질산염 INFORMER 수질 연구

연구 설계

교차 연구 설계는 개입 사이에 1주일 휴약 기간과 함께 사용됩니다. 전날과 개입 당일의 참가자 식단은 다음과 같이 표준화됩니다(방문 1의 음식 선택은 방문 2와 일치합니다).

연구 방문 전날:

• 아침: 계란, 치즈, 땅콩 버터 또는 잼을 곁들인 흰 빵 토스트.
• 호박 수프와 식빵으로 구성된 점심이 제공됩니다.
• 저녁: 저질산염 채식 식사
• 물은 모두 제공됩니다
• 참가자는 연구 방문 24시간 전에 음료 17 및 알코올 음료 18를 함유한 커피 또는 카페인을 마시지 말고 운동을 하도록 요청받을 것입니다.

연구 방문 당일:

• 참가자는 연구 단위 금식에 도착합니다
• 아침 식사는 첫 번째 물 개입과 함께 치즈, 땅콩 버터 또는 잼을 곁들인 식빵 토스트로 구성됩니다.
• 점심은 두 번째 물 개입과 함께 호박 수프와 흰 빵으로 구성됩니다.
• 참가자에게는 표준화된 저녁 식사가 제공됩니다: 저질산염 채식 식사
• 물은 모두 제공됩니다
• 참가자는 연구 방문 24시간 전에 음료 17 및 알코올 음료 18를 함유한 커피 또는 카페인을 마시지 말고 운동을 하도록 요청받을 것입니다.

개입

• 질산염이 첨가된 물: 500mL 물병(200mg/L)에 들어 있는 질산나트륨 137mg 또는 질산칼륨 164mg(질산염 100mg)을 아침 식사와 점심 식사로 두 번 제공합니다. 이것은 총 200mg 질산염에 해당합니다.

호주에서는 2011년에 발표된 가이드라인에 따라 50mg/L 미만이 안전하고, 50~100mg/L는 임산부를 포함한 모든 성인이 마셔도 안전하지만 3개월 미만의 유아는 마실 수 없습니다. 질산염 농도가 100mg/L 이상인 물은 권장하지 않습니다.

• 질산염이 첨가되지 않은 물: 500mL 물병에 담긴 염화나트륨 137mg 또는 염화칼륨 164mg이 아침 식사와 점심 식사로 두 번 제공됩니다.

시퀀스 생성. 개입 할당 순서는 컴퓨터 생성 난수를 사용하여 블록 무작위화를 통해 생성됩니다. 2와 4의 임의 블록 크기가 사용됩니다.

은폐 메커니즘. 개입, 데이터 수집 또는 데이터 분석 수행에 관여하지 않은 연구 조사관이 각 연구 참여자에 대해 무작위로 생성한 개입 시퀀스 50개를 별도의 종이에 인쇄하고 불투명 봉투에 1-50번까지 밀봉합니다. .

구현. 참가자가 자격이 있는 것으로 간주되고 연구에 등록되면 연구 코디네이터는 무작위화 및 개입 할당을 담당하는 연구 조사자에게 연락하여 다음 사용 가능한 엔벨로프 및 무작위로 생성된 개입 순서를 얻습니다.

눈부신. 개입의 성격을 감안할 때 개입을 담당하는 참가자 및 조사관은 시험 기간 동안 눈가림이 해제됩니다. 그러나 실험실 분석 및 데이터 분석을 수행하는 모든 연구원은 데이터 분석이 수행될 때까지 참가자가 받은 개입에 대해 눈이 멀게 됩니다.

참가자 타임라인. 첫 번째 클리닉 방문 전에 각 참가자는 배경 습관식을 평가하기 위해 음식 빈도 설문지(FFQ)를 작성합니다.

각 진료소 방문 시(그림 1) N-니트로사민 측정을 위해 기본 소변 및 대변 샘플을 수집합니다. 개입하기 전에 참가자는 기본 소변 수집 용기에 방광을 비우도록 지시받습니다. 첫 번째 개입 후 이후 24시간 동안 모든 소변을 수집하여 N-니트로사민, 질산염 및 아질산염을 측정합니다. N-니트로사민, 질산염 및 아질산염을 측정하기 위해 대변을 수집합니다.

