Personalização do Tratamento AntiTB: Avaliação dos Determinantes Farmacológicos da Resposta ao Tratamento (PAT)

Será realizado um estudo longitudinal observacional multicêntrico em pacientes com diagnóstico de TB pulmonar ativa.

As seguintes variáveis ​​serão registradas:

• variáveis ​​demográficas: idade, gênero, etnia, SNPs para NAT2, SLCO1B1, ABCB1 e VDR;
• variáveis ​​clínicas: peso, altura, testes de função renal, testes de função hepática, nível de vitamina D (25-OH vitamina D), albuminemia, sorologia para HIV, HCV, presença de comorbidades (ex. diabetes mellitus), teste de acuidade visual, presença de sintomas neuropáticos;
• variáveis ​​microbiológicas: resultados de testes fenotípicos e genotípicos de sensibilidade a drogas, escarro Mycobacterium tuberculosis DNA (PCR), microscopia, cultura, Time To Positivity (TTP) em cultura líquida, teste IGRA (se realizado), história de tratamentos anteriores, localização de lesões pulmonares, presença de localizações extrapulmonares;
• variáveis ​​terapêuticas: início/fim do tratamento, interrupções do tratamento, dose mg/kg, via de administração.

Os pacientes receberão medicamentos antituberculose padrão de acordo com as diretrizes internacionais (RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg dose máxima de 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg dose máxima de 2000 mg) em condições de jejum, uma vez por dia.

Para medir as concentrações plasmáticas, quatro amostras de sangue (tubos de 7 ml de heparina de lítio) serão coletadas 0, 2, 4 e 6 horas após a dose. Esta análise será realizada 7 e 14 dias após o início do tratamento anti-TB.

Para a análise farmacogenética, uma amostra de sangue (tubo de 4 ml com EDTA) será coletada na linha de base.

Amostras de escarro serão coletadas no início, 7 e 14 dias para cultura de micobactérias.

Visitas médicas e amostras de sangue (para LFTs) serão realizadas no início, 7 e 14 dias para investigar neuro e hepatotoxicidade.

Farmacocinética Após a coleta as amostras serão centrifugadas (3000 rev min-1 a 4°C por 10 min) e o plasma será congelado a -20°C em 2 alíquotas (1 mL de volume) e será entregue ao Laboratório de Farmacocinética e Farmacogenética do Hospital Amedeo di Savoia da Universidade de Torino, ASLTO2, Torino, Itália.

As concentrações plasmáticas de todas as quatro drogas serão medidas usando cromatografia líquida acoplada com espectroscopia de massa em tandem (permitindo alta sensibilidade apesar de pequenos volumes de amostra). Os dados de concentração-tempo coletados serão avaliados por uma abordagem não compartimental para caracterizar as propriedades farmacocinéticas no estado estacionário. AUC, níveis máximos (Cmax) e mínimos (Cmin) da droga e meia-vida de eliminação plasmática serão usados ​​para avaliar as propriedades de indução enzimática dessas drogas. O DNA de farmacogenômica (PG) será extraído do sangue total usando QIamp DNA Mini Kit (Quiagen, Valencia, CA). O DNA purificado e eluído será usado diretamente para reação de PCR em tempo real (BIORAD, Milano, Italia). A análise de discriminação alélica será realizada usando os ensaios TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Os SNPs analisados ​​serão:

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) e OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs2472677), BsmI G>A (rs1544410).

e NAT2 G>A (rs1799930). Sangue seco (DBSs) e Dryed plasma spots (DPSs) Método para determinação de concentrações plasmáticas em DPSs será desenvolvido e validado por nosso laboratório. No estudo, as amostras de sangue para avaliação em DPSs serão obtidas apenas de indivíduos de nosso instituto. Após a centrifugação (3000 rev min-1 a 4°C por 10 min), 100 μl de plasma serão colocados em cada filtro de vidro (adquirido do Laboratori Biomicron srl, Itália) e usados ​​para análise farmacocinética (PK). O plasma restante será usado como controle na análise.

Para a análise farmacogenética (PG), amostras de sangue venoso serão obtidas de todos os indivíduos e sangue total (50 μl por ponto) será manchado em cartões de proteção de proteína DBS Whatman 903 (VWR International, Milão, Itália).

O DBS será inserido em um saco de alumínio com dessecante (foil bag e dessecante packs, adquiridos do Laboratori Biomicron srl, Itália) e, em seguida, armazenado em temperatura ambiente. Após um máximo de 30 dias, as amostras serão entregues ao Laboratório de Farmacocinética e Farmacogenética da Universidade de Torino Amedeo di Savoia Hospital, ASLTO2, Torino, Itália. Eles serão armazenados a -20°C até que a análise seja realizada (dentro de 3 meses a partir da coleta).

Tempo para positividade O tempo para positividade nas culturas de escarro na linha de base, 7 e 14 dias será calculado usando o software BD Epicenter integrado no BACTEC MGIT System (Mycobacteria Growth Indication Tube) 960. O tempo padrão é de 42 dias.