Étude de l'eau INFORMER sur les nitrates

Étudier le design

Une conception d'étude croisée sera utilisée avec une période de sevrage d'une semaine entre les interventions. Le régime alimentaire des participants pour la veille et le jour de l'intervention sera standardisé (les choix alimentaires de la visite 1 seront appariés pour la visite 2) comme suit :

Pour la veille de la visite d'étude :

• Petit déjeuner : toast de pain blanc avec œufs, fromage, beurre de cacahuète ou confiture.
• Le déjeuner sera fourni comprenant une soupe à la citrouille et du pain blanc
• Dîner : un repas végétarien à faible teneur en nitrate
• Toute l'eau sera fournie
• Il sera demandé aux participants de s'abstenir de boire du café ou des boissons contenant de la caféine 17 et de toute boisson alcoolisée 18 et de faire de l'exercice 24 heures avant leur visite d'étude.

Pour le jour de la visite d'étude :

• Les participants arriveront à l'unité d'étude à jeun
• Le petit-déjeuner comprendra des toasts de pain blanc avec du fromage, du beurre de cacahuète ou de la confiture ainsi que la première intervention d'eau
• Le déjeuner comprendra de la soupe à la citrouille et du pain blanc ainsi que la deuxième intervention sur l'eau
• Les participants recevront un dîner standardisé : un repas végétarien à faible teneur en nitrate
• Toute l'eau sera fournie
• Il sera demandé aux participants de s'abstenir de boire du café ou des boissons contenant de la caféine 17 et de toute boisson alcoolisée 18 et de faire de l'exercice 24 heures avant leur visite d'étude.

Interventions

• Eau additionnée de nitrate : 137 mg de nitrate de sodium ou 164 mg de nitrate de potassium (100 mg de nitrate) dans une bouteille d'eau de 500 mL (200 mg/L) fournie deux fois, une au petit-déjeuner et une au déjeuner. Cela équivaut à 200 mg de nitrate au total.

En Australie, les directives publiées en 2011 recommandent que les niveaux inférieurs à 50 mg/L soient sûrs à boire, les niveaux de 50 à 100 mg/L sont sûrs à boire pour tous les adultes, y compris les femmes enceintes, mais pas les nourrissons de moins de 3 mois, buvant l'eau avec des concentrations de nitrates supérieures à 100 mg/L n'est pas recommandée.

• Eau sans nitrate ajouté : 137 mg de chlorure de sodium ou 164 mg de chlorure de potassium dans une bouteille d'eau de 500 mL fournie deux fois, une au petit-déjeuner et une au déjeuner.

Génération de séquences. La séquence d'attribution des interventions sera générée par randomisation en bloc à l'aide de nombres aléatoires générés par ordinateur. Des tailles de blocs aléatoires de 2 et 4 seront utilisées.

Mécanisme de dissimulation. Cinquante séquences générées aléatoirement des interventions pour chacun des participants à l'étude seront imprimées sur des morceaux de papier séparés et scellées dans des enveloppes opaques, numérotées de 1 à 50, par un enquêteur de l'étude non impliqué dans la réalisation de l'intervention, la collecte de données ou l'analyse des données. .

Mise en œuvre. Une fois qu'un participant est jugé éligible et inscrit à l'étude, le coordinateur de l'étude contactera l'investigateur de l'étude responsable de la randomisation et de l'attribution des interventions pour obtenir la prochaine enveloppe disponible et la séquence d'intervention générée aléatoirement.

Aveuglant. Compte tenu de la nature des interventions, les participants et les enquêteurs responsables de la réalisation des interventions seront levés en aveugle tout au long de l'essai. Cependant, tous les chercheurs effectuant les analyses de laboratoire et les analyses de données seront aveugles aux interventions que les participants ont reçues jusqu'à ce que l'analyse des données ait été effectuée.

Chronologie des participants. Avant la première visite à la clinique, chaque participant remplira un questionnaire de fréquence alimentaire (FFQ) pour évaluer le régime alimentaire habituel.

À chaque visite à la clinique (Figure 1), un échantillon de base d'urine et de selles fécales sera prélevé pour mesurer les N-nitrosamines. Avant l'intervention, les participants seront invités à vider leur vessie dans un récipient de collecte d'urine de base. Après la première intervention, toute l'urine pour la période de 24 heures suivante sera collectée pour mesurer les N-nitrosamines, les nitrates et les nitrites. Des selles fécales seront prélevées pour mesurer les N-nitrosamines, les nitrates et les nitrites.

