Valutazione dell'efficacia clinica delle ADSCS derivate dal tessuto adiposo autologo nel trattamento dell'osteoartrite (OA)

L'artrosi (OA) è una malattia degenerativa che colpisce nel tempo la cartilagine articolare ed è accompagnata da alterazioni della sinovia, dell'osso subcondrale, dei legamenti e dei menischi, nonché dall'ipertrofia della capsula articolare.

Le terapie sono tipicamente palliative e alleviano il dolore solo in modo sintomatico, non riuscendo a fermare la degenerazione della cartilagine e la conseguente rottura di altre strutture articolari. Pertanto, è fondamentale per i ricercatori affrontare la sfida di creare terapie che modifichino l'OA. Il potenziale delle cellule staminali mesenchimali adulte (MSC) e della frazione di cellule stromali derivate adipose, nota anche come frazione vascolare stromale, è stato recentemente valutato per l'efficacia condroprotettiva nelle ginocchia oa.

Il presente studio è stato condotto per valutare l'efficacia clinica senza alcun dubbio dopo la somministrazione di cellule stromali derivate da adiposo non processate enzimaticamente insieme a plasma ricco di piastrine in un gran numero (140 pazienti) con ginocchio da moderato a grave (fase 3 e 4) con valutazione MRI oggettiva e follow-up a 2 anni.

Metodi

I criteri di selezione includevano pazienti di età pari o superiore a 50 anni con artrosi primaria sintomatica del ginocchio definita da dolore quotidiano nei tre mesi precedenti, uso di analgesici almeno una volta alla settimana, meno di 30 minuti di rigidità mattutina e un punteggio WOMAC di 75 nel ginocchio bersaglio. I gradi 3 e 4 della Kellergen Radiographic Grading Scale of Osteoarthritis facevano parte dei requisiti di qualificazione radiografica. I criteri di esclusione includevano individui con malattie sistemiche clinicamente significative e pazienti con evidenza di artrosi del ginocchio secondaria o artrosi grave (larghezza dello spazio articolare-JSW 2 mm).

Il punteggio WOMAC, sviluppato dalle università dell'Ontario occidentale e McMaster, è un indicatore comunemente usato delle valutazioni soggettive del dolore, della mobilità articolare e della menomazione fisica dei pazienti. Con 5, 2 e 17 domande, rispettivamente, valuta tre dimensioni: dolore, rigidità e funzione fisica. Un punteggio minimo è 0, il punteggio più alto è 96. Il punteggio massimo per ogni sottoscala è 20, 8 o 68, corrispondentemente.

Per misurare la distanza percorsa in sei minuti (6MWD), è stata segnata una distanza di 50 m in un corridoio interno e ai partecipanti è stato chiesto di camminare il più lontano e il più rapidamente possibile durante il corso di sei minuti. L'intera distanza è stata calcolata e annotata.

Utilizzando le procedure precedentemente descritte, sono state eseguite radiografie antero-posteriori delle articolazioni del ginocchio con pazienti in piedi a una distanza di 1 m dalla sorgente di raggi X, con il ginocchio completamente esteso. La larghezza dello spazio articolare è stata misurata nel suo punto più stretto (JSW minimo). Secondo una pubblicazione precedente, questa tendenza è stata indicata da una perdita JSW di oltre 0,50 mm durante la prova.

Le radiografie antero-posteriori delle articolazioni del ginocchio sono state acquisite utilizzando le tecniche precedentemente descritte mentre i pazienti si trovavano a 1 m di distanza dalla sorgente di raggi X con le ginocchia completamente estese. Nel punto più stretto dello spazio articolare, è stata misurata l'ampiezza (minimo JSW). Questa tendenza è stata dimostrata da una perdita JSW di oltre 0,50 mm durante lo studio, in accordo con una precedente pubblicazione.

I pazienti sono stati istruiti a prendere etoricoxib a una dose non superiore a 90 mg BD dopo i pasti se il loro disagio era intollerabile. Sono stati istruiti a prendere 30 mg di codeina secondo necessità se il disagio persisteva e a riferire il giorno successivo. A parte eventuali sintomi o indicazioni segnalati dal paziente, sono stati eseguiti anche test ematologici e biochimici di laboratorio come parte delle valutazioni di tolleranza e sicurezza.

Un esame microscopico del liquido sinoviale è stato eseguito al basale e due anni dopo l'intervento chirurgico per verificare la presenza di conte cellulari anomale. A seconda del grado in cui interferivano con le attività quotidiane del soggetto, gli eventi avversi venivano classificati come isolati, intermittenti o cronici. La possibile associazione causale tra il supplemento e l'esito è stata classificata come definita/possibile/probabile/non valutabile/nessuna. Il comitato istituzionale per la ricerca e la terapia con cellule staminali ha dato il suo benestare al progetto. Tutti i pazienti hanno fornito il consenso scritto a partecipare allo studio dopo aver ricevuto informazioni sufficienti.

Preparazione SVF:

Con l'ausilio di una cannula di aspirazione da 3 mm e di una soluzione tumescente, sono stati prelevati circa 100 ml di grasso dalla pancia di ogni paziente e inseriti in provette coniche da centrifuga monouso sterili da 250 ml. Il tessuto adiposo è stato sottoposto a due lavaggi PBS prima di essere cavitato sonicamente mediante ultrasuoni a 10 mega hertz, 50 W per 30 minuti con intervalli di 5 minuti di agitazione. L'SVF è stato quindi estratto come pellet dividendo la sospensione in quattro provette da centrifuga da 50 ml e centrifugandole a 500 g per cinque minuti. Per eliminare qualsiasi enzima residuo, il pellet è stato lavato due volte con soluzione salina normale prima di essere risospeso in PBS. La sospensione SVF è stata centrifugata a 500 g per 5 minuti dopo essere stata filtrata utilizzando un filtro cellulare da 100 m. Il fluido extra è stato scaricato. Il pellet è stato ricomposto con soluzione fisiologica normale e fatto passare attraverso un filtro cellulare da 40 m. I campioni sono stati raccolti per contare il numero di cellule, valutare la loro vitalità e coltivare e definire le cellule staminali.

Preparazione del PRP: lo stesso donatore che ha fornito il sangue periferico del tessuto adiposo ha fornito anche il plasma ricco di piastrine. La soluzione ACD A è stata aggiunta alle provette sottovuoto con tappo giallo BD con 20 ml di sangue periferico e le provette sono state centrifugate a 800 g per 10 minuti. Per ottenere un pellet piastrinico, la frazione plasmatica è stata raccolta e centrifugata a 1000 g per 5 min. Successivamente sono rimasti solo 3 ml di plasma, che sono stati utilizzati per risospendere le piastrine.