Ocena skuteczności klinicznej autologicznych ADSCS pochodzących z tkanki tłuszczowej w leczeniu choroby zwyrodnieniowej stawów (OA)

Choroba zwyrodnieniowa stawów (ChZS) jest chorobą zwyrodnieniową, która z czasem atakuje chrząstkę stawową i towarzyszą jej zmiany błony maziowej, kości podchrzęstnej, więzadeł i łąkotek, a także przerost torebki stawowej.

Terapie są typowo paliatywne i łagodzą ból jedynie w sposób objawowy, nie powstrzymując degeneracji chrząstki i następującego po niej rozpadu innych struktur stawowych. Potencjał dorosłych mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) i frakcji komórek zrębowych pochodzących z tkanki tłuszczowej, znanej również jako frakcja naczyniowa zrębu, został ostatnio oceniony pod kątem skuteczności chondroprotekcyjnej w stawach kolanowych.

Niniejsze badanie zostało podjęte w celu oceny skuteczności klinicznej bez żadnych wątpliwości po podaniu nieenzymatycznie przetworzonych komórek zrębowych pochodzących z tkanki tłuszczowej wraz z osoczem bogatopłytkowym w dużej liczbie (140 pacjentów) z kolanem od umiarkowanego do ciężkiego (stadium 3 i 4) z obiektywną oceną MRI i 2 lata obserwacji.

Metody

Kryteria wyboru obejmowały pacjentów w wieku 50 lat lub starszych z objawową pierwotną chorobą zwyrodnieniową stawu kolanowego, którą definiowano na podstawie codziennego bólu przez poprzednie trzy miesiące, stosowania leków przeciwbólowych co najmniej raz w tygodniu, sztywności porannej trwającej krócej niż 30 minut oraz wyniku WOMAC 75 w docelowym kolanie. Stopień 3 i 4 Kellergena Radiograficznej skali oceny choroby zwyrodnieniowej stawów były częścią radiologicznych wymagań kwalifikacyjnych. Kryteria wykluczenia obejmowały osoby z klinicznie istotnymi chorobami ogólnoustrojowymi oraz pacjentów z objawami wtórnej choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego lub ciężkiej choroby zwyrodnieniowej stawów (szer. szpary stawowej – JSW 2 mm).

Skala WOMAC, opracowana przez uniwersytety Western Ontario i McMaster, jest powszechnie stosowanym wskaźnikiem subiektywnej oceny bólu, ruchomości stawów i upośledzenia fizycznego przez pacjentów. Za pomocą odpowiednio 5, 2 i 17 pytań ocenia trzy wymiary: ból, sztywność i sprawność fizyczną. Minimalny wynik to 0, najwyższy wynik to 96. Maksymalny wynik dla każdej podskali wynosi odpowiednio 20, 8 lub 68.

Aby zmierzyć sześciominutowy dystans marszu (6MWD), w wewnętrznym korytarzu wyznaczono dystans 50 m, a uczestnicy zostali poinstruowani, aby w ciągu sześciu minut przejść jak najdalej i tak szybko, jak tylko potrafią. Cała odległość została obliczona i zapisana.

Wykorzystując opisane wcześniej procedury wykonano zdjęcia radiologiczne przednio-tylne stawów kolanowych u pacjentów stojących w odległości 1 m od źródła promieniowania rentgenowskiego z kolanem całkowicie wyprostowanym. Szerokość szpary stawowej mierzono w jej najwęższym miejscu (minimalny JSW). Zgodnie z wcześniejszą publikacją trend ten wskazywał na ubytek JSW większy niż 0,50 mm w trakcie próby.

Zdjęcia rentgenowskie przednio-tylne stawów kolanowych wykonano przy użyciu wcześniej opisanych technik, podczas gdy pacjenci stali w odległości 1 m od źródła promieniowania rentgenowskiego z całkowicie wyprostowanymi kolanami. W najwęższym miejscu szpary stawowej mierzono szerokość (minimalny JSW). Tendencja ta została wykazana przez ubytek JSW większy niż 0,50 mm podczas badań, zgodnie z wcześniejszą publikacją.

Pacjentów poinstruowano, aby przyjmowali etorykoksyb w dawce nie większej niż 90 mg dziennie po posiłkach, jeśli dyskomfort był nie do zniesienia. Poinstruowano ich, aby przyjmowali 30 mg kodeiny w razie potrzeby, jeśli dyskomfort utrzymywał się i zgłaszali się następnego dnia. Oprócz jakichkolwiek objawów lub wskazań zgłaszanych przez pacjenta, w ramach oceny tolerancji i bezpieczeństwa wykonano również laboratoryjne badania hematologiczne i biochemiczne.

Badanie mikroskopowe płynu maziowego przeprowadzono na początku badania i dwa lata po operacji w celu sprawdzenia nieprawidłowej liczby komórek. W zależności od stopnia ingerencji w codzienne czynności podmiotu zdarzenia niepożądane zostały sklasyfikowane jako pojedyncze, przerywane lub przewlekłe. Możliwy związek przyczynowy między suplementem a wynikiem został sklasyfikowany jako określony/możliwy/prawdopodobny/niemożliwy do oceny/brak. Instytucjonalna komisja ds. badań nad komórkami macierzystymi i terapią wyraziła zgodę na projekt. Wszyscy pacjenci wyrazili pisemną zgodę na udział w badaniu po uzyskaniu wystarczających informacji.

Przygotowanie SVF:

Za pomocą kaniuli aspiracyjnej 3 mm i roztworu tumescencyjnego pobrano około 100 ml tłuszczu z brzucha każdego pacjenta i umieszczono w sterylnych, jednorazowych stożkowych probówkach wirówkowych o pojemności 250 ml. Tkankę tłuszczową poddano dwukrotnemu przemyciu PBS, po czym poddano kawitacji ultradźwiękowej przy 10 megahercach, 50 W przez 30 minut z 5-minutowymi przerwami na mieszanie. Następnie SVF ekstrahowano w postaci osadu przez podzielenie zawiesiny do czterech 50 ml probówek wirówkowych i wirowanie ich przy 500 g przez pięć minut. Aby pozbyć się jakiegokolwiek pozostałego enzymu, osad przemyto dwukrotnie zwykłą solą fizjologiczną przed ponownym zawieszeniem w PBS. Zawiesinę SVF wirowano przy 500 g przez 5 minut po przesączeniu przy użyciu 100 µm filtra do komórek. Nadmiar płynu został zrzucony. Osad ponownie połączono ze zwykłą solą fizjologiczną i przepuszczono przez 40 µm filtr do komórek. Pobrano próbki w celu policzenia komórek, oceny ich żywotności oraz hodowli i określenia komórek macierzystych.

Przygotowanie PRP: Ten sam dawca, który dostarczył krew obwodową tkanki tłuszczowej, dostarczył również osocze bogatopłytkowe. ACD Roztwór A dodano do żółtych probówek próżniowych BD z 20 ml krwi obwodowej i probówki wirowano przy 800 g przez 10 minut. Aby otrzymać osad płytek, zebrano frakcję osocza i wirowano przy 1000 g przez 5 minut. Po tym pozostały już tylko 3 ml osocza, którego użyto do ponownego zawieszenia płytek krwi.