentów z niektórymi typami patologii onkohematologicznych, którzy nie odpowiedzieli na inne formy leczenia, takich jak: nawracające lub oporne na leczenie chłoniaki nieziarnicze, w tym chłoniak rozlany z dużych komórek B, pierwotny chłoniak śródpiersia z komórek B, chłoniak transformowany grudkowy, chłoniak z komórek płaszcza, ostra białaczka limfoblastyczna u dzieci i młodych dorosłych (<26 lat) oraz mnogie szpiczak. Ta terapia jest całkowicie innowacyjnym podejściem, które polega na spersonalizowanej immunoterapii żywymi komórkami, która modyfikuje układ odpornościowy pacjenta, aby był w stanie rozpoznać i wyeliminować komórki nowotworowe eksprymujące antygen, w kierunku którego komórki zostały zmodyfikowane. Terapia CAR-T wykorzystuje swoiste komórki odpornościowe (limfocyty T) pacjenta, wyizolowane z jego krwi obwodowej, opracowane metodami inżynierii poprzez integrację materiału genetycznego kodującego chimeryczny receptor, namnożone in vitro, a następnie ponownie podane w infuzji w celu aktywacji odpowiedzi układu odpornościowego przeciwko choroba.

Takie podejście ma kilka zalet biologicznych:

1. dostarczenie pacjentowi „przeprogramowanych komórek T” z nowym i specyficznym mechanizmem aktywacji;
2. pokonywanie tolerancji immunologicznej wobec komórek nowotworowych;
3. ominięcie mechanizmów restrykcyjnych rozpoznawania antygenu, w których pośredniczy HLA; Terapie CAR-T, które uzyskały pozwolenie na dopuszczenie do obrotu (AIC) w Unii Europejskiej i we Włoszech to: lek Kymriah, lek Yescarta.

Wskazania terapeutyczne, dla których zostały zatwierdzone to:

• Kymriah (tisagenlecleucel): dzieci i młodzież w wieku do 25 lat z ostrą białaczką limfoblastyczną B-komórkową, u których nigdy nie wystąpiła odpowiedź na chemioterapię lub u których doszło do nawrotu choroby po allogenicznym przeszczepieniu krwiotwórczych komórek macierzystych lub po co najmniej 2 liniach chemioterapii; chorzy na rozlanego chłoniaka z dużych komórek B lub DLBCL, którzy przeszli już co najmniej 2 linie leczenia systemowego;
• Yescarta (axicabtagene ciloleucel): pacjenci z rozlanym chłoniakiem z dużych komórek B lub DLBCL, pierwotnym chłoniakiem śródpiersia z komórek B lub PMBCL, którzy otrzymali już co najmniej 2 linie leczenia systemowego. Terapie CAR-T stanowią ważną opcję terapeutyczną dla wymienionych powyżej chorób limfoproliferacyjnych i były badane u pacjentów, u których wcześniejsze standardowe strategie (chemioterapia i przeszczep hematopoetycznych komórek macierzystych) nie okazały się skuteczne.

Choć stanowią skuteczną ostatnią opcję terapeutyczną u pacjentów z zaawansowaną chorobą i opornych na tradycyjne linie chemioterapii, stosowanie terapii CAR-T nie jest pozbawione poważnych powikłań, wręcz przeciwnie. W szczególności są to:

• zespół uwalniania cytokin (CRS);
• Redukcja limfocytów B (hipogammaglobulinemia);
• Niepożądane reakcje neurologiczne;

