Estudio de muestras de pacientes con leucemia linfoblástica aguda de células T

OBJETIVOS:

• Determine el estado metabólico y la regulación de la leucemia linfoblástica aguda de células T primarias (LLA-T) en relación con el control de las células T periféricas en reposo.
• Establecer los efectos de la inhibición metabólica sobre las vías de estrés metabólico y la apoptosis.
• Determine cómo interactúa la inhibición metabólica con la quimioterapia o los medicamentos de terapia dirigida para destruir las células T-ALL.

ESQUEMA: Las muestras de T-ALL cultivadas solas o con inhibidores de gamma secretasa (GSI) o inhibidores de PI3K se analizan en busca de características metabólicas, incluida la expresión del transportador de glucosa 1 (Glut1), la masa mitocondrial, el flujo de fósforo para la proteína quinasa activada por monofosfato de adenosina 5' (AMPK ), acetil-CoA carboxilasa (ACC) y objetivo de rapamicina en mamíferos (mTOR) por citometría de flujo. Las muestras de T-ALL y las células T CD4+ normales (control) también se exponen a ± 2-desoxiglucosa o ± los medios inhibidores de la glutaminólisis y se analizan en busca de respuestas de estrés metabólico a lo largo del tiempo, en particular, activación de AMPK, autofagia (inmunofluorescencia para el procesamiento de LC3-II), y proteína X asociada a BCL2 (Bak) y activación de Bax para indicar apoptosis. Estas células (T-ALL y control) luego se cultivan con ciclofosfamida, dexametasona o el inhibidor de CLL/linfoma 2 de células B (Bcl-2), ABT-737, para determinar la muerte celular con el tiempo.