Personnalisation du traitement antituberculeux : évaluation des déterminants pharmacologiques de la réponse au traitement (PAT)

Une étude observationnelle longitudinale multicentrique sera menée chez des patients ayant reçu un diagnostic de tuberculose pulmonaire active.

Les variables suivantes seront enregistrées :

• variables démographiques : âge, sexe, origine ethnique, SNP pour NAT2, SLCO1B1, ABCB1 et VDR ;
• variables cliniques : poids, taille, tests de la fonction rénale, tests de la fonction hépatique, taux de vitamine D (25-OH vitamine D), albuminémie, sérologie pour le VIH, le VHC, présence de comorbidités (p. diabète sucré), test d'acuité visuelle, présence de symptômes neuropathiques ;
• variables microbiologiques : résultats des tests phénotypiques et génotypiques de sensibilité aux médicaments, crachats ADN de Mycobacterium tuberculosis (PCR), microscopie, culture, Time To Positivity (TTP) en culture liquide, test IGRA (si réalisé), historique des traitements antérieurs, localisation des lésions pulmonaires, présence de localisations extra-pulmonaires ;
• variables thérapeutiques : début/fin de traitement, interruptions de traitement, dose mg/kg, voie d'administration.

Les patients recevront des médicaments antituberculeux standard conformément aux directives internationales (RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg dose maximale 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg dose maximale 2000 mg) en état de fermeture, une fois par jour.

Pour mesurer les concentrations plasmatiques, quatre échantillons de sang (tubes de 7 ml d'héparine de lithium) seront prélevés à 0, 2, 4 et 6 heures après l'administration. Cette analyse sera réalisée à 7 et 14 jours après le début du traitement antituberculeux.

Pour l'analyse pharmacogénétique, un échantillon de sang (tube EDTA de 4 ml) sera prélevé au départ.

Des échantillons d'expectorations seront prélevés au départ, 7 et 14 jours pour la culture mycobactérienne.

Des visites médicales et des prélèvements sanguins (pour les LFT) seront effectués au départ, 7 et 14 jours pour étudier la neurotoxicité et l'hépatotoxicité.

Pharmacocinétique Après le prélèvement les échantillons seront centrifugés (3000 tr min-1 à 4°C pendant 10 min) et le plasma sera congelé à - 20°C en 2 aliquots (1 mL de volume) et sera livré au Laboratoire de Pharmacocinétique et pharmacogénétique de l'hôpital universitaire Amedeo di Savoia de Turin, ASLTO2, Turin, Italie.

Les concentrations plasmatiques des quatre médicaments seront mesurées à l'aide de la chromatographie liquide couplée à la spectroscopie de masse en tandem (permettant une sensibilité élevée malgré de petits volumes d'échantillons). Les données de concentration-temps recueillies seront évaluées par une approche non-compartimentale pour caractériser les propriétés pharmacocinétiques à l'état d'équilibre. L'ASC, les niveaux maximum (Cmax) et minimum (Cmin) de médicament et la demi-vie d'élimination plasmatique seront utilisés pour évaluer les propriétés d'induction enzymatique de ces médicaments. L'ADN pharmacogénomique (PG) sera extrait du sang total à l'aide du kit QIamp DNA Mini (Quiagen, Valencia, CA). L'ADN purifié et élué sera directement utilisé pour la réaction de PCR en temps réel (BIORAD, Milano, Italia). L'analyse de discrimination allélique sera effectuée à l'aide des tests TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Les SNP analysés seront :

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) et OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs2472677), BsmI G>A (rs1544410).

et NAT2 G>A (rs1799930). Taches de sang séché (DBS) et Taches de plasma séché (DPS) Une méthode de détermination des concentrations plasmatiques sur les DPS sera développée et validée par notre laboratoire. Dans l'étude, les échantillons de sang pour évaluation sur DPS seront obtenus uniquement à partir de sujets de notre institut. Après centrifugation (3000 tours min-1 à 4°C pendant 10 min), 100 μl de plasma seront déposés sur chaque filtre en verre (acheté auprès de Laboratori Biomicron srl, Italie) et utilisés pour l'analyse pharmacocinétique (PK). Le plasma restant servira de contrôle dans l'analyse.

Pour l'analyse pharmacogénétique (PG), des échantillons de sang veineux seront obtenus de tous les sujets et du sang total (50 μl par point) sera déposé sur des cartes d'économie de protéines DBS Whatman 903 (VWR International, Milan, Italie).

Le DBS sera inséré dans un sac en aluminium avec un déshydratant (Foil Bag and Desiccant Packs, acheté auprès de Laboratori Biomicron srl, Italie) puis stocké à température ambiante. Après un maximum de 30 jours, les échantillons seront livrés au Laboratoire de Pharmacocinétique et Pharmacogénétique de l'Hôpital Amedeo di Savoia de l'Université de Turin, ASLTO2, Turin, Italie. Ils seront conservés à - 20°C jusqu'à la réalisation de l'analyse (dans les 3 mois suivant le prélèvement).

Délai de positivité Le délai de positivité sur les cultures d'expectoration au départ, 7 et 14 jours, sera calculé à l'aide du logiciel BD Epicentre intégré au système BACTEC MGIT (Mycobacteria Growth Indication Tube) 960. Le délai par défaut est de 42 jours.