Hodnocení klinické účinnosti ADSCS odvozených z autologní tukové tkáně v léčbě osteoartrózy (OA)

Osteoartritida (OA) je degenerativní onemocnění, které v průběhu času postihuje kloubní chrupavku a je doprovázeno změnami synovie, subchondrální kosti, vazů a menisků a také hypertrofií kloubního pouzdra.

Terapie jsou typicky paliativní a zmírňují bolest pouze symptomatickým způsobem, přičemž nezastavují degeneraci chrupavky a následné zhroucení dalších kloubních struktur. Proto je pro výzkumníky klíčové, aby se vypořádali s výzvou vytvořit terapeutika modifikující OA. Potenciál dospělých mezenchymálních kmenových buněk (MSC) a frakce stromálních buněk odvozených z tukové tkáně, známé také jako stromální vaskulární frakce, byl nedávno hodnocen z hlediska chondroprotektivní účinnosti u kolenních kloubů.

Tato studie byla přijata k vyhodnocení klinické účinnosti bez jakýchkoli pochybností po podání neenzymaticky zpracovaných stromálních buněk derivovaných z tukové tkáně spolu s plazmou bohatou na krevní destičky u velkého počtu (140 pacientů) se středně těžkým až těžkým kolenem (stádium 3 a 4) s objektivním posouzením MRI a 2 roky sledování.

Metody

Výběrová kritéria zahrnovala pacienty ve věku 50 let nebo starší se symptomatickou primární osteoartrózou kolena, která byla definována každodenní bolestí po předchozí tři měsíce, užíváním analgetik alespoň jednou týdně, ranní ztuhlostí kratší než 30 minut a skóre WOMAC. 75 v cílovém koleni. Stupně 3 a 4 kellergen Radiographic Grading Scale of Osteoarthritis byly součástí radiografických kvalifikačních požadavků. Kritéria vyloučení zahrnovala jedince s klinicky významnými systémovými onemocněními a pacienty s prokázanou sekundární osteoartrózou kolena nebo těžkou osteoartrózou (šířka kloubního prostoru-JSW 2 mm).

Skóre WOMAC, vyvinuté univerzitami Western Ontario a McMaster University, je běžně používaným ukazatelem subjektivního hodnocení bolesti, pohyblivosti kloubů a fyzického postižení pacientů. S 5, 2 a 17 otázkami posuzuje tři dimenze: bolest, ztuhlost a fyzické funkce. Minimální skóre je 0, nejvyšší skóre je 96. Maximální skóre pro každou subškálu je 20, 8 nebo 68.

Aby bylo možné změřit vzdálenost 6 minut chůze (6MWD), byla na vnitřní chodbě vyznačena vzdálenost 50 m a účastníci byli instruováni, aby během šesti minut šli tak daleko a tak rychle, jak dokážou. Byla vypočtena a zaznamenána celá vzdálenost.

Pomocí dříve popsaných postupů byly pořízeny anteroposteriorní rentgenové snímky kolenních kloubů u pacientů stojících ve vzdálenosti 1 m od zdroje RTG záření, s kolenem zcela nataženým. Šířka kloubního prostoru byla měřena v jeho nejužším bodě (minimální JSW). Podle dřívější publikace byl tento trend indikován ztrátou JSW o více než 0,50 mm během pokusu.

Předozadní rentgenové snímky kolenních kloubů byly získány pomocí dříve popsaných technik, zatímco pacienti stáli 1 m od zdroje rentgenového záření s plně nataženými koleny. V nejužším místě kloubního prostoru byla měřena šířka (minimální JSW). Tato tendence byla prokázána ztrátou JSW o více než 0,50 mm během studie, v souladu s předchozí publikací.

Pacienti byli instruováni, aby užívali etorikoxib v dávce ne vyšší než 90 mg BD po jídle, pokud byl jejich diskomfort nesnesitelný. Byli instruováni, aby si podle potřeby vzali 30 mg kodeinu, pokud by nepohodlí přetrvávalo, a aby hlásili další den. Kromě jakýchkoli symptomů nebo indikací, které pacient uvedl, byly v rámci hodnocení tolerance a bezpečnosti provedeny také laboratorní hematologické a biochemické testy.

Mikroskopické vyšetření synoviální tekutiny bylo provedeno na začátku a dva roky po operaci, aby se zjistil abnormální počet buněk. Podle míry, do jaké zasahovaly do každodenních aktivit subjektu, byly nežádoucí jevy klasifikovány jako izolované, přerušované nebo chronické. Možná příčinná souvislost mezi doplňkem a výsledkem byla kategorizována jako definitivní/možné/pravděpodobné/neposouditelné/žádné. Institucionální výbor pro výzkum a terapii kmenovými buňkami schválil projekt. Všichni pacienti poskytli písemný souhlas s účastí ve studii poté, co obdrželi dostatek informací.

Příprava SVF:

Pomocí 3mm aspirační kanyly a tumescentního roztoku bylo každému pacientovi odebráno asi 100 ml tuku z břicha a vloženo do sterilních, jednorázových 250ml kuželových centrifugačních zkumavek. Tuková tkáň podstoupila dvě promytí PBS, než byla kavitována ultrazvukem při 10 megahertz, 50 W po dobu 30 minut s 5minutovými intervaly míchání. SVF byl poté extrahován jako peleta rozdělením suspenze do čtyř 50ml centrifugačních zkumavek a jejich centrifugací při 500 g po dobu pěti minut. Aby se zbavil jakéhokoli zbývajícího enzymu, byla peleta dvakrát promyta běžným fyziologickým roztokem a poté byla resuspendována v PBS. Suspenze SVF byla odstřeďována při 500 g po dobu 5 minut poté, co byla filtrována pomocí 100 um buněčného síta. Přebytečná tekutina byla vypuštěna. Peleta se dala zpět dohromady s běžným fyziologickým roztokem a nechala se projít přes 40 um buněčné síto. Byly odebrány vzorky, aby se spočítal počet buněk, vyhodnotila se jejich vitalita a kultivovaly se a definovaly kmenové buňky.

Příprava PRP: Stejný dárce, který poskytl periferní krev tukové tkáně, také poskytl plazmu bohatou na krevní destičky. Roztok ACD A byl přidán do BD žlutých horních vakuových zkumavek s 20 ml periferní krve a zkumavky byly centrifugovány při 800 g po dobu 10 minut. Pro získání destičkové pelety byla frakce plazmy shromážděna a centrifugována při 1000 g po dobu 5 minut. Poté zbyly jen 3 ml plazmy, která byla použita k resuspendování krevních destiček.