Personalisering av antiTB-behandling: Utvärdering av farmakologiska bestämningsfaktorer för behandlingssvar (PAT)

En longitudinell observationell multicentrerad studie kommer att genomföras på patienter med diagnosen aktiv pulmonell TB.

Följande variabler kommer att registreras:

• demografiska variabler: ålder, kön, etnicitet, SNP för NAT2, SLCO1B1, ABCB1 och VDR;
• kliniska variabler: vikt, längd, njurfunktionstester, leverfunktionstester, vitamin D (25-OH vitamin D) nivå, albuminemi, serologi för HIV, HCV, förekomst av komorbiditeter (t.ex. diabetes mellitus), synskärpa test, närvaro av neuropatiska symtom;
• mikrobiologiska variabler: fenotypiska och genotypiska läkemedelskänslighetstestresultat, sputum Mycobacterium tuberculosis DNA (PCR), mikroskopi, odling, Time To Positivity (TTP) i flytande kultur, IGRA-test (om utfört), historia av tidigare behandlingar, lokalisering av lungskador, närvaro av extrapulmonella platser;
• terapeutiska variabler: behandlingsstart/slut, behandlingsavbrott, dos mg/kg, administreringssätt.

Patienterna kommer att få vanliga antituberkulära läkemedel enligt internationella riktlinjer (RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg maximal dos 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg maximal dos 2000 mg) i fästtillstånd, en gång om dagen.

För att mäta plasmakoncentrationer kommer fyra blodprover (litiumheparin 7 ml rör) att tas 0, 2, 4 och 6 timmar efter dosering. Denna analys kommer att utföras 7 och 14 dagar efter påbörjad anti-TB-behandling.

För den farmakogenetiska analysen kommer ett blodprov (EDTA 4 ml-rör) att tas vid baslinjen.

Sputumprover kommer att samlas in vid baslinjen, 7 och 14 dagar för mykobakteriekultur.

Läkarbesök och blodprover (för LFT) kommer att utföras vid baslinjen, 7 och 14 dagar för att undersöka neuro- och levertoxicitet.

Farmakokinetik Efter insamlingen kommer proverna att centrifugeras (3000 varv min-1 vid 4°C i 10 minuter) och plasma kommer att frysas vid -20°C i 2 alikvoter (1 ml volym) och levereras till laboratoriet för Farmakokinetik och farmakogenetik vid universitetet i Torino Amedeo di Savoia sjukhus, ASLTO2, Torino, Italien.

Plasmakoncentrationer av alla fyra läkemedlen kommer att mätas med hjälp av vätskekromatografi i kombination med tandemmasspektroskopi (vilket tillåter hög känslighet trots små provvolymer). Insamlade koncentrations-tidsdata kommer att utvärderas genom en icke-kompartmentell metod för att karakterisera de farmakokinetiska egenskaperna vid steady-state. AUC, maximala (Cmax) och lägsta (Cmin) läkemedelsnivåer och plasmaelimineringshalveringstid kommer att användas för att bedöma de enzymatiska induktionsegenskaperna hos dessa läkemedel. Pharmacogenomics (PG) DNA kommer att extraheras från helblod med QIamp DNA Mini Kit (Quiagen, Valencia, CA). Renat och eluerat DNA kommer att användas direkt för PCR-reaktion i realtid (BIORAD, Milano, Italia). Den alleliska diskrimineringsanalysen kommer att utföras med hjälp av TaqMan-analyser (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Analyserade SNP:er kommer att vara:

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) och OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs247217 G457), (rs247217 G457).

och NAT2 G>A (rs1799930). Torkade blodfläckar (DBS) och torkade plasmafläckar (DPS) Metoder för bestämning av plasmakoncentrationer på DPS kommer att utvecklas och valideras av vårt laboratorium. I studien kommer blodproverna för utvärdering på DPS endast att erhållas från försökspersoner från vårt institut. Efter centrifugering (3000 varv min-1 vid 4°C i 10 minuter) kommer 100 μl plasma att placeras på varje glasfilter (köpt från Laboratori Biomicron srl, Italien) och används för farmakokinetisk (PK) analys. Den återstående plasman kommer att användas som kontroller i analysen.

För den farmakogenetiska (PG) analysen kommer venösa blodprover att tas från alla försökspersoner och helblod (50 μl per fläck) kommer att ses på DBS Whatman 903 proteinsparkort (VWR International, Milano, Italien).

DBS kommer att föras in i en foliepåse med torkmedel (Foliepåse och torkmedelsförpackningar, köpta från Laboratori Biomicron srl, Italien) och förvaras sedan i rumstemperatur. Efter maximalt 30 dagar kommer prover att levereras till Laboratory of Pharmacokinetics and Pharmacogenetics vid University of Torino Amedeo di Savoia Hospital, ASLTO2, Torino, Italien. De kommer att förvaras vid -20°C tills analys kommer att utföras (inom 3 månader från insamling).

Tid till positivitet Tid till positivitet på sputumkulturer vid baslinjen, 7 och 14 dagar kommer att beräknas med programvaran BD Epicenter integrerad i BACTEC MGIT System (Mycobacteria Growth Indication Tube) 960. Standardtiden är 42 dagar.