Bewertung der klinischen Wirksamkeit von ADSCS aus autologem Fettgewebe bei der Behandlung von Osteoarthritis (OA)

Osteoarthritis (OA) ist eine degenerative Erkrankung, die im Laufe der Zeit den Gelenkknorpel befällt und mit Veränderungen der Synovialis, des subchondralen Knochens, der Bänder und der Menisken sowie einer Hypertrophie der Gelenkkapsel einhergeht.

Therapien sind in der Regel palliativ und lindern Schmerzen nur symptomatisch, wobei sie die Knorpeldegeneration und den folgenden Zusammenbruch anderer Gelenkstrukturen nicht stoppen können. Daher ist es für Forscher von entscheidender Bedeutung, sich der Herausforderung zu stellen, OA-modifizierende Therapeutika zu entwickeln. Das Potenzial von adulten mesenchymalen Stammzellen (MSCs) und der aus Fett stammenden Stromazellenfraktion, auch bekannt als stromale Gefäßfraktion, wurde kürzlich auf chondroprotektive Wirksamkeit bei oa Knien untersucht.

Die vorliegende Studie wurde durchgeführt, um die klinische Wirksamkeit zweifelsfrei nach der Verabreichung von nicht enzymatisch verarbeiteten, aus Fett gewonnenen Stromazellen zusammen mit plättchenreichem Plasma bei einer großen Anzahl (140 Patienten) mit mittelschwerem bis schwerem Knie (Stadium 3 und 4) mit objektiver MRT-Beurteilung und zu bewerten 2 Jahre Follow-up.

Methoden

Die Auswahlkriterien umfassten Patienten im Alter von 50 Jahren oder älter mit symptomatischer primärer Osteoarthritis des Knies, die durch tägliche Schmerzen in den vorangegangenen drei Monaten, die Verwendung von Analgetika mindestens einmal pro Woche, weniger als 30 Minuten Morgensteifigkeit und einen WOMAC-Score definiert wurde von 75 im Zielknie. Grad 3 und 4 der kellergen Radiographic Grading Scale of Osteoarthritis waren Teil der röntgenologischen Qualifikationsanforderungen. Die Ausschlusskriterien umfassten Personen mit klinisch signifikanten systemischen Erkrankungen und Patienten mit Anzeichen einer sekundären Kniearthrose oder einer schweren Arthrose (Gelenkspaltweite-JSW 2 mm).

Der WOMAC-Score, entwickelt von den Universitäten Western Ontario und McMaster, ist ein häufig verwendeter Indikator für die subjektive Bewertung von Schmerzen, Gelenkbeweglichkeit und körperlichen Beeinträchtigungen durch Patienten. Mit 5, 2 bzw. 17 Fragen bewertet es drei Dimensionen: Schmerz, Steifheit und körperliche Funktion. Die Mindestpunktzahl beträgt 0, die Höchstpunktzahl 96. Die maximale Punktzahl für jede Subskala beträgt entsprechend 20, 8 oder 68 .

Um die Sechs-Minuten-Gehstrecke (6MWD) zu messen, wurde in einem internen Flur eine Distanz von 50 m markiert, und die Teilnehmer wurden angewiesen, innerhalb von sechs Minuten so weit und so schnell wie möglich zu gehen. Die gesamte Strecke wurde berechnet und notiert.

Unter Verwendung der zuvor beschriebenen Verfahren wurden antero-posteriore Röntgenaufnahmen der Kniegelenke aufgenommen, wobei die Patienten in einem Abstand von 1 m von der Röntgenquelle standen und das Knie vollständig gestreckt war. Die Gelenkspaltweite wurde an ihrer engsten Stelle gemessen (minimal JSW). Gemäß einer früheren Veröffentlichung wurde dieser Trend durch einen JSW-Verlust von mehr als 0,50 mm während des Versuchs angezeigt.

