Autologisesta rasvakudoksesta peräisin olevien ADSCS:iden kliinisen tehon arviointi nivelrikkon (OA) hoidossa

Nivelrikko (OA) on rappeuttava sairaus, joka vaikuttaa nivelrustoon ajan myötä ja johon liittyy muutoksia nivelkalvossa, subkondraalisessa luussa, nivelsiteissä ja nivelkierteissä sekä nivelkapselin liikakasvu.

Hoidot ovat tyypillisesti lievittäviä ja lievittävät kipua vain oireenmukaisella tavalla, eivätkä ne pysty pysäyttämään ruston rappeutumista ja sitä seuraavaa muiden nivelrakenteiden hajoamista. Siksi tutkijoiden on ratkaisevan tärkeää ottaa vastaan ​​OA:ta modifioivien lääkkeiden luominen. Aikuisten mesenkymaalisten kantasolujen (MSC) ja rasvaperäisten stroomasolufraktioiden potentiaalia, joka tunnetaan myös stromaalisen verisuonifraktiona, on äskettäin arvioitu kondroprotektiivisen tehon suhteen polvissa.

Tämä tutkimus tehtiin kliinisen tehokkuuden arvioimiseksi ilman epäilystäkään sen jälkeen, kun entsymaattisesti prosessoimattomia rasvaperäisiä stroomasoluja ja verihiutalepitoista plasmaa oli annettu suurelle määrälle (140 potilasta), joilla oli kohtalainen tai vaikea polvi (vaiheet 3 ja 4), objektiivisen MRI-arvioinnin ja 2 vuoden seuranta.

menetelmät

Valintakriteerit sisälsivät 50-vuotiaat tai sitä vanhemmat potilaat, joilla oli oireinen primaarinen polven nivelrikko, joka määriteltiin päivittäisellä kivulla viimeisen kolmen kuukauden ajan, kipulääkkeiden käyttö vähintään kerran viikossa, alle 30 minuutin aamujäykkyys ja WOMAC-pisteet. 75 kohdepolvessa. Grades 3 ja 4 kellergen Radiographic Grading Scale of Osteoarthrosis olivat osa radiografian kelpoisuusvaatimuksia. Poissulkemiskriteerit sisälsivät yksilöt, joilla oli kliinisesti merkittäviä systeemisiä sairauksia, ja potilaat, joilla oli merkkejä sekundaarisesta polven nivelrikosta tai vaikeasta nivelrikosta (niveltilan leveys - JSW 2 mm).

WOMAC-pisteet, jotka ovat kehittäneet Western Ontario ja McMaster yliopistot, on yleisesti käytetty indikaattori potilaiden subjektiivisista arvioista kivusta, nivelten liikkuvuudesta ja fyysisistä vammoista. Siinä 5, 2 ja 17 kysymyksellä arvioidaan kolme ulottuvuutta: kipu, jäykkyys ja fyysinen toiminta. Minimipistemäärä on 0, korkein pistemäärä on 96. Kunkin ala-asteikon enimmäispistemäärä on 20, 8 tai 68 .

Kuuden minuutin kävelymatkan (6MWD) mittaamiseksi sisäkäytävään merkittiin 50 metrin matka, ja osallistujia ohjeistettiin kävelemään niin pitkälle ja nopeasti kuin pystyivät kuuden minuutin aikana. Koko matka laskettiin ja merkittiin muistiin.

Aiemmin kuvattuja toimenpiteitä käyttäen otettiin polvinivelistä antero-posterioriset röntgenkuvat potilaiden seisoessa 1 metrin etäisyydellä röntgenlähteestä polvi täysin ojennettuna. Saumatilan leveys mitattiin sen kapeimmasta kohdasta (minimi JSW). Aikaisemman julkaisun mukaan tätä suuntausta osoitti yli 0,50 mm:n JSW-häviö kokeen aikana.