Évaluations

Collecte d'urines et de selles fécales. Un échantillon d'urine sera prélevé au départ et de l'intervention jusqu'à 24 heures après l'intervention. Pour l'échantillon de référence, les participants recevront un récipient stérilisé et des instructions pour jeter le premier échantillon d'urine de la journée, puis collecter toute l'urine jusqu'à l'intervention qui sera apportée à la clinique. Les participants seront invités à boire 250 ml d'eau au réveil. Pour les échantillons d'urine de 24 heures, les participants recevront des récipients stérilisés et des instructions pour collecter toute l'urine jusqu'à 24 heures après l'intervention. Les aliquotes d'urine seront congelées à -80°C jusqu'à l'analyse. Un échantillon de selles sera prélevé au départ et pendant la période de 24 heures suivant la première intervention. Les participants recevront des instructions et un pack de collecte d'échantillons de selles (sacs de collecte, attaches de câble, grands sacs à fermeture éclair, blocs de glace pour congélateur et un sac isotherme désigné pour le transport). Les échantillons de selles collectés seront pesés et congelés à -80°C jusqu'à l'analyse.

N-nitrosamines. Les nitrosamines dans les interventions, les échantillons d'urine et de selles seront mesurés par spectrométrie de masse par chromatographie en phase gazeuse (GCMS). Les nitrosamines volatiles seront extraites avec du dichlorométhane et sont bien séparées par chromatographie en phase gazeuse. L'identification se fera par temps de rétention et ions moléculaires uniques pour chacune des cinq nitrosamines courantes. La quantification sera effectuée à l'aide d'étalons internes marqués au deutérium, la N-nirtrosodiméthylamine-D6 ; N-nitrosodiéthylamine D10; N-nitrosomorpholine D8 (Cambridge Isotopes) et N-nitrosopipéridine D10 (Toronto Research Chemicals). Les nitrosamines les plus couramment détectées sont la NDMA et la N-nitrosopipéridine (NPIP). Des expériences de contrôle dans lesquelles l'eau stockée dans les mêmes conteneurs que ceux utilisés pour la collecte et le stockage des échantillons seront effectuées pour tester toute lixiviation de nitrosamines volatiles.

Taille et puissance de l'échantillon

La taille de l'échantillon est basée sur une conception croisée et le résultat principal des N-nitrosamines, en particulier la N-nitrosodiméthylamine (NDMA) dans l'urine. À α = 0,05, 2 mesures par sujet (de base et post) et une corrélation de ρ = 0,6 entre les mesures, 25 participants fourniront une puissance de 80 % pour détecter une augmentation de 0,6 SD de la concentration de NDMA. Pour permettre un taux de retrait de 10 %, nous prévoyons de recruter 25 participants à l'étude. Un recrutement continu des participants sera effectué jusqu'à ce que la taille de l'échantillon soit atteinte.

Méthodes statistiques

Les analyses statistiques seront effectuées à l'aide d'IBM SPSS Statistics pour Windows, version 25 (IBM) et STATA/IC 17.0 (StataCorp LLC). Les statistiques descriptives des variables continues distribuées normalement seront exprimées en moyenne (± écart type, SD), les variables continues non distribuées normalement en médiane (intervalle interquartile, IQR) et les variables catégorielles en nombre (proportion, %). Les données seront évaluées pour les valeurs aberrantes et la normalité avant l'analyse. Les données non distribuées normalement seront transformées en journal si nécessaire. Les effets du traitement pour les résultats seront obtenus à l'aide de modèles mixtes linéaires comprenant des mesures de base, l'ordre de traitement, la période et le temps (en tant que variable catégorique) en tant qu'effets fixes. Nous inclurons également un terme d'interaction traitement X période pour évaluer les éventuelles interactions traitement-période et évaluerons séparément les effets de report avec des variables fictives pour indiquer le traitement précédent. Les effets du traitement pour les résultats avec une seule mesure post-intervention seront obtenus à l'aide de modèles mixtes linéaires comprenant des mesures de base, l'ordre de traitement et la période comme prédicteurs. Le numéro d'identification du sujet sera inclus sous forme d'interception aléatoire dans chaque modèle. Un taux d'erreur global de type 1 bilatéral de P<0,05 sera utilisé pour évaluer la signification statistique de tous les tests d'hypothèse.