Personalisering af antiTB-behandling: Evaluering af farmakologiske determinanter for behandlingsrespons (PAT)

En longitudinel observationel multicentreret undersøgelse vil blive udført i patienter med diagnosen aktiv pulmonal TB.

Følgende variable vil blive registreret:

• demografiske variabler: alder, køn, etnicitet, SNP'er for NAT2, SLCO1B1, ABCB1 og VDR;
• kliniske variabler: vægt, højde, nyrefunktionstest, leverfunktionstest, vitamin D (25-OH vitamin D) niveau, albuminæmi, serologi for HIV, HCV, tilstedeværelse af komorbiditeter (f.eks. diabetes mellitus), synsstyrketest, tilstedeværelse af neuropatiske symptomer;
• mikrobiologiske variabler: fænotypiske og genotypiske lægemiddelfølsomhedstestresultater, sputum Mycobacterium tuberculosis DNA (PCR), mikroskopi, kultur, Time To Positivity (TTP) i flydende kultur, IGRA-test (hvis udført), historie med tidligere behandlinger, lokalisering af lungelæsioner, tilstedeværelse af ekstrapulmonale steder;
• terapeutiske variabler: start/afslutning af behandling, behandlingsafbrydelser, dosis mg/kg, indgivelsesvej.

Patienterne vil modtage standard antituberkulære lægemidler i henhold til internationale retningslinjer (RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg maksimal dosis 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg maksimal dosis 2000 mg) i fasten tilstand, en gang dagligt.

For at måle plasmakoncentrationer vil der blive udtaget fire blodprøver (lithium heparin 7 ml rør) 0, 2, 4 og 6 timer efter dosis. Denne analyse vil blive udført 7 og 14 dage efter påbegyndelse af anti-TB-behandling.

Til den farmakogenetiske analyse vil der blive udtaget en blodprøve (EDTA 4 ml rør) ved baseline.

Sputumprøver vil blive indsamlet ved baseline, 7 og 14 dage til mykobakteriel kultur.

Lægebesøg og blodprøver (for LFT'er) vil blive udført ved baseline, 7 og 14 dage for at undersøge neuro- og hepatotoksicitet.

Farmakokinetik Efter indsamlingen vil prøverne blive centrifugeret (3000 omdr. min-1 ved 4°C i 10 minutter), og plasma vil blive frosset ved -20°C i 2 alikvoter (1 ml volumen) og vil blive leveret til laboratoriet for Farmakokinetik og farmakogenetik ved University of Torino Amedeo di Savoia Hospital, ASLTO2, Torino, Italien.

Plasmakoncentrationer af alle fire lægemidler vil blive målt ved hjælp af væskekromatografi kombineret med tandem massespektroskopi (hvilket tillader høj følsomhed på trods af små prøvevolumener). Indsamlede koncentration-tidsdata vil blive evalueret ved en ikke-kompartmentel tilgang til karakterisering af de farmakokinetiske egenskaber ved steady-state. AUC, maksimum (Cmax) og minimum (Cmin) lægemiddelniveauer og plasmaelimineringshalveringstid vil blive brugt til at vurdere disse lægemidlers enzymatiske induktionsegenskaber. Pharmacogenomics (PG) DNA vil blive ekstraheret fra fuldblod ved hjælp af QIamp DNA Mini Kit (Quiagen, Valencia, CA). Oprenset og elueret DNA vil blive direkte brugt til real-time PCR (BIORAD, Milano, Italia) reaktion. Den alleliske diskriminationsanalyse vil blive udført ved hjælp af TaqMan-assays (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Analyserede SNP'er vil være:

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) og OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs247267 G457), (rs247217 G45).

og NAT2 G>A (rs1799930). Tørrede blodpletter (DBS'er) og Tørrede plasmapletter (DPS'er) Metode til bestemmelse af plasmakoncentrationer på DPS'er vil blive udviklet og valideret af vores laboratorium. I undersøgelsen vil blodprøverne til evaluering på DPS'er kun blive indhentet fra forsøgspersoner fra vores institut. Efter centrifugering (3000 omdr. min-1 ved 4°C i 10 minutter) vil 100 μl plasma blive plettet på hvert glasfilter (købt fra Laboratori Biomicron srl, Italien) og brugt til farmakokinetisk (PK) analyse. Det resterende plasma vil blive brugt som kontroller i analysen.

Til den farmakogenetiske (PG) analyse vil der blive udtaget venøse blodprøver fra alle forsøgspersoner, og fuldblod (50 μl pr. plet) vil blive spottet på DBS Whatman 903 proteinsparekort (VWR International, Milano, Italien).

DBS vil blive indsat i en foliepose med tørremiddel (Foliepose og Desiccant Packs, købt hos Laboratori Biomicron srl, Italien) og derefter opbevaret ved stuetemperatur. Efter maksimalt 30 dage vil prøver blive leveret til Laboratory of Pharmacokinetics and Pharmacogenetics på University of Torino Amedeo di Savoia Hospital, ASLTO2, Torino, Italien. De vil blive opbevaret ved -20°C indtil analyse vil blive udført (inden for 3 måneder fra indsamling).

Tid til positivitet Tid til positivitet på sputumkulturer ved baseline, 7 og 14 dage vil blive beregnet ved hjælp af software BD Epicenter integreret i BACTEC MGIT System (Mycobacteria Growth Indication Tube) 960. Standardtid er 42 dage.