Оценка клинической эффективности ADSCS, полученных из аутологичной жировой ткани, при лечении остеоартрита (ОА)

Остеоартрит (ОА) — дегенеративное заболевание, которое с течением времени поражает суставной хрящ и сопровождается изменениями в синовиальной оболочке, субхондральной кости, связках и менисках, а также гипертрофией суставной капсулы.

Терапия обычно является паллиативной и снимает боль только симптоматически, не останавливая дегенерацию хряща и последующее разрушение других суставных структур. Поэтому для исследователей крайне важно решить задачу создания терапии, модифицирующей ОА. Потенциал взрослых мезенхимальных стволовых клеток (МСК) и фракции стромальных клеток, полученных из жировой ткани, также известной как стромально-васкулярная фракция, недавно оценивался в отношении хондропротекторной эффективности при ОА коленных суставов.

Настоящее исследование было предпринято для оценки клинической эффективности без каких-либо сомнений после введения неферментативно обработанных стромальных клеток, полученных из жировой ткани, вместе с богатой тромбоцитами плазмой в большом количестве (140 пациентов) с коленным суставом от средней до тяжелой степени (стадия 3 и 4) с объективной оценкой МРТ и 2 года наблюдения.

Методы

Критерии отбора включали пациентов в возрасте 50 лет и старше с симптоматическим первичным остеоартрозом коленного сустава, который определялся ежедневной болью в течение предыдущих трех месяцев, использованием анальгетиков не реже одного раза в неделю, менее чем 30-минутной утренней скованностью и оценкой WOMAC. 75 в целевом колене. 3 и 4 классы радиографической шкалы оценки остеоартрита по Келлергену были частью рентгенографических квалификационных требований. Критерии исключения включали лиц с клинически значимыми системными заболеваниями и пациентов с признаками вторичного остеоартроза коленного сустава или тяжелого остеоартроза (ширина суставной щели - JSW 2 мм).

Шкала WOMAC, разработанная университетами Западного Онтарио и Макмастера, является широко используемым индикатором субъективной оценки пациентами боли, подвижности суставов и физических нарушений. С помощью 5, 2 и 17 вопросов соответственно он оценивает три измерения: боль, скованность и физическую функцию. Минимальный балл — 0, максимальный — 96. Максимальное количество баллов по каждой подшкале составляет 20, 8 или 68 соответственно.

Чтобы измерить дистанцию ​​шестиминутной ходьбы (6MWD), во внутреннем коридоре было отмечено расстояние 50 м, и участникам было предложено пройти как можно дальше и быстрее в течение шести минут. Все расстояние было рассчитано и отмечено.

С использованием ранее описанных процедур были выполнены переднезадние рентгенограммы коленных суставов у пациентов, стоящих на расстоянии 1 м от источника рентгеновского излучения, с полностью разогнутым коленом. Ширину суставной щели измеряли в ее самом узком месте (минимальный JSW). Согласно предыдущей публикации, на эту тенденцию указывала потеря JSW более чем на 0,50 мм в ходе испытания.

Переднезадние рентгенограммы коленных суставов были получены с использованием ранее описанных методов, когда пациенты стояли на расстоянии 1 м от источника рентгеновского излучения с полностью выпрямленными коленями. В самом узком месте суставной щели измеряли ширину (минимальная JSW). Эта тенденция была показана потерей JSW более 0,50 мм во время исследования, в соответствии с предыдущей публикацией.

Пациентам было рекомендовано принимать эторикоксиб в дозе не более 90 мг 2 раза в день после еды при невыносимом дискомфорте. Им было приказано принимать 30 мг кодеина по мере необходимости, если дискомфорт сохраняется, и сообщать об этом на следующий день. Помимо любых симптомов или признаков, о которых сообщил пациент, в рамках оценок переносимости и безопасности также проводились лабораторные гематологические и биохимические тесты.

Микроскопическое исследование синовиальной жидкости проводилось исходно и через два года после операции для проверки количества аномальных клеток. В зависимости от степени, в которой они мешали повседневной деятельности субъекта, нежелательные явления классифицировались как изолированные, периодические или хронические. Возможная причинно-следственная связь между добавкой и результатом была классифицирована как определенная/возможная/вероятная/не поддающаяся оценке/отсутствующая. Институциональный комитет по исследованиям и терапии стволовыми клетками одобрил проект. Все пациенты дали письменное согласие на участие в исследовании после получения достаточной информации.

Подготовка СВФ:

С помощью аспирационной канюли диаметром 3 мм и тумесцентного раствора из живота каждого пациента было взято около 100 мл жира и помещено в стерильные одноразовые конические центрифужные пробирки объемом 250 мл. Жировая ткань подвергалась двум промываниям PBS, после чего подвергалась звуковой кавитации ультразвуком с частотой 10 мегагерц, 50 Вт в течение 30 минут с 5-минутными интервалами взбалтывания. Затем SVF экстрагировали в виде осадка путем разделения суспензии на четыре центрифужных пробирки объемом 50 мл и центрифугирования их при 500 g в течение пяти минут. Чтобы избавиться от любого оставшегося фермента, осадок дважды промывали обычным физиологическим раствором перед ресуспендированием в PBS. Суспензию СВФ центрифугировали при 500 g в течение 5 мин после фильтрации с использованием 100-мкм сетчатого фильтра. Лишняя жидкость слилась. Осадок снова соединяли с обычным физиологическим раствором и пропускали через 40-мкм сетчатый фильтр. Образцы были собраны для подсчета количества клеток, оценки их жизнеспособности, культивирования и определения стволовых клеток.

Подготовка PRP: тот же донор, который предоставил периферическую кровь жировой ткани, также предоставил богатую тромбоцитами плазму. Раствор ACD А добавляли в вакуумные пробирки BD с желтым верхом с 20 мл периферической крови и центрифугировали пробирки при 800 g в течение 10 мин. Для получения осадка тромбоцитов фракцию плазмы собирали и центрифугировали при 1000 g в течение 5 мин. После этого осталось всего 3 мл плазмы, которую использовали для ресуспендирования тромбоцитов.