Polvinivelten antero-posterioriset röntgenkuvat otettiin käyttämällä aiemmin kuvattuja tekniikoita, kun potilaat seisoivat 1 metrin päässä röntgenlähteestä polvet täysin ojennettuna. Liitostilan kapeimmasta kohdasta mitattiin leveys (minimi JSW). Tämä suuntaus osoitti yli 0,50 mm:n JSW-häviötä tutkimuksen aikana edellisen julkaisun mukaisesti.

Potilaita kehotettiin ottamaan etorikoksibia enintään 90 mg:n BD-annoksella aterioiden jälkeen, jos heidän epämukavuutensa oli sietämätöntä. Heitä neuvottiin ottamaan 30 mg kodeiinia tarpeen mukaan, jos epämukavuus jatkuu, ja raportoimaan seuraavana päivänä. Potilaan ilmoittamien oireiden tai viitteiden lisäksi laboratoriopohjaisia ​​hematologisia ja biokemiallisia testejä tehtiin myös osana sietokyky- ja turvallisuusarviointia.

Nivelnesteen mikroskooppinen tutkimus suoritettiin lähtötilanteessa ja kaksi vuotta leikkauksen jälkeen epänormaalien solumäärän tarkistamiseksi. Sen mukaan, missä määrin ne häiritsivät koehenkilön jokapäiväistä toimintaa, haitalliset tapahtumat luokiteltiin yksittäisiksi, ajoittaisiksi tai kroonisiksi. Täydennyksen ja lopputuloksen välinen mahdollinen syy-yhteys luokiteltiin luokkaan Ehdoton/Mahdollinen/Todennäköinen/Ei arvioitava/Ei mitään. Kantasolututkimuksen ja -hoidon institutionaalinen toimikunta antoi hyväksyntänsä hankkeelle. Kaikki potilaat antoivat kirjallisen suostumuksensa osallistua tutkimukseen saatuaan riittävästi tietoa.

SVF:n valmistelu:

Jokaisen potilaan vatsasta otettiin talteen noin 100 ml rasvaa 3 mm:n aspiraatiokanyylin ja tummuvan liuoksen avulla ja laitettiin steriileihin, kertakäyttöisiin 250 ml:n kartiomaisiin sentrifugiputkiin. Rasvakudokselle tehtiin kaksi PBS-pesua, ennen kuin se kavitoitiin ultraäänellä 10 mega hertsin 50 W:n taajuudella 30 minuutin ajan 5 minuutin väliajoin sekoittaen. SVF uutettiin sitten pellettiksi jakamalla suspensio neljään 50 ml:n sentrifugiputkeen ja sentrifugoimalla niitä 500 g:llä viiden minuutin ajan. Jäljelle jääneen entsyymin poistamiseksi pelletti pestiin kahdesti tavallisella suolaliuoksella ennen kuin se suspendoitiin uudelleen PBS:ään. SVF-suspensiota sentrifugoitiin 500 g:lla 5 minuuttia sen jälkeen, kun se oli suodatettu käyttämällä 100 m:n solusiivilä. Ylimääräinen neste kaadettiin. Pelletti laitettiin takaisin yhteen tavallisella suolaliuoksella ja vietiin 40 m:n solusiivilän läpi. Näytteitä kerättiin solujen lukumäärän laskemiseksi, niiden elinvoimaisuuden arvioimiseksi sekä viljelemiseksi ja kantasolujen määrittämiseksi.

PRP-valmiste: Sama luovuttaja, joka toimitti rasvakudoksen ääreisveren, toimitti myös verihiutalepitoisen plasman. ACD-liuos A lisättiin BD-keltaisiin tyhjiöputkiin, joissa oli 20 ml ääreisverta, ja putkia sentrifugoitiin 800 g:ssä 10 minuuttia. Verihiutalepelletin saamiseksi plasmafraktio kerättiin ja sentrifugoitiin 1000 g:ssä 5 minuuttia. Sen jälkeen jäljelle jäi vain 3 ml plasmaa, jota käytettiin verihiutaleiden uudelleensuspendointiin.