Personalización del tratamiento antituberculoso: evaluación de los determinantes farmacológicos de la respuesta al tratamiento (PAT)

Se realizará un estudio multicéntrico observacional longitudinal en pacientes con diagnóstico de TB pulmonar activa.

Se registrarán las siguientes variables:

• variables demográficas: edad, género, etnia, SNPs para NAT2, SLCO1B1, ABCB1 y VDR;
• variables clínicas: peso, talla, pruebas de función renal, pruebas de función hepática, nivel de vitamina D (25-OH vitamina D), albuminemia, serología para VIH, VHC, presencia de comorbilidades (ej. diabetes mellitus), prueba de agudeza visual, presencia de síntomas neuropáticos;
• variables microbiológicas: resultados de pruebas de sensibilidad a fármacos fenotípicas y genotípicas, ADN de Mycobacterium tuberculosis en esputo (PCR), microscopía, cultivo, tiempo de positividad (TTP) en cultivo líquido, prueba IGRA (si se realizó), antecedentes de tratamientos previos, ubicación de lesiones pulmonares, presencia de localizaciones extrapulmonares;
• variables terapéuticas: inicio/finalización del tratamiento, interrupciones del tratamiento, dosis mg/kg, vía de administración.

Los pacientes recibirán medicamentos antituberculosos estándar de acuerdo con las guías internacionales (RIF 10 mg/kg, INH 5 mg/kg dosis máxima 300 mg, ETB 15-20 mg/kg, PZA 25 mg/kg dosis máxima 2000 mg) en condiciones fijas, una vez al día.

Para medir las concentraciones plasmáticas, se recogerán cuatro muestras de sangre (tubos de heparina de litio de 7 ml) a las 0, 2, 4 y 6 horas después de la dosis. Este análisis se realizará a los 7 y 14 días del inicio del tratamiento antituberculoso.

Para el análisis farmacogenético se recogerá una muestra de sangre (tubo de EDTA de 4 ml) al inicio.

Las muestras de esputo se recogerán al inicio del estudio, 7 y 14 días para el cultivo de micobacterias.

Se realizarán visitas médicas y muestras de sangre (para LFT) al inicio del estudio, 7 y 14 días para investigar neuro y hepatotoxicidad.

Farmacocinética Luego de la recolección las muestras serán centrifugadas (3000 rev min-1 a 4°C por 10 min) y el plasma será congelado a - 20°C en 2 alícuotas (1 mL de volumen) y será entregado al Laboratorio de Farmacocinética y Farmacogenética del Hospital Amedeo di Savoia de la Universidad de Torino, ASLTO2, Torino, Italia.

Las concentraciones plasmáticas de los cuatro fármacos se medirán mediante cromatografía líquida junto con espectroscopia de masas en tándem (lo que permite una alta sensibilidad a pesar de los pequeños volúmenes de muestra). Los datos de concentración-tiempo recopilados se evaluarán mediante un enfoque no compartimental para caracterizar las propiedades farmacocinéticas en estado estacionario. El AUC, los niveles máximos (Cmax) y mínimos (Cmin) del fármaco y la semivida de eliminación plasmática se utilizarán para evaluar las propiedades de inducción enzimática de estos fármacos. El ADN de farmacogenómica (PG) se extraerá de la sangre total utilizando el kit QIamp DNA Mini (Quiagen, Valencia, CA). El ADN purificado y eluido se utilizará directamente para la reacción de PCR en tiempo real (BIORAD, Milán, Italia). El análisis de discriminación alélica se realizará utilizando los ensayos TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Los SNP analizados serán:

ABCB1 3435C>T (rs1045642), OATP1B1 521T>C (rs4149056) y OATP1B1 85-7793T>C (rs4149032), PXR 63396C>T (rs2472677), BsmI G>A (rs1544410).

y NAT2 G>A (rs1799930). Manchas de sangre seca (DBS) y manchas de plasma seco (DPS) Nuestro laboratorio desarrollará y validará el método para la determinación de las concentraciones de plasma en DPS. En el estudio, las muestras de sangre para evaluación en DPS se obtendrán solo de sujetos de nuestro instituto. Después de la centrifugación (3000 rev min-1 a 4 °C durante 10 min), se colocarán 100 μ l de plasma en cada filtro de vidrio (adquirido a Laboratori Biomicron srl, Italia) y se utilizará para el análisis farmacocinético (PK). El plasma restante se utilizará como control en el análisis.

Para el análisis farmacogenético (PG), se obtendrán muestras de sangre venosa de todos los sujetos y se colocará sangre completa (50 μ l por punto) en tarjetas DBS Whatman 903 protein saver (VWR International, Milán, Italia).

El DBS se insertará en una bolsa de aluminio con desecante (Bolsa de aluminio y paquetes desecantes, adquiridos en Laboratori Biomicron srl, Italia) y luego se almacenará a temperatura ambiente. Después de un máximo de 30 días, las muestras se enviarán al Laboratorio de Farmacocinética y Farmacogenética del Hospital Amedeo di Savoia de la Universidad de Torino, ASLTO2, Torino, Italia. Se almacenarán a - 20°C hasta que se realice el análisis (dentro de los 3 meses desde la recolección).

Tiempo hasta la positividad El tiempo hasta la positividad en los cultivos de esputo al inicio, 7 y 14 días se calculará utilizando el software BD Epicenter integrado en el sistema BACTEC MGIT (tubo de indicación de crecimiento de micobacterias) 960. El tiempo predeterminado es de 42 días.