항결핵 치료의 개인화: 치료 반응의 약리학적 결정요인 평가 (PAT)

활동성 폐결핵 진단을 받은 환자를 대상으로 종단 관찰 다기관 연구를 실시할 예정입니다.

다음 변수가 기록됩니다.

• 인구 통계학적 변수: 연령, 성별, 민족, NAT2, SLCO1B1, ABCB1 및 VDR에 대한 SNP;
• 임상 변수: 체중, 키, 신장 기능 검사, 간 기능 검사, 비타민 D(25-OH 비타민 D) 수준, 알부민혈증, HIV, HCV에 대한 혈청학, 동반 질환(예: 진성 당뇨병), 시력 검사, 신경병증 증상의 존재;
• 미생물학적 변수: 표현형 및 유전자형 약물 감수성 테스트 결과, 가래 결핵균 DNA(PCR), 현미경 검사, 배양, 액체 배양에서의 TTP(Time To Positivity), IGRA 테스트(수행된 경우), 이전 치료 이력, 폐 병변 위치, 폐 외 위치의 존재;
• 치료 변수: 치료 시작/종료, 치료 중단, 용량 mg/kg, 투여 경로.

환자들은 고정 상태에서 국제 가이드라인(RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg 최대 용량 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg 최대 용량 2000 mg)에 따라 표준 항결핵제를 투여받게 되며, 매일 한 번.

혈장 농도를 측정하기 위해 4개의 혈액 샘플(리튬 헤파린 7ml 튜브)을 투여 후 0, 2, 4 및 6시간에 수집합니다. 이 분석은 항결핵 치료 시작 후 7일 및 14일에 수행됩니다.

약물 유전학 분석을 위해 혈액 샘플(EDTA 4ml 튜브)을 기준선에서 수집합니다.

마이코박테리아 배양을 위해 기준선인 7일 및 14일에 객담 샘플을 수집합니다.

신경 및 간독성을 조사하기 위해 기준선인 7일 및 14일에 의료 방문 및 혈액 샘플(LFT용)을 수행할 것입니다.

약동학 수집 후 샘플을 원심분리하고(4°C에서 10분 동안 3000 rev min-1) 혈장을 -20°C에서 2개의 분취량(부피 1mL)으로 냉동하여 실험실로 전달합니다. 이탈리아 토리노 ASLTO2 대학 토리노 아메데오 디 사보이아 병원의 약동학 및 약동학.

4가지 약물 모두의 혈장 농도는 탠덤 질량 분광법과 결합된 액체 크로마토그래피를 사용하여 측정됩니다(작은 시료량에도 불구하고 높은 감도 허용). 수집된 농도-시간 데이터는 정상 상태에서 약동학 특성을 특성화하기 위해 비구획 접근법으로 평가될 것입니다. AUC, 최대(Cmax) 및 최소(Cmin) 약물 수준 및 혈장 제거 반감기는 이러한 약물의 효소 유도 특성을 평가하는 데 사용됩니다. PG(Pharmacogenomics) DNA는 QIamp DNA Mini Kit(Quiagen, Valencia, CA)를 사용하여 전혈에서 추출됩니다. 정제 및 용출된 DNA는 real-time PCR(BIORAD, Milano, Italia) 반응에 직접 사용됩니다. 대립 유전자 변별 분석은 TaqMan 분석(Applied Biosystems, Foster City, CA)을 사용하여 수행됩니다.

분석된 SNP는 다음과 같습니다.

ABCB1 3435C>T(rs1045642), OATP1B1 521T>C(rs4149056) e OATP1B1 85-7793T>C(rs4149032), PXR 63396C>T(rs2472677), BsmIG>A(rs1544410).

및 NAT2 G>A(rs1799930). 건조혈반(DBSs) 및 건조혈반반점(DPSs) DPS의 혈장 농도를 결정하기 위한 방법은 우리 연구실에서 개발 및 검증될 것입니다. 연구에서 DPS에 대한 평가를 위한 혈액 샘플은 우리 연구소의 피험자에게서만 얻을 것입니다. 원심분리(3000 rev min-1, 4°C에서 10분) 후 100 μl 혈장을 각 유리 필터(이탈리아 소재 Laboratori Biomicron srl에서 구입)에 점적하고 약동학(PK) 분석에 사용합니다. 나머지 혈장은 분석에서 대조군으로 사용됩니다.

약리 유전학(PG) 분석을 위해 모든 피험자로부터 정맥혈 샘플을 채취하고 전혈(점당 50μl)을 DBS Whatman 903 단백질 세이버 카드(VWR International, Milan, Italy)에 표시합니다.

DBS는 건조제와 함께 포일 백(Foil Bag and Desiccant Packs, Laboratori Biomicron srl, Italy에서 구입)에 삽입한 다음 실온에서 보관합니다. 최대 30일 후 샘플은 이탈리아 토리노 ASLTO2에 있는 토리노 대학교 아메데오 디 사보이아 병원의 약동학 및 약동학 연구소로 전달됩니다. 분석이 수행될 때까지(수집 후 3개월 이내) -20°C에서 보관됩니다.

양성 시간 BACTEC MGIT 시스템(Mycobacteria Growth Indication Tube) 960에 통합된 소프트웨어 BD Epicenter를 사용하여 기준선인 7일 및 14일에서 가래 배양 양성 시간을 계산합니다. 기본 시간은 42일입니다.