Az autológ zsírszövetből származó ADSCS-k klinikai hatékonyságának értékelése az osteoarthritis (OA) kezelésében

Az osteoarthritis (OA) egy degeneratív betegség, amely idővel az ízületi porcot érinti, és a szinovium, a subchondralis csont, a szalagok és a meniszkusz elváltozásai, valamint az ízületi tok hipertrófiája kíséri.

A terápiák jellemzően palliatív jellegűek, és csak tüneti módon csillapítják a fájdalmat, nem állítják meg a porcdegenerációt és az ezt követő egyéb ízületi struktúrák lebomlását. Ezért kulcsfontosságú, hogy a kutatók megbirkózzanak az OA-módosító terápiák létrehozásának kihívásával. A felnőttkori mesenchymális őssejtek (MSC) és a zsírból származó stroma sejtfrakció, más néven stromális vaszkuláris frakció potenciálját a közelmúltban értékelték a chondroprotektív hatékonyság szempontjából oa térdben.

A jelen vizsgálat célja, hogy kétségtelenül értékelje a klinikai hatékonyságot, miután nem enzimatikusan feldolgozott zsírból származó stromasejteket, valamint vérlemezkékben gazdag plazmát adtak be nagy számban (140 beteg) közepesen súlyos vagy súlyos térdben (3. és 4. stádium) objektív MRI-vizsgálattal és 2 éves követés.

Mód

A kiválasztási kritériumok között szerepeltek olyan 50 éves vagy idősebb betegek, akiknek tüneti primer térdízületi osteoarthritisben szenvedtek az elmúlt három hónapban, amelyet a napi fájdalom határoz meg az elmúlt három hónapban, fájdalomcsillapítót legalább hetente egyszer alkalmaztak, 30 percnél kevesebb reggeli merevséget és WOMAC pontszámot kapott. 75-ből a céltérdben. A 3. és 4. fokozatú kellergen Az osteoarthritis radiográfiai osztályozási skálája a radiográfiai minősítési követelmények részét képezte. A kizárási kritériumok közé tartoztak a klinikailag jelentős szisztémás betegségben szenvedő egyének, valamint a másodlagos térd osteoarthritisben vagy súlyos osteoarthritisben szenvedő betegek (az ízületi tér szélessége – JSW 2 mm).

A WOMAC pontszám, amelyet a Western Ontario és a McMaster Egyetem dolgozott ki, általánosan használt mutatója a betegek fájdalomra, ízületi mobilitásra és fizikai károsodásra vonatkozó szubjektív értékelésének. 5, 2, illetve 17 kérdéssel három dimenziót mér: a fájdalmat, a merevséget és a fizikai funkciót. A minimális pontszám 0, a legmagasabb pontszám 96. Az egyes alskálák maximális pontszáma ennek megfelelően 20, 8 vagy 68.

A hatperces sétatáv (6MWD) méréséhez egy belső folyosón egy 50 m-es távot jelöltek ki, és a résztvevőket arra utasították, hogy hat perc alatt olyan messzire és olyan gyorsan gyalogoljanak, amennyit csak tudnak. A teljes távolságot kiszámították és feljegyezték.

A korábban ismertetett eljárásokkal a térdízületek antero-posterior röntgenfelvételeit a röntgenforrástól 1 m távolságra álló betegeknél, teljesen kinyújtott térddel készítették. Az illesztési hézag szélességét a legszűkebb pontján mértük (minimális JSW). Egy korábbi publikáció szerint ezt a tendenciát a JSW több mint 0,50 mm-es vesztesége jelezte a kísérlet során.

A térdízületek antero-posterior röntgenfelvételei a korábban leírt technikákkal készültek, miközben a betegek teljesen kinyújtott térddel 1 m-re álltak a röntgenforrástól. Az illesztési tér legszűkebb pontján mértük a szélességet (minimális JSW). Ezt a tendenciát a 0,50 mm-nél nagyobb JSW veszteség mutatta a vizsgálat során, egy korábbi publikációnak megfelelően.

A betegeket arra utasították, hogy étkezés után legfeljebb 90 mg BD adagban vegyenek be etorikoxibot, ha a kellemetlen érzésük elviselhetetlen. Azt az utasítást kapták, hogy szükség szerint vegyenek be 30 mg kodeint, ha a kellemetlen érzés továbbra is fennáll, és másnap jelentsék. A beteg által jelzett tüneteken és jelzéseken kívül laboratóriumi alapú hematológiai és biokémiai vizsgálatokat is végeztek a tolerancia és a biztonságosság értékelése részeként.

Az ízületi folyadék mikroszkópos vizsgálatát végezték el a kiinduláskor és két évvel a műtét után, hogy ellenőrizzék a kóros sejtszámot. Aszerint, hogy milyen mértékben zavarták be az alany mindennapi tevékenységeit, a nemkívánatos eseményeket izolált, időszakos vagy krónikusnak minősítették. A kiegészítés és az eredmény közötti lehetséges ok-okozati összefüggést Határozott/Lehetséges/Valószínű/Nem értékelhető/Nincs kategóriába soroltuk. Az Őssejtkutatási és -terápiás intézményi bizottság jóváhagyta a projektet. Valamennyi beteg írásos beleegyezését adta a vizsgálatban való részvételhez, miután elegendő információhoz jutott.

SVF előkészítés:

3 mm-es aspirációs kanül és tumeszcens oldat segítségével minden beteg hasából kb. 100 ml zsírt gyűjtöttünk, és steril, eldobható 250 ml-es kúpos centrifugacsövekbe helyeztük. A zsírszövetet két PBS-mosásnak vetették alá, majd ultrahanggal, 10 mega hertz, 50 W-on, 30 percig, 5 perces keverés mellett ultrahangos kavitációt végeztek. Az SVF-et ezután pelletként extraháltuk úgy, hogy a szuszpenziót négy 50 ml-es centrifugacsőre osztották, és 500 g-vel 5 percig centrifugálták. A megmaradt enzimek eltávolítása érdekében a pelletet kétszer mostuk normál sóoldattal, mielőtt újraszuszpendáltuk PBS-ben. Az SVF szuszpenziót 500 g-n 5 percig centrifugáltuk, miután 100 m-es sejtszűrővel szűrtük. A felesleges folyadékot kiengedték. A pelletet normál sóoldattal újra összeöntöttük, és egy 40 m-es sejtszűrőn engedtük át. A sejtek számának megszámlálására, vitalitásuk felmérésére, valamint tenyésztésére és az őssejtek meghatározására mintákat gyűjtöttünk.

PRP készítmény: Ugyanaz a donor, aki a zsírszövet perifériás vérét biztosította a vérlemezkében gazdag plazmát is. Az ACD oldatot BD sárga tetejű vákuumcsövekbe adtuk 20 ml perifériás vérrel, és a csöveket 800 g-vel centrifugáltuk 10 percig. A vérlemezke-pellet előállításához a plazmafrakciót összegyűjtöttük, és 1000 g-vel 5 percig centrifugáltuk. Ezután már csak 3 ml plazma maradt, amelyet a vérlemezkék reszuszpendálására használtak.