Estudando amostras de pacientes com leucemia linfoblástica aguda de células T

OBJETIVOS:

• Determinar o estado metabólico e a regulação da leucemia linfoblástica aguda primária de células T (T-ALL) em relação ao controle de células T periféricas em repouso.
• Estabelecer os efeitos da inibição metabólica nas vias de estresse metabólico e apoptose.
• Determine como a inibição metabólica interage com a quimioterapia ou drogas de terapia direcionada para matar as células T-ALL.

ESBOÇO: As amostras de T-ALL cultivadas sozinhas ou com inibidores de gama secretase (GSI) ou inibidores de PI3K são analisadas quanto a características metabólicas, incluindo expressão do transportador de glicose 1 (Glut1), massa mitocondrial, fluxo de fosfo para proteína quinase ativada por monofosfato de adenosina 5' (AMPK ), acetil-CoA carboxilase (ACC) e alvo mamífero da rapamicina (mTOR) por citometria de fluxo. Amostras T-ALL e células T CD4+ normais (controle) também são expostas a ± 2-desoxiglicose ou ± o meio inibidor de glutaminólise e analisadas para respostas ao estresse metabólico ao longo do tempo, em particular, ativação de AMPK, autofagia (imunofluorescência para processamento de LC3-II), e proteína X associada a BCL2 (Bak) e ativação de Bax para indicar apoptose. Essas células (T-ALL e controle) são então cultivadas com ciclofosfamida, dexametasona ou o inibidor de célula B CLL/linfoma 2 (Bcl-2), ABT-737, para determinar a morte celular ao longo do tempo.