Étudier des échantillons de patients atteints de leucémie aiguë lymphoblastique à cellules T

OBJECTIFS:

• Déterminer l'état métabolique et la régulation de la leucémie lymphoblastique aiguë primaire à cellules T (T-ALL) par rapport aux cellules T périphériques au repos.
• Établir les effets de l'inhibition métabolique sur les voies de stress métabolique et l'apoptose.
• Déterminez comment l'inhibition métabolique interagit avec la chimiothérapie ou les médicaments de thérapie ciblée pour tuer les cellules T-ALL.

APERÇU : Les échantillons de T-ALL cultivés seuls ou avec des inhibiteurs de gamma sécrétase (GSI) ou des inhibiteurs de PI3K sont analysés pour les caractéristiques métaboliques, y compris l'expression du transporteur de glucose 1 (Glut1), la masse mitochondriale, le phospho-flow pour la protéine kinase activée par l'adénosine monophosphate en 5' (AMPK ), l'acétyl-CoA carboxylase (ACC) et la cible mammifère de la rapamycine (mTOR) par cytométrie en flux. Les échantillons T-ALL et les lymphocytes T CD4+ normaux (témoins) sont également exposés au milieu ± 2-désoxyglucose ou ± le milieu inhibiteur de la glutaminolyse et analysés pour les réponses au stress métabolique au fil du temps, en particulier l'activation de l'AMPK, l'autophagie (immunofluorescence pour le traitement LC3-II), et la protéine X associée à BCL2 (Bak) et l'activation de Bax pour indiquer l'apoptose. Ces cellules (T-ALL et contrôle) sont ensuite cultivées avec du cyclophosphamide, de la dexaméthasone ou l'inhibiteur de la cellule B de la LLC/lymphome 2 (Bcl-2), ABT-737, pour déterminer la mort cellulaire au fil du temps.