Avaliação da eficácia clínica de ADSCSs derivados de tecido adiposo autólogo no tratamento de osteoartrite (OA)

A osteoartrite (OA) é uma doença degenerativa que afeta a cartilagem articular ao longo do tempo e é acompanhada por alterações da sinóvia, osso subcondral, ligamentos e meniscos, além de hipertrofia da cápsula articular.

As terapias são tipicamente paliativas e apenas aliviam a dor de forma sintomática, falhando em interromper a degeneração da cartilagem e a consequente destruição de outras estruturas articulares. Portanto, é crucial que os pesquisadores enfrentem o desafio de criar terapêuticas modificadoras da OA. O potencial das células-tronco mesenquimais adultas (MSCs) e da fração de células estromais derivadas do tecido adiposo, também conhecida como fração vascular estromal, foi recentemente avaliado quanto à eficácia condroprotetora em joelhos oa.

O presente estudo foi realizado para avaliar a eficácia clínica, sem qualquer dúvida, após a administração de células estromais derivadas de tecido adiposo não processadas enzimaticamente, juntamente com plasma rico em plaquetas em grande número (140 pacientes) com joelho moderado a grave (estágio 3 e 4) com avaliação objetiva por ressonância magnética e 2 anos de acompanhamento.

Métodos

Os critérios de seleção incluíram pacientes com 50 anos de idade ou mais com osteoartrite primária sintomática do joelho definida por dor diária nos últimos três meses, uso de analgésicos pelo menos uma vez por semana, menos de 30 minutos de rigidez matinal e um escore WOMAC de 75 no joelho alvo. Graus 3 e 4 Kellergen Radiographic Grading Scale of Osteoarthritis faziam parte dos requisitos de qualificação radiográfica. Os critérios de exclusão incluíram indivíduos com doenças sistêmicas clinicamente significativas e pacientes com evidência de osteoartrite secundária do joelho ou osteoartrite grave (largura do espaço articular-JSW 2 mm).

O escore WOMAC, desenvolvido pelas Universidades de Western Ontario e McMaster, é um indicador comumente usado para avaliações subjetivas de dor, mobilidade articular e deficiência física dos pacientes. Com 5, 2 e 17 questões, respectivamente, avalia três dimensões: dor, rigidez e função física. A pontuação mínima é 0, a pontuação máxima é 96. A pontuação máxima para cada subescala é 20, 8 ou 68, respectivamente.

Para mensurar a distância percorrida em seis minutos (TC6M), foi marcada uma distância de 50 m em um corredor interno, e os participantes foram instruídos a caminhar a maior distância e o mais rápido possível durante seis minutos. Toda a distância foi calculada e anotada.

Usando os procedimentos descritos anteriormente, as radiografias anteroposteriores das articulações do joelho foram feitas com os pacientes em pé a uma distância de 1 m da fonte de raios-X, com o joelho completamente estendido. A largura do espaço articular foi medida em seu ponto mais estreito (JSW mínimo). De acordo com uma publicação anterior, esta tendência foi indicada por uma perda JSW de mais de 0,50 mm durante o ensaio.

As radiografias ântero-posteriores das articulações do joelho foram adquiridas usando as técnicas descritas anteriormente, enquanto os pacientes ficavam a 1 m de distância da fonte de raios-X com os joelhos totalmente estendidos. No ponto mais estreito do espaço articular, a largura foi medida (JSW mínimo). Essa tendência foi demonstrada por uma perda JSW de mais de 0,50 mm durante o estudo, de acordo com publicação anterior.

Os pacientes foram instruídos a tomar etoricoxibe em uma dose não superior a 90 mg BD após as refeições se o desconforto fosse intolerável. Eles foram instruídos a tomar 30 mg de codeína conforme necessário se o desconforto persistisse e relatar no dia seguinte. Além de quaisquer sintomas ou indícios relatados pelo paciente, testes laboratoriais hematológicos e bioquímicos também foram realizados como parte das avaliações de tolerância e segurança.

Um exame microscópico do líquido sinovial foi realizado no início e dois anos após a cirurgia para verificar a contagem de células anormais. De acordo com o grau de interferência nas atividades cotidianas do sujeito, as ocorrências adversas foram classificadas como isoladas, intermitentes ou crônicas. A possível associação causal entre o suplemento e o desfecho foi categorizada como Definida/Possível/Provável/Não Avaliada/Nenhuma. O comitê institucional de pesquisa e terapia com células-tronco deu sua aprovação ao projeto. Todos os pacientes forneceram consentimento por escrito para participar do estudo após receberem informações suficientes.

Preparação SVF:

Com o auxílio de uma cânula de aspiração de 3 mm e solução tumescente, foram coletados cerca de 100 ml de gordura da barriga de cada paciente e colocados em tubos cônicos de centrífuga de 250 ml, estéreis e descartáveis. O tecido adiposo foi submetido a duas lavagens com PBS antes de ser cavitado por ultrassom a 10 mega hertz ,50 W por 30 minutos com intervalos de 5 minutos de agitação. O SVF foi então extraído como um pellet dividindo a suspensão em quatro tubos de centrífuga de 50 ml e centrifugando-os a 500 g por cinco minutos. Para se livrar de qualquer enzima remanescente, o pellet foi lavado duas vezes com solução salina regular antes de ser ressuspenso em PBS. A suspensão SVF foi centrifugada a 500 g por 5 min após ser filtrada usando um filtro de células de 100 m. O fluido extra foi despejado. O pellet foi recolocado com soro fisiológico regular e passado por um filtro de célula de 40 m. Amostras foram coletadas para contar o número de células, avaliar sua vitalidade e cultivar e definir as células-tronco.

Preparo do PRP: O mesmo doador que forneceu o sangue periférico do tecido adiposo também forneceu o plasma rico em plaquetas. A solução ACD A foi adicionada a tubos de vácuo de tampa amarela BD com 20 ml de sangue periférico e os tubos foram centrifugados a 800 g por 10 min. Para obter um pellet de plaquetas, a fração de plasma foi coletada e centrifugada a 1000 g por 5 min. Depois disso, restaram apenas 3 ml de plasma, que foram usados ​​para ressuspender as plaquetas.