Personalisatie van antitbc-behandeling: evaluatie van farmacologische determinanten van behandelingsrespons (PAT)

Er zal een longitudinale observationele multicentrische studie worden uitgevoerd bij patiënten met de diagnose actieve longtuberculose.

De volgende variabelen worden geregistreerd:

• demografische variabelen: leeftijd, geslacht, etniciteit, SNP's voor NAT2, SLCO1B1, ABCB1 en VDR;
• klinische variabelen: gewicht, lengte, nierfunctietesten, leverfunctietesten, vitamine D (25-OH vitamine D)-spiegel, albuminemie, serologie voor HIV, HCV, aanwezigheid van comorbiditeiten (bijv. diabetes mellitus), gezichtsscherptetest, aanwezigheid van neuropathische symptomen;
• microbiologische variabelen: fenotypische en genotypische testresultaten voor geneesmiddelgevoeligheid, sputum Mycobacterium tuberculosis DNA (PCR), microscopie, kweek, Time To Positivity (TTP) in vloeibare kweek, IGRA-test (indien uitgevoerd), geschiedenis van eerdere behandelingen, locatie van longlaesies, aanwezigheid van extrapulmonale locaties;
• therapeutische variabelen: start/einde van de behandeling, onderbrekingen van de behandeling, dosis mg/kg, toedieningsweg.

De patiënten zullen standaard antituberculeuze geneesmiddelen krijgen volgens internationale richtlijnen (RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg maximale dosis 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg maximale dosis 2000 mg) in nuchtere toestand, een keer per dag.

Om de plasmaconcentraties te meten, zullen vier bloedmonsters (Lithium heparine 7 ml buisjes) worden verzameld op 0, 2, 4 en 6 uur na de dosis. Deze analyse wordt uitgevoerd op 7 en 14 dagen na het begin van de anti-tbc-behandeling.

Voor de farmacogenetische analyse zal een bloedstaal (EDTA 4 ml tube) afgenomen worden bij de basislijn.

Sputummonsters worden verzameld bij baseline, 7 en 14 dagen voor mycobacteriële kweek.

Medische bezoeken en bloedmonsters (voor LFT's) zullen worden uitgevoerd bij baseline, 7 en 14 dagen om neuro- en hepatotoxiciteit te onderzoeken.

Farmacokinetiek Na de verzameling worden de monsters gecentrifugeerd (3000 omw/min-1 bij 4°C gedurende 10 min) en wordt het plasma ingevroren bij -20°C in 2 aliquots (1 ml volume) en afgeleverd aan het Laboratorium voor Farmacokinetiek en farmacogenetica van het Amedeo di Savoia-ziekenhuis van de Universiteit van Turijn, ASLTO2, Turijn, Italië.

De plasmaconcentraties van alle vier de geneesmiddelen zullen worden gemeten met behulp van vloeistofchromatografie in combinatie met tandem-massaspectroscopie (wat een hoge gevoeligheid mogelijk maakt ondanks kleine monstervolumes). Verzamelde concentratie-tijdgegevens zullen worden geëvalueerd door een niet-compartimentele benadering om de farmacokinetische eigenschappen bij steady-state te karakteriseren. AUC, maximale (Cmax) en minimale (Cmin) geneesmiddelspiegels en plasma-eliminatiehalfwaardetijd zullen worden gebruikt om de enzymatische inductie-eigenschappen van deze geneesmiddelen te beoordelen. Farmacogenomics (PG) DNA zal worden geëxtraheerd uit volbloed met behulp van QIamp DNA Mini Kit (Quiagen, Valencia, CA). Gezuiverd en geëlueerd DNA zal direct worden gebruikt voor real-time PCR-reacties (BIORAD, Milaan, Italië). De allelische discriminatie-analyse zal worden uitgevoerd met behulp van de TaqMan-assays (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Geanalyseerde SNP's zijn:

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) e OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs2472677), BsmI G>A (rs1544410).

en NAT2 G>A (rs1799930). Dried blood spots (DBS'en) en Dried plasma spots (DPS'en) Methode voor de bepaling van plasmaconcentraties op DPS'en zal door ons laboratorium worden ontwikkeld en gevalideerd. In het onderzoek zullen de bloedmonsters voor evaluatie op DPS'en alleen worden verkregen van proefpersonen van ons instituut. Na centrifugatie (3000 omwentelingen per minuut-1 bij 4°C gedurende 10 min) wordt 100 μl plasma op elk glasfilter (gekocht bij Laboratori Biomicron srl, Italië) gedruppeld en gebruikt voor farmacokinetische (PK) analyse. Het resterende plasma wordt gebruikt als controles in de analyse.

Voor de farmacogenetische (PG) analyse zullen veneuze bloedmonsters worden verkregen van alle proefpersonen en volbloed (50 μl per plek) zal worden gespot op DBS Whatman 903 eiwitbesparingskaarten (VWR International, Milaan, Italië).

DBS wordt in een foliezak met droogmiddel geplaatst (foliezak en droogmiddelpakketten, gekocht bij Laboratori Biomicron srl, Italië) en vervolgens bij kamertemperatuur bewaard. Na maximaal 30 dagen worden de monsters afgeleverd bij het Laboratorium voor Farmacokinetiek en Farmacogenetica van het Amedeo di Savoia-ziekenhuis van de Universiteit van Turijn, ASLTO2, Turijn, Italië. Ze worden bewaard bij -20°C totdat de analyse wordt uitgevoerd (binnen 3 maanden na verzameling).

Tijd tot positiviteit Tijd tot positiviteit op sputumkweken bij baseline, 7 en 14 dagen worden berekend met behulp van software BD Epicenter geïntegreerd in BACTEC MGIT System (Mycobacteria Growth Indication Tube) 960. De standaardtijd is 42 dagen.