Nitraatti INFORMER -vesitutkimus

Opintojen suunnittelu

Käytetään crossover-tutkimussuunnitelmaa, jossa interventioiden välillä on 1 viikon pesujakso. Osallistujien ruokavalio edellisenä ja interventiopäivänä standardoidaan (vierailun 1 ruokavalinnat yhdistetään vierailun 2 kanssa) seuraavasti:

Opintokäyntiä edeltävänä päivänä:

• Aamiainen: paahtoleipää munia, juustoa, maapähkinävoita tai hilloa.
• Lounas sisältää kurpitsakeittoa ja valkoista leipää
• Illallinen: vähänitraattinen kasvisateria
• Kaikki vesi tarjotaan
• Osallistujia pyydetään pidättäytymään juomasta kahvia tai kofeiinia sisältäviä juomia 17 ja alkoholijuomia 18 ja harjoittelemaan 24 tuntia ennen opintomatkaa.

Opintovierailupäivänä:

• Osallistujat saapuvat opintoyksikköön paastoamalla
• Aamiainen sisältää valkoisen leivän paahtoleipää juustolla, maapähkinävoita tai hilloa sekä ensimmäisen vesitoimenpiteen
• Lounas sisältää kurpitsakeittoa ja vaaleaa leipää sekä toisen vesiintervention
• Osallistujille tarjotaan standardoitu illallinen: vähänitraattinen kasvisateria
• Kaikki vesi tarjotaan
• Osallistujia pyydetään pidättäytymään juomasta kahvia tai kofeiinia sisältäviä juomia 17 ja alkoholijuomia 18 ja harjoittelemaan 24 tuntia ennen opintomatkaa.

Interventiot

• Vesi, johon on lisätty nitraattia: 137 mg natriumnitraattia tai 164 mg kaliumnitraattia (100 mg nitraattia) 500 ml:n vesipullossa (200 mg/l) kahdesti, yksi aamiaisen ja toisen lounaan yhteydessä. Tämä vastaa yhteensä 200 mg nitraattia.

Australiassa vuonna 2011 julkaistut ohjeet suosittelevat, että alle 50 mg/l tasot ovat turvallisia juoda, tasot 50 - 100 mg/l ovat turvallisia juoda kaikille aikuisille, mukaan lukien raskaana oleville naisille, mutta ei alle 3 kuukauden ikäisille imeväisille. vettä, jonka nitraattipitoisuus on yli 100 mg/l, ei suositella.

• Vesi ilman lisättyä nitraattia: 137 mg natriumkloridia tai 164 mg kaliumkloridia 500 ml:n vesipullossa kahdesti, yksi aamiaisen ja yksi lounaan yhteydessä.

Jakson luominen. Interventioallokointisekvenssi generoidaan lohkosatunnaistuksen avulla käyttämällä tietokoneella luotuja satunnaislukuja. Käytetään satunnaisia ​​lohkokokoja 2 ja 4.

Peittomekanismi. Tutkimustutkija, joka ei osallistu toimenpiteen suorittamiseen, tiedonkeruuun tai tietojen analysointiin, tulostaa kullekin tutkimuksen osallistujalle viisikymmentä satunnaisesti luotua jaksoa interventioista erilliselle paperille ja sulkee läpinäkymättömät kirjekuoret, numerot 1-50. .

Toteutus. Kun osallistuja katsotaan kelpoiseksi ja ilmoittautuu tutkimukseen, tutkimuksen koordinaattori ottaa yhteyttä satunnaistamisesta ja interventioiden allokoinnista vastaavaan tutkimuksen tutkijaan saadakseen seuraavan käytettävissä olevan kirjekuoren ja satunnaisesti luodun interventiosarjan.

Sokaiseva. Interventioiden luonteen vuoksi osallistujat ja interventioiden suorittamisesta vastaavat tutkijat ovat sokeutumattomia koko kokeen ajan. Kaikki laboratorioanalyysejä ja data-analyyseja suorittavat tutkijat ovat kuitenkin sokeutuneet osallistujien interventioihin vasta data-analyysin suorittamisen jälkeen.

Osallistujan aikajana. Ennen ensimmäistä klinikkakäyntiä jokainen osallistuja täyttää ruokatiheyskyselyn (FFQ) arvioidakseen tavanomaista ruokavaliota.

Jokaisella klinikkakäynnillä (kuva 1) otetaan lähtötilanteen virtsa- ja ulostenäyte N-nitrosamiinien mittaamista varten. Ennen toimenpidettä osallistujia neuvotaan tyhjentämään rakkonsa virtsan keräysastiaan. Ensimmäisen toimenpiteen jälkeen kaikki virtsa seuraavan 24 tunnin aikana kerätään N-nitrosamiinien, nitraattien ja nitriitin mittaamista varten. Uloste kerätään N-nitrosamiinien, nitraattien ja nitriitin mittaamiseksi.