Zrozumienie uwarunkowań masywnej odpowiedzi zapalnej leżącej u podstaw toksyczności terapii CAR-T pozostaje w dużej mierze niejasne. W społeczności medyczno-naukowej panuje powszechna opinia, że ​​to, co określa się jako „docelowy efekt” komórek CAR na docelowe komórki nowotworowe i wynikająca z tego odpowiedź immunologiczna, jest jednym z czynników wyzwalających masową prozapalną reakcję cytokinową, ale mechanizmy, które są podstawą i które mogą przewidywać i personalizować leczenie, a nawet mu zapobiegać, nie są jeszcze zdefiniowane. Przypuszcza się, i zaczyna być dostępnych kilka badań w tym zakresie, że skład i stosunki populacji leukocytów (między innymi CD4 i CD8) stosowanych do produkcji CAR T mogą wpływać na wynik kliniczny u pacjenta. W szczególności proliferacja i utrzymywanie się komórek CAR u pacjenta są kluczowymi czynnikami decydującymi o skuteczności samej terapii. Stąd potrzeba scharakteryzowania różnych podzbiorów komórek zarówno w populacji CD3 + CAR +, jak iw populacji CD3 + CAR- w przebiegu klinicznym pacjenta. Podstawowe znaczenie ma również badanie statusu epigenetycznego samych populacji limfocytów, a także związanego z tym wieku biologicznego pacjenta. W rzeczywistości jest to pierwiastek, który, jak się uważa, odgrywa fundamentalną rolę w odpowiedzi klinicznej. W rzeczywistości ocena wieku biologicznego podmiotu jest wskaźnikiem złożonym z markerów molekularnych (takich jak status epigenetyczny komórek jądrzastych), silnie skorelowanych z wiekiem chronologicznym, ale zdolnych do wyrażenia szybkości starzenia się pojedynczego osobnika, jak również komórek jego układu odpornościowego, a co za tym idzie, jest w stanie z większym naciskiem niż wiek chronologiczny uwypuklić zagrożenia zdrowotne związane z terapią i stanem zapalnym. Kolejnym elementem do rozważenia w ogólnym obrazie, który rozważamy, jest rola, jaką odgrywają mikroRNA (miRNA) jako kluczowe regulatory przeżycia, różnicowania i funkcji komórek T, z których wszystkie są kluczowymi czynnikami wpływającymi na wynik immunoterapii. adopcyjne oparte na komórkach CAR. MikroRNA to krótkie nici RNA o funkcji regulacyjnej komórkowej ekspresji genów, zwłaszcza w modulacji stanu zapalnego. Z tego powodu badanie ich w rozważanym przez nas kontekście ma pierwszorzędne znaczenie.

Biorąc pod uwagę te przesłanki, głównymi celami badania są:

1. Badanie epigenetyki próbek krwi obwodowej pobranych od pacjentów poddawanych terapii CAR-T. W szczególności zostanie przeprowadzona analiza epigenetyczna krążących leukocytów i frakcji pozakomórkowej zawartych w nanopęcherzykach osocza w celu określenia epigenomu i jego korelacji z wynikami klinicznymi pacjentów;
2. Badanie mikroRNA ekstrahowanych z zewnątrzkomórkowych pęcherzyków i leukocytów pacjentów poddawanych terapii CAR-T w celu skorelowania poziomów z wynikami klinicznymi pacjentów;
3. Badanie populacji limfocytów i szpiku u pacjentów hematologicznych PRZED i PO infuzji komórek CAR-T w celu skorelowania poziomów z wynikami klinicznymi pacjentów; W tym celu uruchomione zostanie badanie monocentryczne i eksploracyjne, polegające na wykorzystaniu tkanek ludzkich in vitro, w tym przypadku krwi, u pacjentów poddanych infuzji komórek CAR-T. Badanie zostanie zaoferowane wszystkim pacjentom poddawanym infuzji komórek CAR-T w ramach Programu Zaawansowanej Terapii Komórkowej Szpitala Uniwersyteckiego IRCCS w Bolonii. Oczekuje się, że badanie potrwa 5 lat i obejmie 35 pacjentów rocznie. Analiza próbek zostanie przeprowadzona bezpłatnie w laboratoriach prof. Massimiliano Bonafè, współautora badania.

Do przeprowadzenia badania zostaną wykorzystane próbki krwi obwodowej, które będą pobierane w następujących terminach:

• do aferezy;
• po wejściu na oddział;
• w dniu -1;
• w dniu 0 (2 godziny po infuzji);
• dziennie +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365;

Pobieranie próbek tkanek pokrywa się z pobieraniem próbek, które reprezentuje aktualny standard w rutynowej praktyce klinicznej u pacjenta po przeszczepie; dlatego próbki będą pobierane z zachowaniem ostrożności, aby nie unieważnić normalnych procedur pomocy diagnostycznej. Wyniki tego badania będą miały pierwszorzędny wpływ na opiekę kliniczną, mającą na celu zarządzanie powikłaniami terapii CAR-T i zrozumienie leżących u ich podstaw mechanizmów biologicznych.