Dusičnany INFORMER Water Study

Studovat design

Bude použit design zkřížené studie s 1týdenním vymývacím obdobím mezi intervencemi. Strava účastníků pro den před a den intervence bude standardizována (výběr jídla při návštěvě 1 bude přizpůsoben návštěvě 2) takto:

Za den před studijní návštěvou:

• Snídaně: toast z bílého chleba s vejci, sýrem, arašídovým máslem nebo marmeládou.
• Oběd bude zajištěn dýňovou polévkou a bílým chlebem
• Večeře: vegetariánské jídlo s nízkým obsahem dusičnanů
• Veškerá voda bude zajištěna
• Účastníci budou požádáni, aby se 24 hodin před studijní návštěvou zdrželi pití jakékoli kávy nebo nápojů obsahujících kofein 17 a jakéhokoli alkoholického nápoje 18 a vykonávali jakékoli cvičení.

Pro den studijní návštěvy:

• Účastníci dorazí na studijní jednotku nalačno
• Snídaně bude obsahovat toust z bílého chleba se sýrem, arašídovým máslem nebo džemem spolu s prvním vodním zásahem
• Oběd bude obsahovat dýňovou polévku a bílý chléb spolu s druhou vodní intervencí
• Účastníci budou mít k dispozici standardizovanou večeři: vegetariánské jídlo s nízkým obsahem dusičnanů
• Veškerá voda bude zajištěna
• Účastníci budou požádáni, aby se 24 hodin před studijní návštěvou zdrželi pití jakékoli kávy nebo nápojů obsahujících kofein 17 a jakéhokoli alkoholického nápoje 18 a vykonávali jakékoli cvičení.

Zásahy

• Voda s přidaným dusičnanem: 137 mg dusičnanu sodného nebo 164 mg dusičnanu draselného (100 mg dusičnanu) v 500 ml láhvi na vodu (200 mg/l) dodávané dvakrát, jedna se snídaní a druhá s obědem. To odpovídá celkem 200 mg dusičnanů.

V Austrálii směrnice publikované v roce 2011 doporučují, aby hladiny nižší než 50 mg/l byly bezpečné k pití, hladiny 50 – 100 mg/l jsou bezpečné pro všechny dospělé včetně těhotných žen, ale ne kojenců mladších 3 měsíců, pití voda s koncentrací dusičnanů vyšší než 100 mg/l se nedoporučuje.

• Voda bez přidaného dusičnanu: 137 mg chloridu sodného nebo 164 mg chloridu draselného v 500ml láhvi na vodu dodávané dvakrát, jedna se snídaní a druhá s obědem.

Generování sekvencí. Posloupnost alokace intervencí bude generována pomocí blokové randomizace pomocí počítačově generovaných náhodných čísel. Budou použity náhodné velikosti bloků 2 a 4.

Krycí mechanismus. Padesát náhodně vygenerovaných sekvencí intervencí pro každého z účastníků studie bude vytištěno na samostatných kusech papíru a zapečetěno v neprůhledných obálkách s čísly 1-50 výzkumným pracovníkem studie, který se nepodílí na provádění intervence, sběru dat nebo analýzy dat. .

Implementace. Jakmile je účastník považován za způsobilého a zapsán do studie, koordinátor studie bude kontaktovat zkoušejícího odpovědného za randomizaci a alokaci intervencí, aby získal další dostupnou obálku a náhodně vygenerovanou sekvenci intervencí.

Oslepující. Vzhledem k povaze intervencí budou účastníci a vyšetřovatelé zodpovědní za provedení intervencí během soudního řízení nezaslepeni. Všichni výzkumní pracovníci provádějící laboratorní analýzy a analýzy dat však budou zaslepeni vůči zásahům, které účastníci obdrželi, dokud nebude provedena analýza dat.

Časová osa účastníka. Před první návštěvou kliniky každý účastník vyplní dotazník frekvence jídla (FFQ), aby posoudil základní obvyklou stravu.

Při každé návštěvě kliniky (obrázek 1) bude odebrán základní vzorek moči a stolice pro měření N-nitrosaminů. Před intervencí budou účastníci instruováni, aby vyprázdnili močový měchýř do základní nádoby na sběr moči. Po prvním zásahu bude shromážděna veškerá moč za následujících 24 hodin pro měření N-nitrosaminů, dusičnanů a dusitanů. Pro měření N-nitrosaminů, dusičnanů a dusitanů bude odebrána stolice.

