Monsters bestuderen van patiënten met T-cel acute lymfoblastische leukemie

DOELSTELLINGEN:

• Bepaal de metabole status en regulatie van primaire T-cel acute lymfoblastische leukemie (T-ALL) ten opzichte van controle rustende perifere T-cellen.
• Bepaal de effecten van metabole remming op metabole stressroutes en apoptose.
• Bepaal hoe metabole remming interageert met chemotherapie of medicijnen voor gerichte therapie om T-ALL-cellen te doden.

OVERZICHT: T-ALL-monsters die alleen of met gammasecretaseremmers (GSI) of PI3K-remmers zijn gekweekt, worden geanalyseerd op metabole kenmerken, waaronder expressie van glucosetransporter 1 (Glut1), mitochondriale massa, fosfostroom voor 5'-adenosinemonofosfaat-geactiveerd proteïnekinase (AMPK ), acetyl-CoA-carboxylase (ACC) en zoogdierdoel van rapamycine (mTOR) door flowcytometrie. T-ALL-monsters en normale CD4+ T-cellen (controle) worden ook blootgesteld aan ± 2-deoxyglucose of ± de glutaminolyseremmermedia en geanalyseerd op metabole stressreacties in de loop van de tijd, in het bijzonder AMPK-activering, autofagie (immunofluorescentie voor LC3-II-verwerking), en BCL2-geassocieerd X-eiwit (Bak) en Bax-activering om apoptose aan te geven. Deze cellen (T-ALL en controle) worden vervolgens gekweekt met cyclofosfamide, dexamethason of de B-cel CLL/lymfoom 2 (Bcl-2)-remmer, ABT-737, om celdood na verloop van tijd te bepalen.