Personalisering av antiTB-behandling: Evaluering av farmakologiske determinanter for behandlingsrespons (PAT)

En longitudinell observasjons multisentrert studie vil bli utført på pasienter med diagnosen aktiv lunge-TB.

Følgende variabler vil bli registrert:

• demografiske variabler: alder, kjønn, etnisitet, SNP-er for NAT2, SLCO1B1, ABCB1 og VDR;
• kliniske variabler: vekt, høyde, nyrefunksjonstester, leverfunksjonstester, vitamin D (25-OH vitamin D) nivå, albuminemi, serologi for HIV, HCV, tilstedeværelse av komorbiditeter (f.eks. diabetes mellitus), synsstyrketest, tilstedeværelse av nevropatiske symptomer;
• mikrobiologiske variabler: fenotypiske og genotypiske testresultater for legemiddelsensitivitet, sputum Mycobacterium tuberculosis DNA (PCR), mikroskopi, kultur, Time To Positivity (TTP) i flytende kultur, IGRA-test (hvis utført), historie med tidligere behandlinger, lokalisering av lungelesjoner, tilstedeværelse av ekstrapulmonale steder;
• terapeutiske variabler: start/slutt av behandling, behandlingsavbrudd, dose mg/kg, administreringsvei.

Pasientene vil få standard antituberkulære legemidler i henhold til internasjonale retningslinjer (RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg maksimal dose 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg maksimal dose 2000 mg) i fasten tilstand, en gang om dagen.

For å måle plasmakonsentrasjoner vil det bli tatt fire blodprøver (litiumheparin 7 ml rør) 0, 2, 4 og 6 timer etter dose. Denne analysen vil bli utført 7 og 14 dager etter begynnelsen av anti-TB-behandling.

For den farmakogenetiske analysen vil en blodprøve (EDTA 4 ml rør) bli tatt ved baseline.

Sputumprøver vil bli samlet ved baseline, 7 og 14 dager for mykobakteriell kultur.

Legebesøk og blodprøver (for LFT) vil bli utført ved baseline, 7 og 14 dager for å undersøke nevro- og levertoksisitet.

Farmakokinetikk Etter innsamlingen vil prøvene sentrifugeres (3000 omdreininger min-1 ved 4°C i 10 minutter) og plasma fryses ved -20°C i 2 alikvoter (1 ml volum) og leveres til laboratoriet til Farmakokinetikk og farmakogenetikk ved Universitetet i Torino Amedeo di Savoia sykehus, ASLTO2, Torino, Italia.

Plasmakonsentrasjoner av alle fire legemidlene vil bli målt ved hjelp av væskekromatografi kombinert med tandem massespektroskopi (som tillater høy følsomhet til tross for små prøvevolumer). Innsamlede konsentrasjon-tidsdata vil bli evaluert ved en ikke-kompartmental tilnærming for å karakterisere de farmakokinetiske egenskapene ved steady-state. AUC, maksimum (Cmax) og minimum (Cmin) legemiddelnivåer og plasmaeliminasjonshalveringstid vil bli brukt for å vurdere de enzymatiske induksjonsegenskapene til disse legemidlene. Farmakogenomikk (PG) DNA vil bli ekstrahert fra fullblod ved hjelp av QIamp DNA Mini Kit (Quiagen, Valencia, CA). Renset og eluert DNA vil bli direkte brukt for sanntids PCR (BIORAD, Milano, Italia) reaksjon. Alleldiskrimineringsanalysen vil bli utført ved å bruke TaqMan-analysene (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Analyserte SNP-er vil være:

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) og OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs247217 G457), Bs247217 G457).

og NAT2 G>A (rs1799930). Tørkede blodflekker (DBS) og Tørkede plasmaflekker (DPS) Metode for bestemmelse av plasmakonsentrasjoner på DPSer vil bli utviklet og validert av vårt laboratorium. I studien vil blodprøvene for evaluering på DPS-er kun innhentes fra forsøkspersoner ved instituttet vårt. Etter sentrifugering (3000 omdreininger min-1 ved 4 °C i 10 minutter) vil 100 μl plasma bli flekket på hvert glassfilter (kjøpt fra Laboratori Biomicron srl, Italia) og brukt til farmakokinetisk (PK) analyse. Det resterende plasmaet vil bli brukt som kontroller i analysen.

For den farmakogenetiske (PG) analysen vil venøse blodprøver bli tatt fra alle forsøkspersoner, og fullblod (50 μl per punkt) vil bli oppdaget på DBS Whatman 903 proteinsparekort (VWR International, Milano, Italia).

DBS legges inn i en foliepose med tørkemiddel (Foil Bag and Desiccant Packs, kjøpt fra Laboratori Biomicron srl, Italia) og deretter lagret i romtemperatur. Etter maksimalt 30 dager vil prøver bli levert til Laboratory of Pharmacokinetics and Pharmacogenetics ved University of Torino Amedeo di Savoia Hospital, ASLTO2, Torino, Italia. De vil bli lagret ved -20°C inntil analyse skal utføres (innen 3 måneder fra innsamling).

Tid til positivitet Tid til positivitet på sputumkulturer ved baseline, 7 og 14 dager vil bli beregnet ved hjelp av programvaren BD Epicenter integrert i BACTEC MGIT System (Mycobacteria Growth Indication Tube) 960. Standardtid er 42 dager.