Hodnocení

Sběr moči a stolice. Vzorek moči bude odebrán na začátku a od intervence až do 24 hodin po intervenci. Pro základní vzorek bude účastníkům poskytnuta sterilizovaná nádoba a instrukce, jak zlikvidovat první vzorek moči v daný den a poté shromáždit veškerou moč až do intervence, která bude přinesena na kliniku. Účastníci budou instruováni, aby po probuzení vypili 250 ml vody. Pro 24hodinové vzorky moči budou účastníkům poskytnuty sterilizované nádoby a instrukce k odběru veškeré moči do 24 hodin po intervenci. Alikvoty moči budou zmraženy při -80 °C až do analýzy. Vzorek stolice bude odebrán na začátku a po dobu 24 hodin po prvním zákroku. Účastníkům budou poskytnuty instrukce a balíček na odběr vzorků stolice (sběrné sáčky, kabelové stahovací pásky, velké sáčky na zip, mrazicí ledové bloky a určená chladicí taška pro přepravu). Odebrané vzorky stolice budou zváženy a zmraženy při -80 °C až do analýzy.

N-nitrosaminy. Nitrosaminy v intervencích, vzorcích moči a stolice budou měřeny plynovou chromatografií hmotnostní spektrometrií (GCMS). Těkavé nitrosaminy budou extrahovány dichlormethanem a jsou dobře separovány plynovou chromatografií. Identifikace bude retenčním časem a jedinečnými molekulárními ionty pro každý z pěti běžných nitrosaminů. Kvantifikace bude provedena pomocí vnitřních standardů značených deuteriem, N-nitrosodimethylaminu-D6; N-nitrosodiethylamin D10; N-nitrosomorfolin D8 (Cambridge Isotopes) a N-nitrosopiperidin D10 (Toronto Research Chemicals). Nejčastěji detekovanými nitrosaminy jsou NDMA a N-nitrosopiperidin (NPIP). Kontrolní experimenty, ve kterých bude voda skladovaná ve stejných nádobách, jaké se používají pro odběr a skladování vzorků, budou prováděny za účelem testování jakéhokoli vyluhování těkavých nitrosaminů.

Velikost vzorku a výkon

Velikost vzorku je založena na crossover designu a primárním výsledku N-nitrosaminů, konkrétně N-nitrosodimethylaminu (NDMA) v moči. Při α=0,05, 2 měření na subjekt (základní stav a příspěvek) a korelaci ρ=0,6 mezi měřeními poskytne 25 účastníků 80% sílu k detekci zvýšení koncentrace NDMA o 0,6 SD. Abychom umožnili 10% míru stažení, plánujeme do studie přijmout 25 účastníků. Dokud nebude dosaženo velikosti vzorku, bude probíhat průběžný nábor účastníků.

statistické metody

Statistické analýzy budou prováděny pomocí IBM SPSS Statistics for Windows, verze 25 (IBM) a STATA/IC 17.0 (StataCorp LLC). Popisná statistika normálně rozdělených spojitých proměnných bude vyjádřena jako průměr (± standardní odchylka, SD), nenormálně rozdělených spojitých proměnných jako medián (interkvartilní rozmezí, IQR) a kategoriální proměnné jako počet (proporce, %). Data budou před analýzou hodnocena na odlehlé hodnoty a normalitu. Nenormálně distribuovaná data budou v případě potřeby logově transformována. Účinky léčby na výsledky budou získány pomocí lineárních smíšených modelů včetně základních měření, pořadí léčby, období a času (jako kategorické proměnné) jako fixních efektů. Zahrneme také termín interakce mezi léčebným obdobím X pro posouzení možných interakcí mezi léčebným obdobím a samostatně vyhodnotíme přenosové efekty s fiktivními proměnnými, které indikují předchozí léčbu. Účinky léčby na výsledky s jediným pointervenčním měřením budou získány pomocí lineárních smíšených modelů včetně základních měření, pořadí léčby a období jako prediktorů. Identifikační číslo subjektu bude zahrnuto jako náhodné zachycení v každém modelu. Celková 2stranná chybovost typu 1 P<0,05 bude použita k posouzení statistické významnosti pro všechna testování hypotéz.