Evaluatie van de klinische werkzaamheid van uit autoloog vetweefsel afgeleide ADSCS'en bij de behandeling van artrose (OA)

Artrose (OA) is een degeneratieve ziekte die het gewrichtskraakbeen na verloop van tijd aantast en gepaard gaat met veranderingen aan het synovium, subchondraal bot, ligamenten en menisci, evenals hypertrofie van het gewrichtskapsel.

Therapieën zijn typisch palliatief en verlichten pijn alleen op een symptomatische manier, waarbij ze de afbraak van kraakbeen en de daaropvolgende afbraak van andere gewrichtsstructuren niet stoppen. Het potentieel van volwassen mesenchymale stamcellen (MSC's) en van vet afgeleide stromale celfractie, ook bekend als stromale vasculaire fractie, is onlangs geëvalueerd op chondroprotectieve werkzaamheid bij oa knieën.

De huidige studie werd uitgevoerd om de klinische effectiviteit zonder enige twijfel te evalueren na toediening van niet-enzymatisch verwerkte van vetweefsel afgeleide stromale cellen samen met bloedplaatjesrijk plasma bij een groot aantal (140 patiënten) met matige tot ernstige knie (stadium 3 en 4) met objectieve MRI-beoordeling en 2 jaar follow-up.

methoden

Tot de selectiecriteria behoorden patiënten van 50 jaar of ouder met symptomatische primaire artrose van de knie die werd gedefinieerd door dagelijkse pijn gedurende de voorgaande drie maanden, gebruik van analgetica ten minste eenmaal per week, minder dan 30 minuten ochtendstijfheid en een WOMAC-score. van 75 in de doelknie. Graad 3 en 4 kellergen Radiografische beoordelingsschaal van artrose maakten deel uit van de radiografische kwalificatie-eisen. De uitsluitingscriteria omvatten personen met klinisch significante systemische ziekten en patiënten met tekenen van secundaire artrose van de knie of ernstige artrose (breedte gewrichtsruimte - JSW 2 mm).

De WOMAC-score, ontwikkeld door Western Ontario en McMaster Universities, is een veelgebruikte indicator van de subjectieve beoordelingen van pijn, gewrichtsmobiliteit en fysieke beperkingen van patiënten. Met respectievelijk 5, 2 en 17 vragen beoordeelt het drie dimensies: pijn, stijfheid en fysiek functioneren. Een minimale score is 0, de hoogste score is 96. De maximale score voor elke subschaal is respectievelijk 20, 8 of 68 .

Om de zes minuten loopafstand (6MWD) te meten, werd in een interne gang een afstand van 50 m gemarkeerd en kregen de deelnemers de instructie om zo ver en zo snel mogelijk te lopen in de loop van zes minuten. De hele afstand werd berekend en genoteerd.

Met behulp van eerder beschreven procedures werden antero-posterieure röntgenfoto's van de kniegewrichten gemaakt met patiënten die op een afstand van 1 m van de röntgenbron stonden, met de knie volledig gestrekt. De voegbreedte werd gemeten op het smalste punt (minimale JSW). Volgens een eerdere publicatie werd deze trend aangegeven door een JSW-verlies van meer dan 0,50 mm tijdens de proef.

Antero-posterieure röntgenfoto's van de kniegewrichten werden gemaakt met behulp van de eerder beschreven technieken terwijl patiënten op 1 m afstand van de röntgenbron stonden met hun knieën volledig gestrekt. Op het smalste punt van de gewrichtsruimte werd de breedte gemeten (minimale JSW). Deze tendens werd aangetoond door een JSW-verlies van meer dan 0,50 mm tijdens het onderzoek, in overeenstemming met een eerdere publicatie.

Patiënten kregen de instructie om etoricoxib in te nemen in een dosis van niet meer dan 90 mg tweemaal daags na de maaltijd als hun ongemak ondraaglijk was. Ze kregen de instructie om naar behoefte 30 mg codeïne in te nemen als het ongemak aanhield en dit de volgende dag te melden. Afgezien van eventuele symptomen of indicaties die de patiënt meldde, werden ook laboratoriumgebaseerde hematologische en biochemische tests uitgevoerd als onderdeel van de tolerantie- en veiligheidsevaluaties.

Een microscopisch onderzoek van de synoviale vloeistof werd uitgevoerd bij baseline en twee jaar na de operatie om te controleren op abnormale celtellingen. Afhankelijk van de mate waarin ze de dagelijkse activiteiten van de proefpersoon hinderden, werden bijwerkingen geclassificeerd als geïsoleerd, intermitterend of chronisch. Het mogelijke oorzakelijke verband tussen de aanvulling en de uitkomst werd gecategoriseerd als Definitief/Mogelijk/Waarschijnlijk/Niet-beoordeelbaar/Geen. De instellingscommissie voor stamcelonderzoek en -therapie keurde het project goed. Alle patiënten gaven schriftelijke toestemming om deel te nemen aan het onderzoek nadat ze voldoende informatie hadden ontvangen.

SVF-voorbereiding:

Met behulp van een afzuigcanule van 3 mm en een tumescente oplossing werd ongeveer 100 ml vet uit de buik van elke patiënt verzameld en in steriele wegwerpconische centrifugebuizen van 250 ml gebracht. Het vetweefsel onderging twee PBS-wassingen voordat het sonisch werd gecaviteerd door middel van ultrageluid bij 10 megahertz, 50 W gedurende 30 minuten met tussenpozen van 5 minuten van agitatie. De SVF werd vervolgens geëxtraheerd als een pellet door de suspensie te verdelen in vier centrifugebuisjes van 50 ml en deze vijf minuten te centrifugeren bij 500 g. Om eventueel achtergebleven enzym kwijt te raken, werd de pellet twee keer gewassen met gewone zoutoplossing voordat hij opnieuw in PBS werd gesuspendeerd. De SVF-suspensie werd gedurende 5 minuten bij 500 g gecentrifugeerd na te zijn gefiltreerd met behulp van een celzeef van 100 µm. De extra vloeistof werd gedumpt. De pellet werd weer in elkaar gezet met gewone zoutoplossing en door een celzeef van 40 m geleid. Er werden monsters verzameld om het aantal cellen te tellen, hun vitaliteit te beoordelen en de stamcellen te cultiveren en te definiëren.

PRP-voorbereiding: dezelfde donor die het perifere bloed van het vetweefsel leverde, leverde ook het bloedplaatjesrijke plasma. ACD-oplossing A werd toegevoegd aan BD-vacuümbuizen met gele bovenkant met 20 ml perifeer bloed en de buizen werden 10 minuten bij 800 g gecentrifugeerd. Om een ​​plaatjepellet te verkrijgen, werd de plasmafractie verzameld en gedurende 5 minuten bij 1000 g gecentrifugeerd. Daarna bleef er slechts 3 ml plasma over, dat werd gebruikt om de bloedplaatjes te resuspenderen.