Étude organoïde R334W

Justification : La mucoviscidose est causée par des mutations dans le canal « régulateur de la conductance transmembranaire de la fibrose kystique (CFTR) » qui code pour la protéine CFTR, un canal anionique. Plus de 2000 mutations CFTR différentes ont été décrites. Les médicaments modulateurs CFTR traitent le défaut protéique sous-jacent en améliorant le repliement et le trafic de la protéine naissante (correcteur) ou en améliorant l'ouverture des canaux au niveau de la membrane cellulaire (potentiateur). Dans l'Union européenne, le traitement par modulateurs CFTR n'a été approuvé que pour les patients homozygotes pour F508del ou porteurs d'une mutation de classe III ou d'un nombre limité de mutations fonctionnelles résiduelles.

La mutation R334W-CFTR est une mutation rare (270 sujets dans le European CF Registry ECFSPR), décrite dans CFTR2 comme pathogène. Cliniquement, il existe des preuves d'une fonction CFTR résiduelle chez ces sujets puisque seulement 36 % des patients atteints de R334W sont insuffisants pancréatiques et l'âge moyen de tous les patients dans la base de données CFTR2 est un peu plus âgé (22 ans) que les patients atteints de mucoviscidose et de 2 maladies connues. causant des mutations (20 ans). D'autre part, les patients atteints de R334W ont en moyenne une forte teneur en chlorure de la sueur (moyenne 95 mmol/L) et une maladie pulmonaire sévère ; leur VEMS moyen rapporté à la base de données CFTR [1] est très similaire à celui des autres patients porteurs de la mutation F508del CF. À la clinique de Louvain, nous avons un sujet avec R334W/F508del qui a 60 ans et qui a une maladie pulmonaire très grave (FEV1 dans la quarantaine).

Lorsqu'elle est étudiée dans des cellules FRT (thyroïde de rat Fisher) et comparée au type sauvage, la mutation R334W donnerait lieu à des niveaux normaux de protéines au niveau de la membrane cellulaire, mais à une fonction très réduite (mesure du courant de court-circuit) de 1,3 % des cellules sauvages. taper. En revanche le sauvetage de la fonction CFTR après ajout du potentialisateur ivacaftor est très limité : de 1 % à 5 % de la normale.

Contrairement à l'expression dans des systèmes hétérologues, les organoïdes intestinaux permettent l'étude de la fonction CFTR dans du matériel spécifique au patient. Lorsqu'elle a été testée dans des organoïdes intestinaux du patient atteint de F508del/R334W à la clinique de Louvain, cette mutation a entraîné une fonction résiduelle documentée par un gonflement induit par la forskoline à des concentrations plus élevées de forskoline, même avant l'ajout d'un potentialisateur ou d'un correcteur CFTR. Cependant, l'ajout d'ivacaftor et, dans une moindre mesure, de lumacaftor entraîne un rétablissement modéré à bon de la fonction ; le degré de sauvetage (résultat FIS) est intermédiaire entre celui observé chez les sujets homozygotes F508del et les sujets porteurs d'une mutation de classe III. Des résultats comparables sont obtenus dans le laboratoire du prof M Amaral chez 3 sujets hétérozygotes composés pour F508del/R334W (résultats dans les cellules nasales, et les organoïdes intestinaux). Un sauvetage fonctionnel CFTR dans les organoïdes d'un sujet avec le R334W / R746X est également rapporté par le groupe néerlandais d'Utrecht dans les organoïdes; le gonflement induit par la forskoline induit par luma / iva était à nouveau entre la réponse observée avec iva chez les organoïdes de sujets présentant des mutations de déclenchement et par luma / iva chez les organoïdes dérivés de sujets homozygotes F508del. Ces résultats suggèrent que le R334W pourrait être un candidat approprié pour le traitement TEZ/IVA.

L'étude décrite dans ce protocole sera la première étape d'un projet plus vaste qui comprend également un essai clinique. Avec la présente étude, la réponse des organoïdes de patients porteurs de la mutation R334W aux

Les modulateurs CFTR seront testés pour identifier la réponse in vitro. Un essai clinique interventionnel, soumis dans un protocole séparé, évaluera ensuite la réponse aux modulateurs in vivo chez les mêmes patients. L'essai clinique ne fait donc pas partie de ce protocole.