Nitraat INFORMER Wateronderzoek

Studie ontwerp

Er zal een cross-over studieontwerp worden gebruikt met een wash-outperiode van 1 week tussen de interventies. Het dieet van de deelnemers voor de dag vóór en de dag van de interventie zal als volgt worden gestandaardiseerd (voedselkeuzes bij bezoek 1 worden afgestemd op bezoek 2):

Voor de dag voor het studiebezoek:

• Ontbijt: witbrood toast met eieren, kaas, pindakaas of jam.
• De lunch wordt verzorgd, bestaande uit pompoensoep en witbrood
• Diner: een nitraatarme vegetarische maaltijd
• Alle water zal worden verstrekt
• Deelnemers wordt gevraagd om geen koffie of cafeïnehoudende dranken te drinken 17 en geen alcoholische dranken 18 en om 24 uur voorafgaand aan hun studiebezoek aan lichaamsbeweging te doen.

Voor de dag van het studiebezoek:

• Deelnemers komen vastend aan bij de onderzoekseenheid
• Het ontbijt bestaat uit wit brood toast met kaas, pindakaas of jam samen met de eerste waterinterventie
• De lunch bestaat uit pompoensoep en witbrood samen met de tweede waterinterventie
• Deelnemers krijgen een gestandaardiseerd diner: een nitraatarme vegetarische maaltijd
• Alle water zal worden verstrekt
• Deelnemers wordt gevraagd om geen koffie of cafeïnehoudende dranken te drinken 17 en geen alcoholische dranken 18 en om 24 uur voorafgaand aan hun studiebezoek aan lichaamsbeweging te doen.

Interventies

• Water met toegevoegd nitraat: 137 mg natriumnitraat of 164 mg kaliumnitraat (100 mg nitraat) in een waterfles van 500 ml (200 mg/L), tweemaal gegeven, één bij het ontbijt en één bij de lunch. Dit komt overeen met in totaal 200 mg nitraat.

In Australië bevelen in 2011 gepubliceerde richtlijnen aan dat niveaus van minder dan 50 mg/L veilig zijn om te drinken, niveaus van 50 - 100 mg/L zijn veilig om te drinken voor alle volwassenen, inclusief zwangere vrouwen, maar niet voor baby's jonger dan 3 maanden. water met nitraatconcentraties hoger dan 100 mg/L wordt niet aanbevolen.

• Water zonder toegevoegde nitraat: 137 mg natriumchloride of 164 mg kaliumchloride in een 500 ml waterfles tweemaal verstrekt, één bij het ontbijt en één bij de lunch.

Sequentie generatie. De volgorde van interventietoewijzing zal worden gegenereerd via blokrandomisatie met behulp van door de computer gegenereerde willekeurige getallen. Willekeurige blokgroottes van 2 en 4 worden gebruikt.

Verborgen mechanisme. Vijftig willekeurig gegenereerde sequenties van de interventies voor elk van de studiedeelnemers zullen op afzonderlijke stukjes papier worden afgedrukt en in ondoorzichtige enveloppen, genummerd van 1-50, worden verzegeld door een onderzoeksonderzoeker die niet betrokken is bij het uitvoeren van de interventie, de gegevensverzameling of de gegevensanalyse .

Implementatie. Zodra een deelnemer in aanmerking komt en is ingeschreven voor het onderzoek, neemt de onderzoekscoördinator contact op met de onderzoeksonderzoeker die verantwoordelijk is voor randomisatie en interventietoewijzing om de volgende beschikbare enveloppe en willekeurig gegenereerde interventiereeks te verkrijgen.

Verblindend. Gezien de aard van de interventies, zullen de deelnemers en de onderzoekers die verantwoordelijk zijn voor het uitvoeren van de interventies gedurende de hele proef niet geblindeerd zijn. Alle onderzoekers die de laboratoriumanalyses en data-analyses uitvoeren, zullen echter blind zijn voor de interventies die de deelnemers hebben ontvangen tot nadat de data-analyse is uitgevoerd.

Tijdlijn van de deelnemer. Voorafgaand aan het eerste bezoek aan de kliniek vult elke deelnemer een voedselfrequentievragenlijst (FFQ) in om het gebruikelijke dieet op de achtergrond te beoordelen.

