Untersuchen von Proben von Patienten mit akuter lymphoblastischer T-Zell-Leukämie

ZIELE:

• Bestimmen Sie den Stoffwechselstatus und die Regulation der primären akuten lymphoblastischen T-Zell-Leukämie (T-ALL) im Vergleich zu den ruhenden peripheren T-Zellen.
• Stellen Sie die Auswirkungen der metabolischen Hemmung auf metabolische Stresswege und Apoptose fest.
• Bestimmen Sie, wie metabolische Hemmung mit Chemotherapie oder zielgerichteten Therapiemedikamenten interagiert, um T-ALL-Zellen abzutöten.

ÜBERBLICK: T-ALL-Proben, die allein oder mit Gamma-Sekretase-Inhibitoren (GSI) oder PI3K-Inhibitoren kultiviert wurden, werden auf metabolische Eigenschaften analysiert, einschließlich Glucosetransporter 1 (Glut1)-Expression, mitochondriale Masse, Phosphofluss für 5'-Adenosinmonophosphat-aktivierte Proteinkinase (AMPK ), Acetyl-CoA-Carboxylase (ACC) und Säugetier-Target von Rapamycin (mTOR) durch Durchflusszytometrie. T-ALL-Proben und normale CD4+-T-Zellen (Kontrolle) werden ebenfalls ± 2-Desoxyglucose oder ± den Glutaminolyse-Inhibitormedien ausgesetzt und auf metabolische Stressreaktionen im Laufe der Zeit analysiert, insbesondere AMPK-Aktivierung, Autophagie (Immunfluoreszenz für LC3-II-Verarbeitung), und BCL2-assoziiertes X-Protein (Bak) und Bax-Aktivierung, um Apoptose anzuzeigen. Diese Zellen (T-ALL und Kontrolle) werden dann mit Cyclophosphamid, Dexamethason oder dem B-Zell-CLL/Lymphom 2 (Bcl-2)-Inhibitor, ABT-737, kultiviert, um den Zelltod im Laufe der Zeit zu bestimmen.