Nitrát INFORMÁTOR Víztanulmány

Dizájnt tanulni

Keresztezett vizsgálati elrendezést alkalmaznak a beavatkozások között 1 hetes kimosási időszakkal. A résztvevők étrendjét a beavatkozás előtti napon és a napon standardizálják (az 1. látogatás ételválasztéka a 2. látogatáshoz igazodik), az alábbiak szerint:

A tanulmányút előtti napon:

• Reggeli: fehér kenyér pirítós tojással, sajttal, mogyoróvajjal vagy lekvárral.
• Az ebéd töklevest és fehér kenyeret tartalmaz
• Vacsora: alacsony nitráttartalmú vegetáriánus étel
• Minden víz biztosított
• A résztvevőket arra kérik, hogy tartózkodjanak a kávé vagy koffeintartalmú italok 17 és az alkoholos italok 18 fogyasztásától, és 24 órával a tanulmányi látogatásuk előtt végezzenek bármilyen gyakorlatot.

A tanulmányút napjára:

• A résztvevők koplalva érkeznek a tanegységbe
• A reggeli fehér kenyér pirítóst tartalmaz sajttal, mogyoróvajjal vagy lekvárral, az első vízbeavatkozással együtt
• Az ebéd töklevesből és fehér kenyérből áll, a második vízbeavatkozással együtt
• A résztvevők szabványos vacsorát kapnak: alacsony nitráttartalmú vegetáriánus étkezést
• Minden víz biztosított
• A résztvevőket arra kérik, hogy tartózkodjanak a kávé vagy koffeintartalmú italok 17 és az alkoholos italok 18 fogyasztásától, és 24 órával a tanulmányi látogatásuk előtt végezzenek bármilyen gyakorlatot.

Beavatkozások

• Hozzáadott nitrátos víz: 137 mg nátrium-nitrát vagy 164 mg kálium-nitrát (100 mg nitrát) 500 ml-es vizes palackban (200 mg/L) kétszer, egy reggelinél és egy ebédnél. Ez összesen 200 mg nitrátnak felel meg.

Ausztráliában a 2011-ben közzétett iránymutatások azt javasolják, hogy az 50 mg/l-nél kisebb szintek ihatóak, az 50-100 mg/l szintek pedig minden felnőtt számára biztonságosak, beleértve a terhes nőket, de nem a 3 hónaposnál fiatalabb csecsemőket. 100 mg/l-nél nagyobb nitrátkoncentrációjú víz nem ajánlott.

• Hozzáadott nitrát nélküli víz: 137 mg nátrium-klorid vagy 164 mg kálium-klorid 500 ml-es vizes palackban kétszer, egy reggelivel és egy ebéddel.

Sorozatgenerálás. A beavatkozási allokáció sorrendjét blokk véletlenszerűsítéssel generálják számítógéppel generált véletlenszámok felhasználásával. 2-es és 4-es véletlenszerű blokkméretek kerülnek felhasználásra.

Rejtő mechanizmus. A beavatkozások ötven véletlenszerűen generált sorozatát a vizsgálat minden résztvevője számára külön papírra nyomtatja, és átlátszatlan borítékokba zárja, 1-50-ig sorszámozva, egy vizsgálati kutató, aki nem vesz részt a beavatkozás végrehajtásában, az adatgyűjtésben vagy az adatelemzésben. .

Végrehajtás. Amint egy résztvevő jogosultnak minősül, és beiratkozott a vizsgálatba, a vizsgálat koordinátora felveszi a kapcsolatot a randomizálásért és a beavatkozások elosztásáért felelős vizsgálatvezetővel, hogy megkapja a következő elérhető borítékot és a véletlenszerűen generált beavatkozási sorrendet.

Vakítás. Tekintettel a beavatkozások természetére, a résztvevők és a beavatkozások elvégzéséért felelős vizsgálók a vizsgálat teljes időtartama alatt nem lesznek vakok. A laboratóriumi elemzéseket és adatelemzéseket végző kutatók azonban vakok lesznek azokra a beavatkozásokra, amelyeket a résztvevők az adatelemzés elvégzése után kaptak.

Résztvevő idővonala. Az első klinikai látogatás előtt minden résztvevő kitölt egy étkezési gyakorisági kérdőívet (FFQ), hogy felmérje a háttérben szokásos étrendet.

Minden egyes klinikai látogatás alkalmával (1. ábra) az N-nitrozaminok mérésére kiindulási vizelet- és székletmintát vesznek. A beavatkozás előtt a résztvevőket arra utasítják, hogy ürítsék ki hólyagjukat az alapszintű vizeletgyűjtő tartályba. Az első beavatkozás után a következő 24 órás időszak összes vizeletét összegyűjtik az N-nitrozaminok, nitrát és nitrit mérése céljából. Az N-nitrozaminok, a nitrát és a nitrit méréséhez székletüreget kell gyűjteni.

