Персонализация противотуберкулезного лечения: оценка фармакологических детерминант ответа на лечение (PAT)

Продольное обсервационное многоцентровое исследование будет проведено у пациентов с диагнозом активного туберкулеза легких.

Будут записаны следующие переменные:

• демографические переменные: возраст, пол, этническая принадлежность, SNP для NAT2, SLCO1B1, ABCB1 и VDR;
• клинические переменные: вес, рост, функциональные пробы почек, функциональные пробы печени, уровень витамина D (25-OH витамина D), альбуминемия, серология на ВИЧ, ВГС, наличие сопутствующих заболеваний (например, сахарный диабет), проверка остроты зрения, наличие нейропатической симптоматики;
• микробиологические переменные: результаты теста на фенотипическую и генотипическую лекарственную чувствительность, ДНК Mycobacterium tuberculosis в мокроте (ПЦР), микроскопия, посев, время до положительного результата (TTP) в жидкой культуре, тест IGRA (если проводился), история предыдущего лечения, расположение поражений легких, наличие внелегочных локализаций;
• терапевтические переменные: начало/окончание лечения, перерывы в лечении, доза мг/кг, способ введения.

Пациенты будут получать стандартные противотуберкулезные препараты в соответствии с международными рекомендациями (РИФ 10 мг/кг, изониазид 5 мг/кг, максимальная доза 300 мг, ЭТБ 15-20 мг/кг, ПЗА 25 мг/кг, максимальная доза 2000 мг) в укрепленном состоянии, раз в день.

Для измерения концентрации в плазме будут взяты четыре образца крови (пробирки с литий-гепарином 7 мл) через 0, 2, 4 и 6 часов после введения дозы. Этот анализ будет проводиться через 7 и 14 дней после начала противотуберкулезного лечения.

Для фармакогенетического анализа на исходном уровне будет взят образец крови (пробирка 4 мл с ЭДТА).

Образцы мокроты будут собираться на исходном уровне, через 7 и 14 дней для посева микобактерий.

Медицинские визиты и образцы крови (для LFT) будут выполняться на исходном уровне, через 7 и 14 дней для исследования нейро- и гепатотоксичности.

Фармакокинетика После сбора образцы центрифугируют (3000 об/мин при 4°C в течение 10 мин), плазму замораживают при -20°C в 2 аликвотах (объемом 1 мл) и доставляют в лабораторию Фармакокинетика и фармакогенетика Больницы Амедео ди Савойя Туринского университета, ASLTO2, Турин, Италия.

Концентрации всех четырех препаратов в плазме будут измеряться с помощью жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектроскопией (что обеспечивает высокую чувствительность, несмотря на небольшие объемы пробы). Собранные данные о зависимости концентрации от времени будут оцениваться с помощью нераздельного подхода для характеристики фармакокинетических свойств в стационарном состоянии. AUC, максимальный (Cmax) и минимальный (Cmin) уровни препарата и период полувыведения из плазмы будут использоваться для оценки ферментативной индукции этих препаратов. ДНК для фармакогеномики (PG) будет извлечена из цельной крови с использованием мини-набора QIamp DNA (Quiagen, Валенсия, Калифорния). Очищенная и элюированная ДНК будет непосредственно использоваться для ПЦР в реальном времени (BIORAD, Милан, Италия). Анализ дискриминации аллелей будет проводиться с использованием анализов TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Анализируемые SNP будут:

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) и OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs2472677), BsmI G>A (rs1544410).

и NAT2 G>A (rs1799930). Сухие пятна крови (DBS) и сухие пятна плазмы (DPS) Метод определения концентрации в плазме на DPS будет разработан и одобрен нашей лабораторией. В исследовании образцы крови для оценки на ДПС будут получены только от субъектов нашего института. После центрифугирования (3000 об/мин при 4°C в течение 10 мин) 100 мкл плазмы наносят на каждый стеклянный фильтр (приобретенный у Laboratori Biomicron srl, Италия) и используют для фармакокинетического (ФК) анализа. Оставшаяся плазма будет использоваться в качестве контроля в анализе.

Для фармакогенетического (PG) анализа образцы венозной крови будут получены от всех субъектов, а цельная кровь (50 мкл на пятно) будет нанесена на карты сохранения белка DBS Whatman 903 (VWR International, Милан, Италия).

DBS помещают в пакет из фольги с влагопоглотителем (пакет из фольги и пакеты с влагопоглотителем, приобретенные в Laboratori Biomicron srl, Италия), а затем хранят при комнатной температуре. Максимум через 30 дней образцы будут доставлены в Лабораторию фармакокинетики и фармакогенетики Больницы Амедео ди Савойя Туринского университета, ASLTO2, Турин, Италия. Они будут храниться при температуре -20°C до проведения анализа (в течение 3 месяцев с момента сбора).

Время до получения положительного результата. Время до получения положительного результата при посеве мокроты на исходном уровне, через 7 и 14 дней будет рассчитываться с использованием программного обеспечения BD Epicenter, интегрированного в систему BACTEC MGIT (пробирка для индикации роста микобактерий) 960. Время по умолчанию — 42 дня.