Изучение образцов пациентов с Т-клеточным острым лимфобластным лейкозом

ЦЕЛИ:

• Определите метаболический статус и регуляцию первичного Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза (T-ALL) по сравнению с контрольными покоящимися периферическими Т-клетками.
• Установить влияние ингибирования метаболизма на пути метаболического стресса и апоптоз.
• Определите, как ингибирование метаболизма взаимодействует с химиотерапией или препаратами таргетной терапии для уничтожения клеток Т-ОЛЛ.

ПЛАН: Образцы T-ALL, культивированные отдельно или с ингибиторами гамма-секретазы (GSI) или ингибиторами PI3K, анализируют на предмет метаболических характеристик, включая экспрессию переносчика глюкозы 1 (Glut1), митохондриальную массу, поток фосфофосфора для 5'-аденозинмонофосфат-активируемой протеинкиназы (AMPK). ), ацетил-КоА-карбоксилазу (ACC) и мишень рапамицина млекопитающих (mTOR) с помощью проточной цитометрии. Образцы T-ALL и нормальные CD4+ T-клетки (контроль) также подвергались воздействию среды с ± 2-дезоксиглюкозой или ± ингибитором глутаминолиза и анализировались на метаболические стрессовые реакции с течением времени, в частности, на активацию AMPK, аутофагию (иммунофлуоресценция для процессинга LC3-II), и BCL2-ассоциированный белок X (Bak) и активация Bax для указания на апоптоз. Эти клетки (T-ALL и контроль) затем культивируют с циклофосфамидом, дексаметазоном или ингибитором B-клеток CLL/лимфомы 2 (Bcl-2), ABT-737, для определения гибели клеток с течением времени.