평가

소변 및 대변 수집. 소변 샘플은 기준선에서 그리고 개입 시점부터 개입 후 24시간까지 수집됩니다. 기준 샘플의 경우, 참가자에게는 멸균된 용기가 제공되며 그날의 첫 번째 소변 샘플을 폐기한 다음 클리닉에 가져올 중재까지 모든 소변을 수집하라는 지침이 제공됩니다. 참가자는 깨어날 때 250ml의 물을 마시도록 지시받습니다. 24시간 소변 샘플의 경우 참가자에게는 멸균된 용기와 개입 후 24시간까지 모든 소변을 수집하라는 지침이 제공됩니다. 소변 분취량은 분석할 때까지 -80°C에서 동결됩니다. 대변 ​​샘플은 기준선에서 그리고 첫 번째 개입 후 24시간 동안 수집됩니다. 참가자에게는 지침과 대변 샘플 수집 팩(수집 가방, 케이블 타이, 대형 지퍼 잠금 가방, 냉동 얼음 블록 및 운송용 지정 냉각 가방)이 제공됩니다. 수집된 대변 샘플은 무게를 측정하고 분석할 때까지 -80°C에서 동결됩니다.

N-니트로사민. 개입, 소변 및 대변 샘플의 니트로사민은 가스 크로마토그래피 질량 분석법(GCMS)으로 측정됩니다. 휘발성 니트로사민은 디클로로메탄으로 추출되며 가스 크로마토그래피로 잘 분리됩니다. 식별은 5가지 일반적인 니트로사민 각각에 대한 보유 시간 및 고유한 분자 이온에 의해 이루어집니다. 정량은 중수소 표지된 내부 표준, N-니트로소디메틸아민-D6을 사용하여 이루어집니다. N-니트로소디에틸아민 D10; N-니트로소모르폴린 D8(Cambridge Isotopes) 및 N-니트로소피페리딘 D10(Toronto Research Chemicals). 가장 일반적으로 검출되는 니트로사민은 NDMA와 N-니트로소피페리딘(NPIP)입니다. 휘발성 니트로사민의 침출을 테스트하기 위해 샘플 수집 및 저장에 사용된 것과 동일한 용기에 저장된 물에 대한 제어 실험이 수행됩니다.

샘플 크기 및 검정력

샘플 크기는 크로스오버 설계와 N-니트로사민, 특히 소변 내 NDMA(N-니트로소디메틸아민)의 주요 결과를 기반으로 합니다. α=0.05, 피험자당 2개의 측정(기준선 및 사후) 및 측정 간의 상관 관계 ρ=0.6에서 25명의 참가자는 NDMA 농도의 0.6 SD 증가를 감지하는 80% 검정력을 제공합니다. 10%의 철회율을 허용하기 위해 연구에 25명의 참가자를 모집할 계획입니다. 참가자 모집은 샘플 크기에 도달할 때까지 수행됩니다.

통계적 방법

통계 분석은 Windows용 IBM SPSS Statistics, 버전 25(IBM) 및 STATA/IC 17.0(StataCorp LLC)을 사용하여 수행됩니다. 정규 분포된 연속 변수의 기술 통계는 평균(± 표준 편차, SD)으로, 비정규 분포 연속 변수는 중앙값(사분위수 범위, IQR)으로, 범주형 변수는 숫자(비율, %)로 표시됩니다. 데이터는 분석 전에 특이치 및 정규성에 대해 평가됩니다. 비정규 분포 데이터는 필요한 경우 로그 변환됩니다. 결과에 대한 치료 효과는 기준선 측정, 치료 순서, 기간 및 시간(범주형 변수)을 포함하는 선형 혼합 모델을 고정 효과로 사용하여 얻을 수 있습니다. 또한 가능한 치료 기간 상호 작용을 평가하기 위해 치료 X 기간 상호 작용 용어를 포함하고 이전 치료를 나타내기 위해 더미 변수로 이월 효과를 별도로 평가합니다. 단일 개입 후 측정 결과에 대한 치료 효과는 기준선 측정, 치료 순서 및 기간을 예측 변수로 포함하는 선형 혼합 모델을 사용하여 얻을 수 있습니다. 피험자 ID 번호는 각 모델에서 임의 절편으로 포함됩니다. 모든 가설 테스트에 대한 통계적 유의성을 평가하기 위해 P<0.05의 전체 양면 1종 오류율이 사용됩니다.