Bij elk bezoek aan de kliniek (Afbeelding 1) wordt een urine- en fecale stoelgangmonster afgenomen voor het meten van N-nitrosaminen. Voorafgaand aan de interventie zullen de deelnemers worden geïnstrueerd om hun blaas te legen in de standaard urine-opvangcontainer. Na de eerste ingreep wordt alle urine voor de daaropvolgende 24 uur verzameld voor meting van N-nitrosamines, nitraat en nitriet. Een ontlasting wordt verzameld voor het meten van N-nitrosamines, nitraat en nitriet.

beoordelingen

Opvang van urine en ontlasting. Er wordt een urinemonster afgenomen bij baseline en vanaf de interventie tot 24 uur na de interventie. Voor het basismonster krijgen de deelnemers een gesteriliseerde container en instructies om het eerste urinemonster van de dag weg te gooien en vervolgens alle urine op te vangen tot de interventie die naar de kliniek wordt gebracht. Deelnemers krijgen de instructie om 250 ml water te drinken bij het ontwaken. Voor de 24-uurs urinemonsters krijgen deelnemers gesteriliseerde containers en instructies om alle urine op te vangen tot 24 uur na de interventie. Urine-aliquots worden tot analyse ingevroren bij -80°C. Er wordt een ontlastingsmonster verzameld bij aanvang en gedurende de periode van 24 uur na de eerste interventie. Deelnemers krijgen instructies en een verzamelpakket voor ontlastingsmonsters (verzamelzakken, kabelbinders, grote zakken met ritssluiting, diepvriesijsblokken en een speciale koeltas voor transport). Verzamelde ontlastingsmonsters worden gewogen en ingevroren bij -80°C tot analyse.

N-nitrosaminen. Nitrosaminen in de interventies, urine- en ontlastingsmonsters zullen worden gemeten door middel van gaschromatografie massaspectrometrie (GCMS). Vluchtige nitrosaminen worden geëxtraheerd met dichloormethaan en worden goed gescheiden door middel van gaschromatografie. Identificatie vindt plaats op basis van retentietijd en unieke moleculaire ionen voor elk van de vijf veelvoorkomende nitrosaminen. Kwantificering zal worden gemaakt door gebruik te maken van met deuterium gemerkte interne standaarden, N-nirtrosodimethylamine-D6; N-nitrosodiethylamine D10; N-nitrosomorfoline D8 (Cambridge Isotopes) en N-nitrosopiperidine D10 (Toronto Research Chemicals). De meest gedetecteerde nitrosaminen zijn NDMA en N-Nitrosopiperidine (NPIP). Er zullen controle-experimenten worden uitgevoerd waarbij water wordt opgeslagen in dezelfde containers als die worden gebruikt voor het verzamelen en opslaan van monsters, om te testen op eventuele uitloging van vluchtige nitrosaminen.

Steekproefgrootte en kracht

De steekproefomvang is gebaseerd op een crossover-ontwerp en het primaire resultaat van N-nitrosaminen, met name N-Nitrosodimethylamine (NDMA) in de urine. Bij α=0,05, 2 metingen per proefpersoon (baseline en post) en een correlatie van ρ=0,6 tussen metingen, zullen 25 deelnemers 80% vermogen leveren om een ​​toename van 0,6 SD in NDMA-concentratie te detecteren. Om een ​​terugtrekkingspercentage van 10% mogelijk te maken, zijn we van plan om 25 deelnemers voor het onderzoek te werven. Er wordt een voortschrijdende werving van deelnemers uitgevoerd totdat de steekproefomvang is bereikt.

statistische methoden

Statistische analyses worden uitgevoerd met behulp van IBM SPSS Statistics for Windows, versie 25 (IBM) en STATA/IC 17.0 (StataCorp LLC). Beschrijvende statistieken van normaal verdeelde continue variabelen worden uitgedrukt als gemiddelde (± standaarddeviatie, SD), niet-normaal verdeelde continue variabelen als mediaan (interkwartielbereik, IQR) en categorische variabelen als getal (proportie, %). Voorafgaand aan de analyse worden de gegevens beoordeeld op uitschieters en normaliteit. Niet-normaal verdeelde gegevens worden indien nodig loggetransformeerd. Behandelingseffecten voor uitkomsten zullen worden verkregen met behulp van lineaire gemengde modellen, inclusief basislijnmetingen, behandelingsvolgorde, periode en tijd (als een categorische variabele) als vaste effecten. We zullen ook een interactieterm voor behandelingsperiode X opnemen om te beoordelen op mogelijke interacties tijdens de behandelingsperiode en we zullen afzonderlijk beoordelen op overdrachtseffecten met dummyvariabelen om de vorige behandeling aan te geven. Behandelingseffecten voor uitkomsten met een enkele post-interventiemeting zullen worden verkregen met behulp van lineaire gemengde modellen, inclusief basislijnmetingen, behandelingsvolgorde en periode als voorspellers. Het ID-nummer van de proefpersoon wordt als een willekeurige onderschepping in elk model opgenomen. Een algemeen tweezijdig type-1 foutenpercentage van P<0,05 zal worden gebruikt om de statistische significantie voor alle hypothesetesten te beoordelen.