Personalizace léčby antiTB: Hodnocení farmakologických determinantů odpovědi na léčbu (PAT)

U pacientů s diagnózou aktivní plicní TBC bude provedena longitudinální observační multicentrická studie.

Budou zaznamenány následující proměnné:

• demografické proměnné: věk, pohlaví, etnická příslušnost, SNP pro NAT2, SLCO1B1, ABCB1 a VDR;
• klinické proměnné: hmotnost, výška, testy renálních funkcí, jaterní testy, hladina vitaminu D (25-OH vitamin D), albuminémie, sérologie HIV, HCV, přítomnost komorbidit (např. diabetes mellitus), test zrakové ostrosti, přítomnost neuropatických symptomů;
• mikrobiologické proměnné: výsledky testu fenotypové a genotypové citlivosti na léky, sputum Mycobacterium tuberculosis DNA (PCR), mikroskopie, kultivace, Time To Positivity (TTP) v tekuté kultuře, IGRA test (pokud byl proveden), anamnéza předchozí léčby, lokalizace plicních lézí, přítomnost mimoplicních lokalizací;
• terapeutické proměnné: začátek/konec léčby, přerušení léčby, dávka mg/kg, způsob podání.

Pacienti budou dostávat standardní antituberkulární léky podle mezinárodních směrnic (RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg maximální dávka 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg maximální dávka 2000 mg) v pevném stavu, jednou denně.

Pro měření plazmatických koncentrací budou odebrány čtyři vzorky krve (7 ml zkumavky s lithiovým heparinem) 0, 2, 4 a 6 hodin po dávce. Tato analýza bude provedena 7 a 14 dní po začátku léčby proti TBC.

Pro farmakogenetickou analýzu bude odebrán vzorek krve (4 ml zkumavka EDTA) na základní linii.

Vzorky sputa budou odebírány na začátku, 7 a 14 dnů pro mykobakteriální kulturu.

Lékařské návštěvy a vzorky krve (pro LFT) budou provedeny na začátku, po 7 a 14 dnech, aby se zjistila neurotoxicita a hepatotoxicita.

Farmakokinetika Po odběru budou vzorky centrifugovány (3000 ot.min-1 při 4°C po dobu 10 minut) a plazma bude zmražena při -20°C ve 2 alikvotech (1 ml objemu) a dodána do laboratoře Farmakokinetika a farmakogenetika Univerzity v Turíně Nemocnice Amedeo di Savoia, ASLTO2, Turín, Itálie.

Plazmatické koncentrace všech čtyř léčiv budou měřeny pomocí kapalinové chromatografie spojené s tandemovou hmotnostní spektroskopií (umožňující vysokou citlivost i přes malé objemy vzorků). Shromážděná data koncentrace-čas budou vyhodnocena nekompartmentovým přístupem k charakterizaci farmakokinetických vlastností v ustáleném stavu. AUC, maximální (Cmax) a minimální (Cmin) hladiny léčiva a poločas eliminace z plazmy budou použity k posouzení enzymatických indukčních vlastností těchto léčiv. Farmakogenomická (PG) DNA bude extrahována z plné krve pomocí QIamp DNA Mini Kit (Quiagen, Valencia, CA). Purifikovaná a eluovaná DNA bude přímo použita pro reakci PCR v reálném čase (BIORAD, Milano, Italia). Analýza alelické diskriminace bude provedena pomocí testů TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Analyzované SNP budou:

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) a OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs24726174) (rs2472674A)

a NAT2 G>A (rs1799930). Dried blood spots (DBSs) a Dried plasma spots (DPSs) Metoda pro stanovení plazmatických koncentrací na DPS bude vyvinuta a validována naší laboratoří. Ve studii budou vzorky krve pro hodnocení na DPS získávány pouze od subjektů našeho ústavu. Po centrifugaci (3000 ot. min-1 při 4 °C po dobu 10 minut) se na každý skleněný filtr (zakoupený od Laboratori Biomicron srl, Itálie) nanese 100 μl plazmy a použije se pro farmakokinetickou (PK) analýzu. Zbývající plazma bude použita jako kontrola v analýze.

Pro farmakogenetickou (PG) analýzu budou odebrány vzorky žilní krve od všech subjektů a plná krev (50 μl na skvrnu) bude nanesena na DBS Whatman 903 protein saver cards (VWR International, Milán, Itálie).

DBS se vloží do fóliového sáčku s vysoušedlem (Foil Bag and Desiccant Packs, zakoupené od Laboratori Biomicron srl, Itálie) a poté se uloží při pokojové teplotě. Po maximálně 30 dnech budou vzorky dodány do Laboratoře farmakokinetiky a farmakogenetiky Univerzity v Turíně Nemocnice Amedeo di Savoia, ASLTO2, Turín, Itálie. Do provedení analýzy (do 3 měsíců od odběru) budou skladovány při -20°C.

Doba do pozitivity Doba do pozitivity na kulturách sputa na začátku, 7 a 14 dní, bude vypočítána pomocí softwaru BD Epicenter integrovaného v BACTEC MGIT System (Mycobacteria Growth Indication Tube) 960. Výchozí doba je 42 dní.