Antero-posteriore Röntgenaufnahmen der Kniegelenke wurden unter Verwendung der zuvor beschriebenen Techniken aufgenommen, während die Patienten mit vollständig gestreckten Knien 1 m von der Röntgenquelle entfernt standen. An der engsten Stelle des Gelenkspaltes wurde die Weite gemessen (minimal JSW). Diese Tendenz zeigte sich gemäß einer früheren Veröffentlichung durch einen JSW-Verlust von mehr als 0,50 mm während der Studie.

Die Patienten wurden angewiesen, Etoricoxib in einer Dosis von nicht mehr als 90 mg BD nach den Mahlzeiten einzunehmen, wenn ihre Beschwerden unerträglich waren. Sie wurden angewiesen, bei anhaltenden Beschwerden 30 mg Codein nach Bedarf einzunehmen und sich am nächsten Tag zu melden. Abgesehen von allen Symptomen oder Hinweisen, die der Patient berichtete, wurden im Rahmen der Verträglichkeits- und Sicherheitsbewertungen auch laborbasierte hämatologische und biochemische Tests durchgeführt.

Eine mikroskopische Untersuchung der Synovialflüssigkeit wurde zu Studienbeginn und zwei Jahre nach der Operation durchgeführt, um auf abnormale Zellzahlen zu prüfen. Je nach Grad der Beeinträchtigung des Alltags wurden die unerwünschten Ereignisse als isoliert, intermittierend oder chronisch eingestuft. Der mögliche kausale Zusammenhang zwischen dem Nahrungsergänzungsmittel und dem Ergebnis wurde als eindeutig/möglich/wahrscheinlich/nicht bewertbar/keine kategorisiert. Der Institutsausschuss für Stammzellforschung und -therapie hat dem Projekt zugestimmt. Alle Patienten gaben nach Erhalt ausreichender Informationen ihr schriftliches Einverständnis zur Teilnahme an der Studie.

SVF-Vorbereitung:

Mit Hilfe einer 3-mm-Aspirationskanüle und Tumeszenzlösung wurden etwa 100 ml Fett aus dem Bauch jedes Patienten gesammelt und in sterile konische 250-ml-Zentrifugenröhrchen zum Einmalgebrauch gegeben. Das Fettgewebe wurde zwei PBS-Waschungen unterzogen, bevor es durch Ultraschall bei 10 Megahertz, 50 W für 30 Minuten mit 5-Minuten-Intervallen der Bewegung beschallt wurde. Das SVF wurde dann als Pellet extrahiert, indem die Suspension in vier 50-ml-Zentrifugenröhrchen aufgeteilt und fünf Minuten bei 500 g zentrifugiert wurde. Um restliches Enzym loszuwerden, wurde das Pellet zweimal mit normaler Kochsalzlösung gewaschen, bevor es in PBS resuspendiert wurde. Die SVF-Suspension wurde bei 500 g für 5 min zentrifugiert, nachdem sie unter Verwendung eines 100-m-Zellfilters filtriert worden war. Die überschüssige Flüssigkeit wurde abgeladen. Das Pellet wurde mit normaler Kochsalzlösung wieder zusammengesetzt und durch ein 40-m-Zellsieb geleitet. Proben wurden gesammelt, um die Anzahl der Zellen zu zählen, ihre Vitalität zu beurteilen und die Stammzellen zu kultivieren und zu definieren.

PRP-Präparation: Derselbe Spender, der das periphere Blut des Fettgewebes lieferte, lieferte auch das plättchenreiche Plasma. ACD-Lösung A wurde mit 20 ml peripherem Blut in BD-Vakuumröhrchen mit gelbem Verschluss gegeben, und die Röhrchen wurden 10 min bei 800 g zentrifugiert. Um ein Blutplättchen-Pellet zu erhalten, wurde die Plasmafraktion gesammelt und bei 1000 g für 5 min zentrifugiert. Danach verblieben nur noch 3 ml Plasma, das zum Resuspendieren der Blutplättchen verwendet wurde.