Értékelések

Vizelet és széklet gyűjtése. Vizeletmintát vesznek a kiinduláskor, és a beavatkozástól a beavatkozás utáni 24 óráig. Az alapmintához a résztvevők egy sterilizált edényt kapnak, és utasításokat kapnak a nap első vizeletmintájának kidobására, majd az összes vizelet összegyűjtésére a beavatkozásig, amelyet bevisznek a klinikára. A résztvevőket arra utasítják, hogy ébredéskor igyanak meg 250 ml vizet. A 24 órás vizeletmintákhoz a résztvevőket sterilizált edényekkel és utasításokkal látják el, hogy a beavatkozást követő 24 óráig az összes vizeletet összegyűjtsék. A vizelet alikvot részeit -80 °C-on lefagyasztjuk az elemzésig. A székletmintát a kiinduláskor és az első beavatkozást követő 24 órán keresztül veszik. A résztvevők utasításokat és székletminta-gyűjtőcsomagot kapnak (gyűjtőzsákok, kábelkötegelők, nagy cipzáras zacskók, fagyasztó jégtömbök és a szállításhoz kijelölt hűtőtáska). Az összegyűjtött székletmintákat lemérjük és -80°C-on lefagyasztjuk az elemzésig.

N-nitrozaminok. A beavatkozások nitrozaminoit, a vizelet- és székletmintákat gázkromatográfiás tömegspektrometriával (GCMS) mérik. Az illékony nitrozaminokat diklór-metánnal extraháljuk, és gázkromatográfiával jól elválasztjuk. Az azonosítás a retenciós idő és az egyedi molekulaionok alapján történik mind az öt általános nitrozamin esetében. A mennyiségi meghatározás deutériummal jelzett belső standardok, N-nirtrosodimetilamin-D6 alkalmazásával történik; N-nitrozodietil-amin D10; N-nitrozomorfolin D8 (Cambridge Isotopes) és N-nitrosopiperidin D10 (Toronto Research Chemicals). A leggyakrabban kimutatott nitrózaminok az NDMA és az N-nitrozopiperidin (NPIP). Az illékony nitrozaminok kimosódásának vizsgálatára olyan kontrollkísérleteket végeznek, amelyekben a mintagyűjtéshez és -tároláshoz használt tartályokban tárolt vizet.

A minta mérete és teljesítménye

A minta mérete a keresztezési tervezésen és az N-nitrozaminok, különösen a vizeletben lévő N-nitrozodimetilamin (NDMA) elsődleges eredményén alapul. α=0,05, alanyonként 2 mérés (kiindulási és utólagos) és a mérések közötti ρ=0,6 korreláció mellett 25 résztvevő 80%-os teljesítményt biztosít az NDMA-koncentráció 0,6 SD-növekedésének kimutatására. A 10%-os kilépési arány érdekében 25 résztvevőt tervezünk bevonni a vizsgálatba. A résztvevők gördülő toborzása a mintanagyság eléréséig történik.

statisztikai módszerek

A statisztikai elemzéseket az IBM SPSS Statistics for Windows 25-ös (IBM) és a STATA/IC 17.0 (StataCorp LLC) verziójával végezzük. A normál eloszlású folytonos változók leíró statisztikáját átlagban (± szórás, SD), a nem normális eloszlású folytonos változókat mediánban (interkvartilis tartomány, IQR), a kategorikus változókat pedig számban (arány, %) fejezzük ki. Az elemzés megkezdése előtt az adatokat értékeljük a kiugró értékek és a normalitás szempontjából. A nem normál elosztású adatok szükség esetén naplózásra kerülnek. Az eredményekre vonatkozó kezelési hatásokat lineáris vegyes modellekkel határozzák meg, beleértve a kiindulási méréseket, a kezelési sorrendet, az időszakot és az időt (kategorikus változóként), mint rögzített hatásokat. Egy X kezelési periódusú interakciós kifejezést is beiktatunk a lehetséges kezelési periódus közötti interakciók felmérésére, és külön értékeljük az átviteli hatásokat álváltozókkal az előző kezelés jelzésére. Az egyetlen beavatkozás utáni mérés eredményeire vonatkozó kezelési hatásokat lineáris vegyes modellek segítségével kapják meg, beleértve a kiindulási méréseket, a kezelési sorrendet és az időszakot prediktorként. Az alany azonosítószáma véletlenszerű lehallgatásként szerepel minden modellben. A statisztikai szignifikancia értékeléséhez az összes hipotézis tesztelése során a P<0,05 általános, kétoldalú 1-es típusú hibaarányt használjuk.