Arvioinnit

Virtsan ja ulosteen keräys. Virtsanäyte kerätään lähtötilanteessa ja interventiosta 24 tunnin kuluessa toimenpiteen jälkeen. Perusnäytettä varten osallistujille annetaan steriloitu astia ja ohjeet päivän ensimmäisen virtsanäytteen hävittämiseksi ja sen jälkeen kerätäkseen kaikki virtsa toimenpiteeseen asti, joka tuodaan klinikalle. Osallistujia neuvotaan juomaan 250 ml vettä herätessään. Osallistujille annetaan 24 tunnin virtsanäytteitä varten steriloidut astiat ja ohjeet kaiken virtsan keräämiseksi 24 tunnin kuluttua toimenpiteestä. Virtsaerät jäädytetään -80 °C:ssa analyysiin asti. Ulostenäyte otetaan lähtötilanteessa ja 24 tunnin ajan ensimmäisen toimenpiteen jälkeen. Osallistujille toimitetaan ohjeet ja ulostenäytteen keräyspakkaus (keräyspussit, nippusiteet, suuret vetoketjulliset pussit, pakastejääpalat ja kuljetukseen tarkoitettu kylmälaukku). Kerätyt ulostenäytteet punnitaan ja pakastetaan -80 °C:seen analyysiin asti.

N-nitrosamiinit. Nitrosamiinit interventioissa, virtsa- ja ulostenäytteissä mitataan kaasukromatografiamassaspektrometrialla (GCMS). Haihtuvat nitrosamiinit uutetaan dikloorimetaanilla ja erotetaan hyvin kaasukromatografialla. Tunnistaminen tapahtuu retentioajan ja ainutlaatuisten molekyyli-ionien perusteella jokaiselle viidestä tavallisesta nitrosamiinista. Kvantitointi tehdään käyttämällä deuteriumleimattuja sisäisiä standardeja, N-nirtrosodimetyyliamiini-D6; N-nitrosodietyyliamiini D10; N-nitrosomorfoliini D8 (Cambridge Isotopes) ja N-nitrosopiperidiini D10 (Toronto Research Chemicals). Yleisimmin havaitut nitrosamiinit ovat NDMA ja N-nitrosopiperidiini (NPIP). Kontrollikokeet, joissa vesi, joka on säilytetty samoissa astioissa kuin näytteenottoa ja varastointia käytetään, suoritetaan haihtuvien nitrosamiinien huuhtoutumisen testaamiseksi.

Näytteen koko ja teho

Näytteen koko perustuu risteykseen ja N-nitrosamiinien, erityisesti N-nitrosodimetyyliamiinin (NDMA) päätulokseen virtsassa. Arvolla α = 0,05, 2 mittaa kohdetta kohden (perustaso ja jälkeinen) ja mittausten välinen korrelaatio ρ = 0,6, 25 osallistujaa tarjoaa 80 % tehon havaitakseen 0,6 SD lisäyksen NDMA-pitoisuudessa. 10 %:n vetäytymisprosentin mahdollistamiseksi aiomme värvätä tutkimukseen 25 osallistujaa. Osallistujia rekrytoidaan rullaavasti, kunnes otoskoko on saavutettu.

Tilastolliset menetelmät

Tilastolliset analyysit suoritetaan IBM SPSS Statistics for Windows -versiolla 25 (IBM) ja STATA/IC 17.0:lla (StataCorp LLC). Normaalijakautuneiden jatkuvien muuttujien kuvaavat tilastot ilmaistaan ​​keskiarvona (± keskihajonta, SD), ei-normaalijakautuneet jatkuvat muuttujat mediaanina (neljännesten välinen alue, IQR) ja kategorialliset muuttujat lukuina (osuus, %). Ennen analyysiä tiedoista arvioidaan poikkeavuuksien ja normaaliolojen varalta. Ei-normaalisti jaettu data muunnetaan tarvittaessa lokiksi. Hoidon vaikutukset tuloksiin saadaan käyttämällä lineaarisia sekamalleja, jotka sisältävät perusmittaukset, hoitojärjestyksen, ajanjakson ja ajan (kategorisena muuttujana) kiinteinä vaikutuksina. Sisällytämme myös hoidon X-jakson vuorovaikutustermin arvioidaksemme mahdollisia hoitojakson välisiä yhteisvaikutuksia ja arvioimme erikseen siirtymävaikutuksia valemuuttujien avulla edellisen hoidon osoittamiseksi. Hoidon vaikutukset tuloksiin yhdellä toimenpiteen jälkeisellä mittauksella saadaan käyttämällä lineaarisia sekamalleja, mukaan lukien lähtötilanteen mittaukset, hoitojärjestys ja ajanjakso ennustajina. Aiheen tunnusnumero sisällytetään satunnaisena sieppauksena jokaiseen malliin. Kaiken hypoteesitestauksen tilastollisen merkitsevyyden arvioimiseen käytetään yleistä kaksipuolista tyypin 1 virhesuhdetta P<0,05.