Evaluering af klinisk effekt af autologt fedtvæv afledt ADSCS'er i behandling af slidgigt (OA)

Slidgigt (OA) er en degenerativ sygdom, der påvirker ledbrusken over tid og er ledsaget af ændringer i synovium, subchondral knogle, ledbånd og menisker, samt hypertrofi af ledkapslen.

Behandlinger er typisk palliative og lindrer kun smerter på en symptomatisk måde, idet de ikke standser bruskdegeneration og efterfølgende nedbrydning af andre ledstrukturer. Derfor er det afgørende for forskere at tackle udfordringen med at skabe OA-modificerende terapier. Potentialet for voksne mesenkymale stamceller (MSC'er) og fedtafledte stromalcellefraktioner, også kendt som stromal vaskulær fraktion, er for nylig blevet evalueret for chondrobeskyttende effekt i oa knæ.

Denne undersøgelse blev taget for at evaluere klinisk effektivitet uden tvivl efter administration af ikke-enzymatisk behandlede fedtafledte stromaceller sammen med blodpladerigt plasma i et stort antal (140 patienter) med moderat til svær knæ (stadie 3 og 4) med objektiv MR-vurdering og 2 års opfølgning.

Metoder

Udvælgelseskriterierne omfattede patienter på 50 år eller ældre med symptomatisk primær slidgigt i knæet, der var defineret ved daglige smerter i de foregående tre måneder, brug af smertestillende medicin mindst én gang om ugen, mindre end 30 minutters morgenstivhed og en WOMAC-score på 75 i målknæet. Grad 3 og 4 kellergen Radiographic Grading Scale of Osteoarthritis var en del af de radiografiske kvalifikationskrav. Eksklusionskriterierne omfattede personer med klinisk signifikante systemiske sygdomme og patienter med tegn på sekundær knæartrose eller svær slidgigt (ledsrumsbredde-JSW 2 mm).

WOMAC-scoren, udviklet af Western Ontario og McMaster Universities, er en almindeligt anvendt indikator for patienters subjektive vurderinger af smerte, ledmobilitet og fysisk svækkelse. Med henholdsvis 5, 2 og 17 spørgsmål vurderer den tre dimensioner: smerte, stivhed og fysisk funktion. En minimumsscore er 0, højeste score er 96. Den maksimale score for hver underskala er 20, 8 eller 68, tilsvarende.

For at måle de seks minutters gåafstand (6MWD) blev der markeret en afstand på 50 m i en intern gang, og deltagerne blev instrueret i at gå så langt og så hurtigt de kunne i løbet af seks minutter. Hele afstanden blev beregnet og noteret.

Ved hjælp af tidligere beskrevne procedurer blev der taget antero-posterior røntgenbilleder af knæleddene med patienter stående i en afstand af 1 m fra røntgenkilden, med knæet helt udstrakt. Fugerummets bredde blev målt på det smalleste sted (minimal JSW). Ifølge en tidligere publikation blev denne tendens angivet ved et JSW-tab på mere end 0,50 mm i løbet af forsøget.

Antero-posterior røntgenbilleder af knæleddene blev taget ved hjælp af de tidligere beskrevne teknikker, mens patienterne stod 1 m væk fra røntgenkilden med deres knæ helt udstrakt. På fugerummets smalleste punkt blev bredden målt (minimal JSW). Denne tendens blev vist ved et JSW-tab på mere end 0,50 mm under undersøgelsen, i overensstemmelse med en tidligere publikation.

Patienterne blev instrueret i at tage etoricoxib i en dosis på højst 90 mg BD efter måltider, hvis deres ubehag var utåleligt. De blev bedt om at tage 30 mg kodein efter behov, hvis ubehaget varede ved, og at melde sig næste dag. Bortset fra eventuelle symptomer eller indikationer, som patienten rapporterede, blev der også udført laboratoriebaserede hæmatologiske og biokemiske tests som en del af tolerance- og sikkerhedsevalueringerne.

En mikroskopisk undersøgelse af ledvæsken blev udført ved baseline og to år efter operationen for at kontrollere for unormale celletal. Afhængigt af i hvilken grad de forstyrrede forsøgspersonens daglige aktiviteter, blev uønskede hændelser klassificeret som isolerede, intermitterende eller kroniske. Den mulige årsagssammenhæng mellem tillægget og resultatet blev kategoriseret som Absolut/Mulig/Sandsynlig/Ikke-vurderelig/Ingen. Institutionsudvalget for stamcelleforskning og terapi gav sin godkendelse til projektet. Alle patienterne gav skriftligt samtykke til at deltage i forsøget efter at have modtaget tilstrækkelig information.

SVF forberedelse:

Ved hjælp af en 3 mm aspirationskanyle og tumescerende opløsning blev ca. 100 ml fedt opsamlet fra hver patients mave og anbragt i sterile engangs 250 ml koniske centrifugerør. Fedtvævet gennemgik to PBS-vaske, før det blev sonisk kaviteret ved ultralyd ved 10 mega hertz, 50 W i 30 minutter med 5-minutters intervaller af agitation. SVF blev derefter ekstraheret som en pellet ved at opdele suspensionen i fire 50 ml centrifugerør og centrifugere dem ved 500 g i fem minutter. For at slippe af med eventuelt tilbageværende enzym blev pelleten vasket to gange med almindeligt saltvand, før det blev resuspenderet i PBS. SVF-suspensionen blev centrifugeret ved 500 g i 5 minutter efter at være blevet filtreret under anvendelse af en 100 m cellesi. Den ekstra væske blev dumpet. Pelleten blev sat sammen igen med almindeligt saltvand og ledt gennem en 40 m cellesi. Prøver blev indsamlet for at tælle antallet af celler, vurdere deres vitalitet og dyrke og definere stamcellerne.

PRP-præparat: Den samme donor, som leverede fedtvævets perifere blod, leverede også det blodpladerige plasma. ACD-opløsning A blev tilsat til BD gule top-vakuumrør med 20 ml perifert blod, og rørene blev centrifugeret ved 800 g i 10 minutter. For at opnå en blodpladepellet blev plasmafraktionen opsamlet og centrifugeret ved 1000 g i 5 min. Derefter var der kun 3 ml plasma tilbage, som blev brugt til at resuspendere blodpladerne.