Personalizacja leczenia przeciwgruźliczego: ocena farmakologicznych uwarunkowań odpowiedzi na leczenie (PAT)

U pacjentów z rozpoznaniem czynnej gruźlicy płuc zostanie przeprowadzone wieloośrodkowe badanie obserwacyjne podłużne.

Rejestrowane będą następujące zmienne:

• zmienne demograficzne: wiek, płeć, pochodzenie etniczne, SNP dla NAT2, SLCO1B1, ABCB1 i VDR;
• zmienne kliniczne: waga, wzrost, testy czynnościowe nerek, testy czynnościowe wątroby, poziom witaminy D (25-OH witaminy D), albuminemia, badania serologiczne w kierunku HIV, HCV, obecność chorób współistniejących (np. cukrzyca), badanie ostrości wzroku, obecność objawów neuropatycznych;
• zmienne mikrobiologiczne: wyniki fenotypowych i genotypowych testów lekowrażliwości, plwociny Mycobacterium tuberculosis DNA (PCR), mikroskopia, hodowla, czas do uzyskania pozytywnego wyniku (TTP) w hodowli płynnej, test IGRA (jeśli był wykonywany), historia wcześniejszych zabiegów, lokalizacja zmian w płucach, obecność lokalizacji pozapłucnych;
• zmienne terapeutyczne: początek/koniec leczenia, przerwy w leczeniu, dawka mg/kg, droga podania.

Pacjenci otrzymają standardowe leki przeciwgruźlicze zgodnie z międzynarodowymi wytycznymi (RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg maksymalna dawka 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg maksymalna dawka 2000 mg) w stanie zamocowania, raz dziennie.

W celu zmierzenia stężenia w osoczu zostaną pobrane cztery próbki krwi (probówki z heparyną litową o pojemności 7 ml) po 0, 2, 4 i 6 godzinach po podaniu dawki. Ta analiza zostanie przeprowadzona po 7 i 14 dniach od rozpoczęcia leczenia przeciwgruźliczego.

Do analizy farmakogenetycznej zostanie pobrana próbka krwi (probówka z EDTA 4 ml) na linii podstawowej.

Próbki plwociny będą pobierane na linii podstawowej, 7 i 14 dni do hodowli prątków.

Wizyty lekarskie i próbki krwi (w przypadku LFT) będą przeprowadzane na początku badania, 7 i 14 dni w celu zbadania neuro- i hepatotoksyczności.

Farmakokinetyka Po pobraniu próbki zostaną odwirowane (3000 obr./min-1 w temperaturze 4°C przez 10 min), a osocze zostanie zamrożone w temperaturze -20°C w 2 porcjach (objętość 1 ml) i dostarczone do Laboratorium Farmakokinetyka i farmakogenetyka Szpitala Amedeo di Savoia Uniwersytetu w Turynie, ASLTO2, Turyn, Włochy.

Stężenia wszystkich czterech leków w osoczu będą mierzone za pomocą chromatografii cieczowej połączonej z tandemową spektroskopią mas (pozwalającą na wysoką czułość pomimo małych objętości próbek). Zebrane dane dotyczące zależności stężenia od czasu zostaną ocenione za pomocą podejścia niekompartmentowego w celu scharakteryzowania właściwości farmakokinetycznych w stanie stacjonarnym. AUC, maksymalne (Cmax) i minimalne (Cmin) poziomy leku oraz okres półtrwania w fazie eliminacji z osocza zostaną wykorzystane do oceny właściwości indukcji enzymatycznej tych leków. Farmakogenomiczne (PG) DNA zostanie wyekstrahowane z krwi pełnej przy użyciu minizestawu QIamp DNA (Quiagen, Valencia, Kalifornia). Oczyszczone i eluowane DNA zostanie bezpośrednio użyte do reakcji PCR w czasie rzeczywistym (BIORAD, Mediolan, Włochy). Analiza dyskryminacji alleli zostanie przeprowadzona przy użyciu testów TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Analizowane SNP będą:

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) i OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs2472677), BsmI G>A (rs1544410).

i NAT2 G>A (rs1799930). Wysuszone plamki krwi (DBS) i Wysuszone plamki osocza (DPS) Metoda oznaczania stężeń w osoczu na DPS zostanie opracowana i zwalidowana przez nasze laboratorium. W badaniu próbki krwi do oceny na DPS będą pobierane wyłącznie od pacjentów naszego instytutu. Po odwirowaniu (3000 obr./min w 4°C przez 10 min) 100 μl osocza nanosi się na każdy szklany filtr (zakupiony od Laboratori Biomicron srl, Włochy) i stosuje do analizy farmakokinetycznej (PK). Pozostałe osocze zostanie użyte jako kontrola w analizie.

Do analizy farmakogenetycznej (PG) próbki krwi żylnej zostaną pobrane od wszystkich osobników, a krew pełna (50 μl na plamkę) zostanie naniesiona na karty DBS Whatman 903 do oszczędzania białka (VWR International, Mediolan, Włochy).

DBS zostanie umieszczony w torebce foliowej ze środkiem osuszającym (Foil Bag and Desiccant Packs, zakupione od Laboratori Biomicron srl, Włochy), a następnie będzie przechowywany w temperaturze pokojowej. Po maksymalnie 30 dniach próbki zostaną dostarczone do Laboratorium Farmakokinetyki i Farmakogenetyki Szpitala Amedeo di Savoia Uniwersytetu Turyńskiego, ASLTO2, Torino, Włochy. Będą przechowywane w temperaturze -20°C do czasu wykonania analizy (w ciągu 3 miesięcy od pobrania).

Czas do uzyskania wyniku dodatniego Czas do uzyskania wyniku dodatniego w hodowlach plwociny na początku badania, po 7 i 14 dniach, zostanie obliczony przy użyciu oprogramowania BD Epicenter zintegrowanego z systemem BACTEC MGIT (Mycobacteria Growth Indication Tube) 960. Domyślny czas to 42 dni.