Estudo Organoide R334W

Justificativa: a FC é causada por mutações no canal 'Regulador de Condutância Transmembrana da Fibrose Cística (CFTR)', que codifica a proteína CFTR, um canal aniônico. Mais de 2.000 mutações CFTR diferentes foram descritas. Os medicamentos moduladores do CFTR tratam o defeito da proteína subjacente, melhorando o dobramento e o tráfego da proteína nascente (corretor) ou melhorando a abertura do canal na membrana celular (potenciador). Na União Européia, o tratamento com moduladores CFTR foi aprovado apenas para pacientes homozigotos para F508del ou portadores de uma mutação de classe III ou uma de um número limitado de mutações de função residual.

A mutação R334W-CFTR é uma mutação rara (270 indivíduos no European CF Registry ECFSPR), descrita no CFTR2 como causadora da doença. Clinicamente, há evidências de função CFTR residual nesses indivíduos, pois apenas 36% dos pacientes com R334W são insuficientes pancreáticos e a idade média de todos os pacientes no banco de dados CFTR2 é um pouco mais velha (22 anos) do que pacientes com FC e 2 doenças conhecidas causando mutações (20 anos). Por outro lado, pacientes com R334W apresentam, em média, alto teor de cloreto no suor (média de 95 mmol/L) e doença pulmonar grave; seu VEF1 médio relatado no banco de dados CFTR [1] é muito semelhante ao de outros pacientes com a mutação F508del CF causadora. Na clínica de Leuven, temos um paciente com R334W/F508del que tem 60 anos e tem uma doença pulmonar muito grave (FEV1 na casa dos 40).

Quando estudada em células FRT (Fisher rat thyroid) e comparada com o tipo selvagem, a mutação R334W é relatada como dando origem a níveis normais de proteína na membrana celular, mas função muito diminuída (medição de corrente de curto-circuito) de 1,3% de selvagem tipo. Por outro lado, há um resgate muito limitado da função CFTR após a adição do potencializador ivacaftor: de 1% a 5% do normal.

Em contraste com a expressão em sistemas heterólogos, os organoides intestinais permitem o estudo da função CFTR em material específico do paciente. Quando testada em organoides intestinais do paciente com F508del/R334W na clínica de Leuven, essa mutação resultou em alguma função residual documentada por inchaço induzido por forscolina em concentrações mais altas de forscolina, mesmo antes da adição do potencializador ou corretor CFTR. No entanto, a adição de ivacaftor e, em menor grau, lumacaftor resulta em recuperação moderada a boa da função; o grau de resgate (resultado FIS) é intermediário entre o observado em indivíduos homozigotos F508del e indivíduos com mutação de classe III. Resultados comparáveis ​​são obtidos no laboratório do prof. M Amaral em 3 indivíduos compostos heterozigotos para F508del/R334W (resultados em células nasais e organoides intestinais). Um resgate funcional CFTR em organoides de um sujeito com o R334W/R746X também é relatado pelo grupo holandês de Utrecht em organoides; o inchaço induzido por forscolina induzido por luma/iva estava novamente entre a resposta observada com iva em organoides de indivíduos com mutações de gating e por luma/iva em organoides derivados de indivíduos homozigotos F508del. Esses achados sugerem que o R334W pode ser um candidato adequado para o tratamento com TEZ/IVA.

O estudo descrito neste protocolo será a primeira etapa de um projeto maior que inclui também um ensaio clínico. Com o presente estudo, a resposta dos organoides de pacientes com a mutação R334W aos

Os moduladores CFTR serão testados para identificar a resposta in vitro. Um ensaio clínico intervencionista, submetido como um protocolo separado, avaliará posteriormente a resposta aos moduladores in vivo nos mesmos pacientes. O ensaio clínico não faz parte deste protocolo.